葉天健 于明君 錢(qián) 帥 高 緣 張建軍 魏元鋒*

（1.浙江永寧藥業(yè)股份有限公司， 浙江臺(tái)州318020； 2.南京市江寧區(qū)東山社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心， 江蘇南京211101； 3.中國(guó)藥科大學(xué)中藥學(xué)院， 江蘇南京211198； 4.中國(guó)藥科大學(xué)藥學(xué)院， 江蘇南京211198）

構(gòu)建現(xiàn)代中藥復(fù)方多元釋藥系統(tǒng)是一種全新的中藥制劑研究思路，它是以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)思想，治療法則為核心，中藥有效組分為配伍形式或重組中藥效應(yīng)組分復(fù)方，應(yīng)用現(xiàn)代制劑技術(shù)，通過(guò)多種釋藥單元有機(jī)聯(lián)合來(lái)制備既充分體現(xiàn)中藥多途徑、多環(huán)節(jié)、多靶點(diǎn)的整體治療理念，又具有安全、有效、穩(wěn)定、質(zhì)量可控等特征的現(xiàn)代中藥新制劑［1］。

大川芎方源于劉完素《宣明論方》，由川芎、天麻2味藥材組成，臨床療效確切，目前已上市的中成藥品種有大川芎片、大川芎顆粒、大川芎口服液，均為常規(guī)劑型，臨床治療需要每天給藥3 次，連續(xù)服用半個(gè)月作為1 個(gè)療程。如將其制備成口服緩釋制劑，則能減少給藥次數(shù)，提高治療效果，改善患者用藥順應(yīng)性，并可提升產(chǎn)品品質(zhì)，增強(qiáng)其競(jìng)爭(zhēng)力。

基于上述考慮，并受中藥多元釋藥系統(tǒng)理念的啟示，課題組前期已深入研究了大川芎方多元釋藥系統(tǒng)的制備方法，發(fā)現(xiàn)它由川芎速釋微丸、天麻速釋微丸、天麻緩釋微丸按6.5 ∶1 ∶4.25 比例混合而成［2?3］。為評(píng)價(jià)大川芎方多元釋藥系統(tǒng)體內(nèi)藥效學(xué)作用特點(diǎn)，本實(shí)驗(yàn)建立了硝酸甘油致大鼠偏頭痛模型，以與偏頭痛發(fā)作相關(guān)的重要內(nèi)源性生化因子NO 為藥效學(xué)指標(biāo)，并對(duì)其起效時(shí)間及藥效作用維持時(shí)間進(jìn)行系統(tǒng)評(píng)價(jià)。

1 材料

1.1 試藥 大川芎方多元釋藥系統(tǒng)、大川芎方提取物為自制。大川芎片（大連富生制藥有限公司）；肝素鈉注射液（江蘇萬(wàn)邦生化醫(yī)藥股份有限公司）；硝酸甘油注射液（廣州白云山明興制藥有限公司）。NO 試劑盒（南京建成生物工程研究所）。7% 烏拉坦（上海紫銘試劑廠，自制）；生理鹽水 （山東魯抗辰欣藥業(yè)有限公司）；水為蒸餾水（自制）。

1.2 儀器 ELx800 型酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio?Tek 公司）；DK?S24 型電熱恒溫水浴鍋（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；T6?L?166?A 型低溫高速離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）。

1.3 動(dòng)物 SPF 級(jí)SD 大鼠，體質(zhì)量（250±50） g，雌雄不限，由中國(guó)藥科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，受試前禁食12 h，全程不禁水。

2 方法

2.1 樣品制備 大川芎方多元釋藥系統(tǒng)各釋藥單元微丸按川芎速釋微丸、天麻速釋微丸、天麻緩釋微丸6.5 ∶1 ∶4.25 比例混合而成（相當(dāng)于每0.94 g 微丸中含9.3 g 川芎、2.3 g 天麻［2?3］），作為多元釋藥系統(tǒng)灌胃樣品；取川芎、天麻效應(yīng)組分，按4∶3 比例混合（相當(dāng)于川芎∶天麻＝4∶1），加水溶解并稀釋至每1 mL 藥液中分別含兩者0.93、0.23 g，用前搖勻，作為效應(yīng)組分灌胃樣品；取大川芎片適量，研碎后加水超聲混懸，制得每1 mL 藥液中含0.16 g該藥物（相當(dāng)于含川芎0.93 g、天麻0.23 g），用前搖勻，作為大川芎片灌胃樣品。

2.2 分組與造模 大鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為5 組，每組8只，分別為正常組（按2 mL／kg 劑量皮下注射生理鹽水）、模型組（按2 mL／kg 劑量皮下注射硝酸甘油注射液［4］）、多元釋藥系統(tǒng)組、效應(yīng)組分組、大川芎片組（后3 組造模方法同模型組）。

2.3 給藥、取血、NO 水平檢測(cè) 造模前，大鼠先取空白血樣；造模后，正常組、模型組大鼠按10 mL／kg 量灌胃給予生理鹽水，多元釋藥系統(tǒng)組按0.94 g／kg （相當(dāng)于9.3 g／kg川芎、2.3 g／kg 天麻） 劑量灌胃給予混合微丸，大川芎片組、效應(yīng)組分組按10 mL／kg 量分別灌胃給予相應(yīng)混懸液和樣品液。于給藥后0.25、0.5、1、2、3、4、6、8、10、12、18 h 眼眶后靜脈叢取血，注入含肝素鈉的離心管中，輕輕混勻，4 000 r／min 離心10 min，取上清液100 μL，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作檢測(cè)血漿NO 水平。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 通過(guò)SPSS 19.0 進(jìn)行處理，以（）表示。P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

圖1 顯示，與空白組比較，模型組NO 水平逐漸升高，至0.5 h 時(shí)有顯著差異（P＜0.01），大鼠表現(xiàn)出前肢頻繁搔頭、毛發(fā)豎立、精神萎靡等行為或癥狀，與文獻(xiàn)［5］ 報(bào)道一致，提示造模成功；造模后，其水平在8 h 達(dá)到峰值，然后又逐漸下降，但至少到18 h 都顯著高于空白組（P＜0.01），可滿(mǎn)足本實(shí)驗(yàn)要求。在0.5 h，大川芎片組、效應(yīng)組分組、多元釋藥系統(tǒng)組NO 水平顯著低于模型組（P＜0.05，P＜0.01），表明與大川芎片、效應(yīng)組分一樣，多元釋藥系統(tǒng)也可在0.5 h 內(nèi)快速發(fā)揮作用，抑制NO 水平升高。大川芎片組、效應(yīng)組分組NO 水平在0.5～2 h 顯著低于模型組 （P＜0.05），但2 h 后與模型組無(wú)顯著差異（P＞0.05），表明該抑制作用可維持2 h 左右；多元釋藥系統(tǒng)組其水平在0.5～10 h 均顯著低于模型組 （P＜0.05，P＜0.01），呈現(xiàn)明顯的快速、緩釋釋藥特征。另外，雖然各給藥組均能在一定時(shí)間內(nèi)抑制NO 水平升高，但無(wú)法使其恢復(fù)正常。

圖1 各組NO 水平隨時(shí)間的變化

4 討論

本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了大川芎方多元釋藥系統(tǒng)速緩結(jié)合的功效特點(diǎn)，結(jié)合前期研究及文獻(xiàn)［6?11］ 將其中的川芎效應(yīng)組分全部制成速釋釋藥單元，通過(guò)有效成分快速釋放很好地實(shí)現(xiàn)了川芎偏行于外以治標(biāo)、快速擴(kuò)張血管發(fā)揮行氣止痛之功效的制劑目的；少量天麻速釋微丸通過(guò)天麻素等效應(yīng)組分的快速釋藥，可協(xié)同川芎效應(yīng)組分快速發(fā)揮治療偏頭痛的作用，其余則通過(guò)效應(yīng)組分緩釋來(lái)充分體現(xiàn)出天麻甘、緩的性味特征，協(xié)同緩慢釋放出川芎效應(yīng)組分（如阿魏酸），從而使其鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛功效得到持續(xù)發(fā)揮。由此推測(cè)，以上可能是大川芎方多元釋藥系統(tǒng)快速、持久發(fā)揮藥效的原因。

NO 在偏頭痛或其他頭痛的產(chǎn)生中是1 個(gè)十分關(guān)鍵的因子［12］，以硝酸甘油為其供體可用于制備偏頭痛動(dòng)物模型，能很好地模擬該疾病發(fā)生發(fā)展的病理、生理過(guò)程［13］，故本實(shí)驗(yàn)選擇該模型進(jìn)行大川芎方多元釋藥系統(tǒng)的藥效學(xué)評(píng)價(jià)。但偏頭痛癥狀表現(xiàn)復(fù)雜多樣，臨床有多種常見(jiàn)中醫(yī)證型，迄今國(guó)內(nèi)外尚無(wú)相關(guān)動(dòng)物模型，導(dǎo)致對(duì)中醫(yī)藥治療的研究受到很多限制。另外，偏頭痛模型還有硬腦膜神經(jīng)炎癥型模型、腦皮層傳播性抑制模型、5?HT 耗竭模型等［14］，但其發(fā)病機(jī)理復(fù)雜，本實(shí)驗(yàn)僅選擇硝酸甘油致偏頭痛模型進(jìn)行大川芎方多元釋藥系統(tǒng)體內(nèi)藥效學(xué)評(píng)價(jià)時(shí)存在一定局限性。因此，與中醫(yī)偏頭痛證候相結(jié)合，通過(guò)多模型、多指標(biāo)進(jìn)行系統(tǒng)藥效學(xué)評(píng)價(jià)是后續(xù)相關(guān)研究的重要內(nèi)容。