胡曉菡，田新宇，沈 瀚

0 引 言

肝細(xì)胞肝癌是肝癌的常見類型，是一種高死亡率的原發(fā)性肝癌。近年來，新發(fā)病例數(shù)逐年上升，并有年輕化趨勢。由于其進(jìn)展迅速，很多患者發(fā)現(xiàn)時已經(jīng)處于疾病的中晚期，導(dǎo)致其預(yù)后較差[1]。因此深入研究肝細(xì)胞肝癌的疾病發(fā)展機制，尋找其潛在腫瘤標(biāo)志物用于患者的早期診斷顯得尤為重要。腫瘤標(biāo)志物在腫瘤的診斷、治療效果及預(yù)后的預(yù)測方面有著廣泛的應(yīng)用。通常在肝癌疾病中，甲胎蛋白(AFP)被用作血清的生物標(biāo)志物，在檢測肝癌的發(fā)病和復(fù)發(fā)方面起著重要的作用，雖然具有一定的特異性，但其干擾因素較多，且在肝細(xì)胞肝癌患者中經(jīng)常保持在正常范圍內(nèi)[2-3]。成纖維細(xì)胞生長因子19(fibroblast growth factor 19，F(xiàn)GF19)大部分在肝內(nèi)表達(dá)，通過成纖維細(xì)胞生長因子受體促進(jìn)細(xì)胞的分化、參與損傷組織修復(fù)，血管生成及干細(xì)胞增殖分化等[4]。研究發(fā)現(xiàn)，以自分泌方式產(chǎn)生的FGF19激活了成纖維細(xì)胞生長因子19/成纖維細(xì)胞生長因子4(FGF19/FGFR4)信號，參與了肝癌的發(fā)展[5]。還有報道顯示，肝癌患者血清FGF19的過度表達(dá)與疾病預(yù)后不良有一定關(guān)聯(lián)[6]，但其是否能在肝細(xì)胞肝癌中作為一個生物標(biāo)志物尚不清楚。本課題組從2008年開始對在南京鼓樓醫(yī)院診斷為慢性乙肝感染人群進(jìn)行長期隨訪，近年來發(fā)現(xiàn)部分隨訪者發(fā)展為肝癌患者，在這些隨訪者中收集經(jīng)病理學(xué)確診為肝細(xì)胞肝癌患者臨床資料，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗法(ELISA)檢測肝細(xì)胞肝癌患者以及慢性肝炎和健康人群血清FGF19的水平，進(jìn)一步探討其在肝細(xì)胞肝癌患者早期診斷中的價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料收集2017年10月至2019年10月鼓樓醫(yī)院經(jīng)病理學(xué)確診為肝細(xì)胞肝癌患者97例(肝細(xì)胞肝癌組)，其中男76例，女21例，平均年齡57歲；以及經(jīng)實驗室數(shù)據(jù)、臨床表現(xiàn)和組織學(xué)診斷為慢性肝炎患者102例(慢性肝炎組)，男71例，女31例，平均年齡51歲。并選取同期73例健康人作為健康對照組。排除其他惡性腫瘤疾病及免疫性疾病。本研究經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)(批準(zhǔn)號：2008022)，所有參與者及家屬均簽署了知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集及檢測肝細(xì)胞肝癌組于術(shù)前清晨空腹抽取肘靜脈血5 mL，3500×g離心5 min，吸取血清放置于-80 ℃冰箱保存。健康對照組及慢性肝炎組于清晨空腹抽取肘靜脈血5 mL，樣本處理方式同前。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗法(ELISA)測定受試者血清FGF19水平，檢測儀器為西門子免疫發(fā)光檢測儀，試劑盒為FGF19檢測試劑盒(北京百奧萊博科技有限公司)。AFP檢測使用西門子免疫發(fā)光檢測儀及配套試劑盒，生化項目檢測使用Beckman生化儀及配套試劑盒，血小板檢測使用SYSMEX血常規(guī)儀及配套試劑。實驗操作嚴(yán)格按照試劑說明書的標(biāo)準(zhǔn)程序進(jìn)行。

1.2.2 觀察指標(biāo)收集研究對象的臨床資料，包括性別、年齡、腫瘤家族史、FGF19、AFP、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、清蛋白(ALB)、總膽紅素(TBIL)、血小板(PLT)、病理報告。根據(jù)腫瘤學(xué)國際性分期標(biāo)準(zhǔn)TNM分期系統(tǒng)[7]將肝細(xì)胞肝癌患者分為Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期，計算不同病理分期患者的FGF19水平。在肝細(xì)胞肝癌患者中將AFP與FGF19聯(lián)合檢測，分析FGF19檢測對現(xiàn)有肝癌檢測標(biāo)記物的影響。

2 結(jié) 果

2.1 入組研究對象一般臨床資料比較3組研究對象在年齡、AFP、ALT、AST、ALB、PLT方面比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；而性別、腫瘤家族史和TBIL方面比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 入組研究對象一般臨床資料比較

2.2 血清FGF19水平比較慢性肝炎組患者血清FGF19水平(57.62±4.66)pg/mL與健康對照組(49.83±5.79)pg/mL比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；而肝細(xì)胞肝癌組患者血清FGF19水平(122.55±13.28)pg/mL，明顯高于慢性肝炎患者和健康對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

2.3 血清FGF19水平與肝細(xì)胞肝癌患者病理分期的關(guān)系肝細(xì)胞肝癌Ⅰ期(29例)、Ⅱ期(23例)、Ⅲ期(30例)、Ⅳ期(15例)患者血清FGF19水平分別為(89.5±12.2)、(103.9±6.9)、(133.9±22.5)及(152.6±26.8)pg/mL，與TNM分期呈正相關(guān)(r=0.696，P<0.001)，見圖1。

圖1 肝細(xì)胞肝癌患者不同病理分期與FGF19水平的相關(guān)性

2.4 血清FGF19鑒別肝細(xì)胞肝癌的診斷效能在肝細(xì)胞肝癌患者中將AFP與FGF19聯(lián)合檢測顯示，敏感性從43.2%提高到69.7%，見圖2。

圖2 血清FGF19鑒別肝細(xì)胞肝癌的診斷效能

3 討 論

肝細(xì)胞肝癌是世界上發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一，其發(fā)病機制尚不明確。在肝癌疾病中，AFP雖被用作血清的生物標(biāo)志物，但很容易被干擾，不利于疾病的早期診斷。隨著基因測序技術(shù)的不斷完善，在發(fā)生異常改變的基因組區(qū)域中尋找可能的候選基因成為研究標(biāo)志物的焦點[8]。研究證實在部分肝細(xì)胞肝癌患者樣本中發(fā)現(xiàn)位于染色體11q13位點的FGF19基因出現(xiàn)了部分?jǐn)U增[9]。且免疫組化實驗顯示，肝癌組約50%的病例中觀察到FGF19的過度表達(dá)[10]。成纖維細(xì)胞生長因子(FGFs)通過FGF受體(FGFR)酪氨酸激酶在細(xì)胞生長、分化、血管生成和代謝等方面發(fā)揮了重要的調(diào)節(jié)作用[11]。而FGF/FGFR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的失調(diào)也被認(rèn)為促進(jìn)了包括肝細(xì)胞肝癌在內(nèi)的多種類型癌癥的發(fā)展[12-13]，而在這些疾病的血清FGF19水平確有明顯升高。因此本研究試圖探討FGF19能否作為肝細(xì)胞肝癌的腫瘤標(biāo)志物，用于該疾病的早期篩查與診斷。

首先用ELISA法檢測肝細(xì)胞肝癌患者血清FGF19的水平，結(jié)果與王磊等的結(jié)論一致[5]，與對照組相比，慢性肝炎組患者組FGF19濃度略有升高，肝細(xì)胞肝癌組患者則明顯升高。有研究認(rèn)為膽汁淤積和肝功能障礙會增加血液和膽汁中的濃縮膽汁酸，并導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷，F(xiàn)GF19通過下調(diào)膽固醇7α羥化酶(Cyp7a)抑制膽汁酸合成[14]，因此慢性肝炎患者血清FGF19水平的輕度升高可能是血清膽汁酸水平升高的負(fù)反饋。為進(jìn)一步研究FGF19與肝細(xì)胞肝癌的關(guān)系，我們使用TNM分期將肝細(xì)胞肝癌患者按不同病理分期計算患者的FGF19水平，Prizm軟件分析顯示，F(xiàn)GF19數(shù)值與TNM分期呈正相關(guān)性，進(jìn)一步證實了兩者之間的密切關(guān)系。很多研究表明，AFP作為肝癌的重要診斷和監(jiān)測指標(biāo)，特異性雖然相對較高，但容易被干擾，對早期診斷有一定影響，而肝癌患者血清FGF19水平的升高已被報道，因此本研究在肝細(xì)胞肝癌患者中將AFP與FGF19聯(lián)合，ROC曲線顯示，兩者結(jié)合敏感性增加，提高了疾病的診斷效能，進(jìn)一步為FGF19應(yīng)用于臨床診斷提供了有力的佐證。與AFP不同的是，F(xiàn)GF19作為一種功能蛋白，在腫瘤細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的增殖中起著重要作用，因此也被認(rèn)為是很有前途的治療靶分子[15]。

本研究發(fā)現(xiàn)，肝細(xì)胞肝癌患者血清FGF19呈顯著性上升，同時FGF19水平和TNM分期呈正相關(guān)，與AFP聯(lián)合可提高診斷效能。這些結(jié)果提示血清FGF19可以作為潛在生物標(biāo)志物，用于肝細(xì)胞肝癌早期篩查和病情監(jiān)測。同時，本研究也存在一定的不足:FGF19/FGFR4信號的激活有助于其分子靶向藥物的耐藥[16]，因此FGF19的異常產(chǎn)生可能與這些藥物的治療效果有關(guān)，需要在今后的研究中進(jìn)一步驗證。