徐 丹，李潤根，肖世杰

(宜春學院 生命科學與資源環(huán)境學院，江西省作物生長發(fā)育調(diào)控重點實驗室，江西 宜春 336000)

根霉屬(Rhizopussp.)和匍枝根霉(Rhizopusstolonifer)、黑根霉(Rhizopusnigvicans)等是果蔬采后病原菌，能為害藍莓[1]、荸薺[2]、西瓜種子[3]、番茄[4]、哈密瓜[5]、棉苗[6]、郁金香[7]、菠蘿蜜[8]、板栗[9]、 [10]、茄子[11]、桃樹[12]、竹蓀[13]、紫花苜宿[14]、白蘭瓜[15]、華重樓[16]、金針菇[17]、太子參[18]、水蜜桃[19]、葡萄[20]、玉米[21]、西葫蘆[22]、草莓[23]、枸杞[24]、茄子[25]、梨[26]、獼猴桃[27]和甘薯[28]等作物。

百合病原菌米根霉(Rhizopusoryzae)[29]屬根霉屬真菌，是本實驗室在2017年從采后儲藏的龍牙百合(Liliumbrowniivar.viridulum)種球上分離、鑒定的新病原菌，會導致百合種球嚴重腐爛，目前對于米根霉的寄主范圍研究甚少。本試驗采用離體葉片(果實)接種法，通過將米根霉菌接種到不同科屬作物，觀察研究其侵染效應，了解其寄主范圍，檢測其對作物的致病能力，研究其發(fā)病情況，掌握其致病特性，為保證農(nóng)林作物的經(jīng)濟效益以及對其病害進行科學預防提供保障和指導作用。

1 材料與方法

1.1 材料

菌種 米根霉(Rhizopusoryzae)，本實驗室保存。

植物材料 參試果實：南瓜，黃瓜，甜瓜，冬瓜，番茄，李，沙梨，草莓，蘋果，玉米；葉片：茄子，辣椒，菊花，南瓜，三角梅，大白菜，空心菜，柳樹，慈竹，葡萄，球莖甘藍，結(jié)球甘藍，桃，桑，甘薯，百合；塊根：甘薯，土豆，胡蘿卜。

馬鈴薯(PDA)培養(yǎng)基 土豆200 g，瓊脂15-20 g，葡萄糖20 g，定容至1 L，分裝至錐形瓶中，121℃高溫滅菌30 min，待用。

1.2 實驗方法

1.2.1 米根霉菌培養(yǎng)

將米根霉菌轉(zhuǎn)接到馬鈴薯培養(yǎng)基(PDA)，將接好的菌種放入25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5-7d，供后續(xù)試驗使用。

1.2.2 寄主范圍測定

采用離體材料(葉片或果實)接種法，取自學校試驗基地的南瓜、黃瓜、冬瓜等作物的健康葉片或果實，用流水沖洗后，70%乙醇消毒30 s，再用2%次氯酸鈉消毒5 min，切取適宜長度用無菌濾紙吸干水分，放在事先滅過菌的墊有濾紙的培養(yǎng)皿中，背面朝上，每皿放2-3片(塊)，保濕培養(yǎng)，將5 mm菌餅接種在葉片背面，以接種無菌PDA塊為對照，置于25℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，觀察葉片、果實被浸染的情況。所有處理均設(shè)3次重復，ck(接無菌PDA塊)2次重復。

1.2.3 病情分級標準

參照Flood[30]等分級標準進行修改，將作物侵染分為四級：0級，米根霉未在作物材料上生長，無水浸狀現(xiàn)象，無腐爛現(xiàn)象；1級，米根霉菌絲覆蓋作物材料表面占比小于1/2，作物材料出現(xiàn)水浸狀現(xiàn)象或者出現(xiàn)輕微腐爛現(xiàn)象；2級，米根霉菌絲覆蓋作物材料表面占比在1/2至3/4之間，作物材料出現(xiàn)水浸狀以及腐爛現(xiàn)象，3級，米根霉菌絲幾乎覆蓋住作物材料的整個表面，出現(xiàn)嚴重的水浸狀現(xiàn)象以及腐爛現(xiàn)象。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS22和Excel軟件對參試材料發(fā)病等級進行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 薔薇科作物發(fā)病等級及癥狀

米根霉對同為薔薇科作物的侵染效應存在一定的差異，其中，草莓和沙梨存在極顯著的差異，米根霉對草莓有較強的侵染性，但對沙梨不侵染(圖1)；草莓與李、桃葉和蘋果之間差異顯著，(表1)。

表1 薔薇科Rosaceae作物發(fā)病情況

圖1 草莓(左)和沙梨(右)發(fā)病情況

2.2 葫蘆科作物發(fā)病等級及癥狀

米根霉對葫蘆科作物的侵染效應存在顯著差異。其中最為明顯的是黃瓜和南瓜果實，發(fā)病等級為2.67，與冬瓜果實和南瓜葉顯著差異(圖2)；而且米根霉對南瓜與南瓜葉的侵染效應存在顯著差異，對果實的侵染效應明顯大于對葉片的侵染效應(表2)。

表2 葫蘆科Cucurbitaceae作物發(fā)病情況

圖2 南瓜正面(左)和背面(右)發(fā)病情況

2.3 其他科屬作物發(fā)病等級及癥狀

米根霉對土豆、胡蘿卜、甘薯(塊根，圖3左)、三角梅、柳葉和茄葉五種作物材料致病性強，與其他作物材料之間的受侵染程度存在顯著差異；對茄科、十字花科等作物葉片也致病；但慈竹葉和玉米(圖3右)不受侵染，與其他作物之間都存在顯著差異(表3)。

圖3 甘薯塊根(左)和玉米(右)發(fā)病情況

表3 其他科屬作物致病情況

3 小結(jié)與討論

米根霉對薔薇科、葫蘆科、茄科三種科屬作物有很強的侵染效應，但其中也存在不被侵染的作物——沙梨；米根霉對胡蘿卜、空心菜、球莖甘藍、結(jié)球甘藍、大白菜、甘薯葉、葡萄葉、菊葉、三角梅和柳等植物都具有一定的侵染效應，對沙梨、慈竹和玉米兩種作物不侵染；米根霉對同種作物的不同部位的侵染能力有所差異，對果實的侵染效應要強于葉片。米根霉可侵染甘薯(塊根)、桑和百合，與Holmes等[31]、方水琴等[32]和鞏慧玲等[33]研究結(jié)果相同。有研究報道，米根霉還可侵染向日葵[34]、馬鈴薯[35]、煙葉[36]、[37]、花生[38]、忍冬[39]、棗[40]、香菇[41]和蘆薈[42]等，由此可見，米根霉的寄主范圍包括薔薇科(Rosaceae)，葫蘆科(Cucurbitaceae)，茄科(Solanaceae)，十字花科(Brassicaceae)，傘形科(Umbelliferae)，旋花科(Convolvulaceae)，紫茉莉科(Nyctaginaceae)，楊柳科(Salicaceae)，旋花科(Convolvulaceae)，桑科(Moraceae)，菊科(Compositae)，葡萄科(Vitaceae)，百合科(Liliaceae)、忍冬科(Caprifoliaceae)、鼠李科(Rhamnaceae)、傘菌科(Agaricaceae)等十六個科屬作物，對禾本科作物幾乎無侵染效應。米根霉對農(nóng)林作物有危害廣、侵染性強，不僅是果蔬采后病原菌，還可在造成茄科、十字花科等作物生長過程中引發(fā)病害等特點，生產(chǎn)上需引起特別注意。

研究表明，米根霉對玉米和沙梨不致病，但馬秉元等[21]研究表明黑根霉(R.nigvicans)對玉米致病； Kwon等[26]研究表明匍枝根霉(R.stolonifer)引起梨軟腐病，可能是不同菌種致病性不同的緣故，陳曉琳等[43]在玉米內(nèi)發(fā)現(xiàn)有根霉屬(Rhizopus)內(nèi)生菌，這也證明玉米中根霉屬真菌并不一定就是病原菌。試驗探討了米根霉對不同科屬的植物的侵染情況，研究其寄主范圍，旨在避免植物在生長發(fā)育的過程中遭受病原菌的侵染，減少大規(guī)模發(fā)病現(xiàn)象的發(fā)生，尋找抗病育種的新種質(zhì)資源，為防治米根霉提供理論依據(jù)。