黃麗蕓 陳小兵 袁章林

關(guān)鍵詞：細(xì)葉石仙桃;總黃酮;含量測(cè)定

細(xì)葉石仙桃多生長(zhǎng)于江西、福建、廣東等地，歸屬于蘭科石仙桃屬脫苞組植物，中醫(yī)藥資料記載該植物性甘味涼，臨床具有養(yǎng)陰清熱、利濕散瘀之功效，目前對(duì)江西贛南地區(qū)的細(xì)葉石仙桃的活性成分研究較少，本團(tuán)隊(duì)前期已對(duì)其黃酮類(lèi)成分的提取及抗腫瘤活性有所研究，現(xiàn)針對(duì)細(xì)葉石仙桃中總黃酮類(lèi)成分進(jìn)行含量測(cè)定，完善細(xì)葉石仙桃的質(zhì)量評(píng)價(jià)體系。

1 儀器與試藥

儀器：電子天平（Sartorius北京有限公司）;UV-9000

（上海元析儀器）;試藥：蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品;細(xì)葉石仙桃（自采），經(jīng)中藥炮制技藝“樟幫”傳承人顏干明鑒定為蘭科石仙桃屬細(xì)葉石仙桃。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備

取一定量蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，精密稱(chēng)定，加70%乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶，隨后稀釋至刻度并定容，得對(duì)照品溶液，濃度為0.1mg/mL。

2.1.2 供試品溶液的制備

稱(chēng)取細(xì)葉石仙桃藥材粉末5g，加95%乙醇回流提取1h，過(guò)濾，重復(fù)提取2次，合并濾液;將濾液蒸干，剩余殘?jiān)尤?0mL蒸餾水，使其完全溶解;分別用石油醚、四氯化碳脫脂、萃取，取水層調(diào)pH值至沉淀完全;在沉淀中加入70%乙醇，溶解并轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶，稀釋至刻度定容，得供試品溶液。

2.2 測(cè)定方法及波長(zhǎng)選擇

測(cè)定方法：取25mL容量瓶3支，編號(hào)為1、2、3，分別加入蘆丁對(duì)照品溶液2.0mL、空白溶劑2.0mL、供試品溶液2.0mL，再分別加入5% NaNO2溶液0.5mL，振搖15s，靜置5min，加10% Al（NO3）3溶液0.5mL，振搖15s，靜置5min，再加入4%NaOH溶液4mL，用力振搖15s，最后加70%乙醇定容，靜置20min。

在波長(zhǎng)選擇上，將上述溶液分別在400～700nm范圍內(nèi)掃描，發(fā)現(xiàn)1、3號(hào)溶液均在510nm處出現(xiàn)最大吸收峰;2號(hào)溶液在510nm處未見(jiàn)吸收峰，故檢測(cè)波長(zhǎng)確定為510nm。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制

取10mL容量瓶6支，編號(hào)為1-6，精密量取2.1.1項(xiàng)下所得蘆丁對(duì)照品溶液0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5mL分別置6只10mL容量瓶中，按2.2測(cè)定方法及波長(zhǎng)選擇項(xiàng)下“加入5% NaNO2溶液……靜置20min”操作，測(cè)定吸光度，記錄數(shù)據(jù)。以濃度C（mg/mL）為橫坐標(biāo)（X），其對(duì)應(yīng)吸光度A為縱坐標(biāo)（Y），繪制A-C關(guān)系曲線(xiàn)，建立回歸方程。

2.3.2 精密度試驗(yàn)

取10mL容量瓶1支，精密量取2.1.1項(xiàng)下所得對(duì)照品溶液3.0mL，置容量瓶中，按2.2測(cè)定方法及波長(zhǎng)選擇項(xiàng)下“加入5% NaNO2溶液……靜置20min”操作，測(cè)定A值，連續(xù)測(cè)定5次，計(jì)算RSD。

2.3.3 重復(fù)性試驗(yàn)

取25mL容量瓶5支，編號(hào)為1-5，精密量取2.1.2項(xiàng)下所得供試品溶液2.0mL，置容量瓶中，按2.2測(cè)定方法及波長(zhǎng)選擇項(xiàng)下“加入5% NaNO2溶液……靜置20min”操作，測(cè)定A值，平行測(cè)定5份，計(jì)算RSD。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取25mL容量瓶1支，精密量取2.1.2項(xiàng)下所得供試品溶液2.0mL，置容量瓶中，按2.2測(cè)定方法及波長(zhǎng)選擇項(xiàng)下“加入5%NaNO2溶液……靜置20min”操作，在1h內(nèi)每隔10min測(cè)定相應(yīng)A值，計(jì)算RSD。

2.3.5 加樣回收率試驗(yàn)

取25mL容量瓶5支，編號(hào)為1-5，精密量取2.1.2項(xiàng)下所得供試品溶液1.0mL，置容量瓶中，平行5份，依次加入2.1.1項(xiàng)下對(duì)照品溶液5.0mL，再按2.2測(cè)定方法及波長(zhǎng)選擇項(xiàng)下“加入5%NaNO2溶液……靜置20min”操作，測(cè)定A值，計(jì)算回收率和RSD。

2.4 細(xì)葉石仙桃中總黃酮的含量測(cè)定

取25mL容量瓶3支，編號(hào)為1-3，精密量取2.1.2項(xiàng)下所得供試品溶液2.0mL，置容量瓶中，平行3份，按2.2測(cè)定方法及波長(zhǎng)選擇項(xiàng)下“加入5% NaNO2溶液……靜置20min”操作，測(cè)定A值，計(jì)算含量和RSD。

2.5 結(jié)果

方法學(xué)考察結(jié)果：①線(xiàn)性關(guān)系：將所得數(shù)據(jù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得回歸方程：A=17.896C+0.0202，r=0.9998，線(xiàn)性關(guān)系良好;②精密度：按2.3.2精密度試驗(yàn)操作，得RSD值為1.2%，所用儀器精密度較好;③重復(fù)性：按2.3.3重復(fù)性試驗(yàn)操作，得RSD值為1.0%，所用試驗(yàn)方法可重復(fù)性強(qiáng);④穩(wěn)定性：按2.3.4穩(wěn)定性試驗(yàn)操作，得RSD值為1.5%，細(xì)葉石仙桃提取液在1h內(nèi)穩(wěn)定性較好;⑤加樣回收率：按2.3.5加樣回收率試驗(yàn)操作，得回收率為99.09%，RSD值為2.0%（表1），試驗(yàn)測(cè)試結(jié)果良好。含量測(cè)定結(jié)果按2.4 項(xiàng)下含量測(cè)定試驗(yàn)操作，計(jì)算得細(xì)葉石仙桃中總黃酮含量為5.36mg/g，RSD值為0.5%（表2）。

3 討論

本試驗(yàn)利用NaNO2-Al（NO3）3-NaOH系統(tǒng)對(duì)細(xì)葉石仙桃提取液顯色，利用黃酮類(lèi)化合物的酚羥基及還原性羰基的特點(diǎn)，將黃酮先還原再絡(luò)合最后開(kāi)環(huán)顯色，再通過(guò)紫外測(cè)定吸光度，計(jì)算其中總黃酮類(lèi)成分的含量，整個(gè)反應(yīng)可操作性強(qiáng)，簡(jiǎn)便易行，所得結(jié)果回收率良好，可應(yīng)用于細(xì)葉石仙桃中總黃酮的含量測(cè)定。

參考文獻(xiàn)：

[1]中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志：18卷[M].北京：科學(xué)出版社，2009.390-400.

[2]Yang Shumei，Jiang Pei，Li Dandan.et al.Determination of Total Flavonoid Content in Gentian[J].Heilongjiang Medicine.2014，3（27）：469-472.

作者簡(jiǎn)介：

黃麗蕓（1988- ），女，贛南衛(wèi)生健康職業(yè)學(xué)院講師，主管中藥師，研究方向?yàn)樘烊凰幬镉行С煞址治觥?/p>

基金項(xiàng)目：江西省衛(wèi)生計(jì)生委中醫(yī)藥科研基金資助項(xiàng)目（2018A346）