鄧 婷，王 琳，杜 平

(畢節(jié)市中醫(yī)院，貴州 畢節(jié) 551700)

苦參為豆科植物苦參SophoraflavescensAit.的干燥根，具有清熱燥濕、殺蟲、利尿等功效[1]。其含有的化合物種類豐富，主要活性成分為以苦參堿、槐果堿及其各自氧化物為代表的生物堿類，以三葉豆紫檀苷、苦參酮等為代表的黃酮類以及脂肪酸成分[2-3]?？鄥⒆鳛閭鹘y(tǒng)中藥材已有幾千年的藥用歷史，臨床應用廣泛?，F代藥理學研究表明其具有殺蟲、抗病原微生物、抗氧化、抗病毒、抗炎抑菌等作用[4-8]，近年來又被用于治療非典和腫瘤[9]?？鄥⒅锌偵飰A及其主要生物堿成分存在明顯的抑菌作用，各單體抑菌活性及作用也不甚相同，可為苦參開發(fā)為殺菌消毒劑的可行性奠定基礎[10]。近年來，中藥材趁鮮切制在藥材初加工應用上越來越受到重視[11]。因此，本研究以苦參中苦參堿、氧化苦參堿及水溶性浸出物含量為指標，探討不同干燥方法對苦參趁鮮切制品中指標成分的影響。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-20AT高效液相色譜儀(LC-20AT二元梯度泵、SPD-20A檢測器，日本島津)；JT5003型全自動天平(余姚金諾)；HH-2數顯恒溫水浴鍋(常州澳華)；101-2AB電熱鼓風干燥箱(天津市泰斯特)；HS10260D超聲波清洗器(天津恒奧)；WP-UP-WF-20實驗室超純水機(四川沃特爾)。

1.2 材料

甲醇、乙腈為色譜純，磷酸、三氯甲烷、濃氨水、無水乙醇為分析純；苦參堿與氧化苦參堿對照品(批號分別為VJOY-9B2S、BVFN-43CD)均購于中國食品藥品檢定研究院；中性氧化鋁柱(100～200目，5 g，內徑1 cm)等。

苦參藥材購自貴州省大方縣羊場鎮(zhèn)，經貴州中醫(yī)藥大學生藥教研室魏升華教授鑒定為豆科植物苦參SophoraflavescensAit.的干燥根。

2 方法與結果

2.1 苦參堿與氧化苦參堿含量測定

2.1.1 色譜適用性條件 色譜柱：BP-NH2柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動相：乙腈-無水乙醇-3%磷酸溶液(80∶10∶10)，檢測波長：220 nm，體積流量：1.0 mL/min，柱溫：30 ℃，進樣量：10 μL，理論塔板數按氧化苦參堿峰計算應不低于2 000。

2.1.2 對照品溶液制備 取苦參堿對照品、氧化苦參堿對照品適量，精密稱定，加乙腈-無水乙醇(80∶20)混合溶液分別制成每1 mL含苦參堿0.02 mg、氧化苦參堿0.2 mg的溶液，即得。

2.1.3 供試品溶液制備 取苦參飲片粉末 0.3 g(過三號篩)，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加濃氨試液0.5 mL，精密加入三氯甲烷20 mL，密塞，稱定質量，超聲處理(功率250 W，頻率33 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液5 mL，加在中性氧化鋁柱上，依次以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇(7∶3)各20 mL洗脫，合并收集洗脫液，回收溶劑至干，殘渣加無水乙醇適量使溶解，轉移至10 mL量瓶中，加無水乙醇至刻度，搖勻，即得。

2.1.4 線性關系考察 分別精密吸取苦參堿、氧化苦參堿對照品0.5、1.0、5.0、9.0、13.0、17.0、20.0 μL，注入高效液相色譜儀中，按照“2.1.1”項下色譜條件進行測定。以對照品質量(X)為橫坐標，峰面積(Y)為縱坐標，分別得苦參堿的回歸方程為Y=283002X-780.54，r=0.999 8；哈巴俄苷的回歸方程為Y=516574X-1468.8，r=0.999 7。結果表明，苦參堿在0.010～0.400 μg、氧化苦參堿在0.10～4.00 μg進樣量范圍內與峰面積積分呈良好的線性關系。

2.1.5 精密度試驗 取苦參飲片粉末 0.3 g，精密稱定，按照“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，按照“2.1.1”項下色譜條件連續(xù)進樣6次，結果苦參堿、氧化苦參堿的RSD分別為1.37%、0.73%，表明儀器精密度良好。

2.1.6 重復性實驗 取苦參飲片粉末6份，每份0.3 g，精密稱定，按照“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，按照“2.1.1”項下色譜條件進行測定，結果苦參堿、氧化苦參堿的RSD分別為2.75%、2.07%，表明該方法的重復性良好。

2.1.7 穩(wěn)定性試驗 取苦參飲片粉末 0.3 g，精密稱定，按照“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，按照“2.1.1”項下色譜條件分別在0、2、4、6、8、10 h進行測定，結果苦參堿、氧化苦參堿的RSD分別為2.27%、1.90%，表明供試品溶液于室溫下10 h內穩(wěn)定。

2.1.8 加樣回收率試驗 精密稱取同一批苦參藥材粉末6份，每份約0.15 g，分別精密加入苦參堿、氧化苦參堿對照品適量，按照“2.1.3”項下方法制備，按照“2.1.1”項下色譜條件測定。結果苦參堿、氧化苦參堿的平均加樣回收率分別為98.6%、100.71%，RSD分別為2.83%、2.46%。結果見表1、表2。

表1 苦參堿加樣回收率試驗結果

表2 氧化苦參堿加樣回收率試驗結果

2.2 水溶性浸出物測定

參照2015版《中國藥典》四部通則2201中水溶性浸出物測定法中的冷浸法測定，結果見表3。

2.3 樣品含量測定

取同一批苦參新鮮藥材，除去雜質，洗凈，切厚片，分別采用陰干、曬干、50 ℃、60 ℃、70 ℃、80 ℃、90 ℃、100 ℃熱風干燥。按照“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，按照“2.1.1”項下方法取樣測定，結果見表3、圖1、圖2。

表3 不同干燥方法的苦參各指標含量測定結果 (%)

圖1 不同干燥方法對苦參堿與氧化苦參堿總量測定結果

圖2 不同干燥方法對水溶性浸出物測定結果

結果表明，對不同干燥方法(陰干、曬干、70 ℃烘干)進行方差分析，苦參堿與氧化苦參堿總量(P=0.002)及水溶性浸出物(P=0.001)均有顯著性差異，且陰干耗時較長，曬干易受氣候影響；熱風烘干方法中，苦參堿與氧化苦參堿含量最高的是70 ℃，50 ℃最低，水溶性浸出物含量最高的是100 ℃，80 ℃最低，90 ℃與100 ℃干燥的苦參飲片色澤變深，與其他不同干燥方法相比較稍有黒糊現象。綜合各因素考慮，苦參趁鮮切制后以70 ℃熱風烘干為宜。

2.4 干燥溫度驗證

取同一批苦參新鮮藥材，除去雜質，洗凈，切厚片，70 ℃熱風干燥即得。按照“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，按照“2.1.1”項下色譜條件進行測定，測定結果見表4。結果表明，分別測定3個指標含量，3次結果差異較小，表明70 ℃熱風干燥方法穩(wěn)定、合理、可行。

表4 驗證實驗結果 (%)

3 討論

趁鮮切制工藝使得傳統(tǒng)飲片加工由“鮮藥材-干藥材-飲片”的模式向“鮮藥材-飲片”轉變，實現趁鮮加工與炮制的一體化融合，有利于大幅提高生產效能，實現鮮藥材到飲片的一步成型[12]。根據研究結果，不同干燥方式對苦參趁鮮切制品中的指標成分有一定影響，70 ℃干燥時苦參中苦參堿與氧化苦參堿含量最高，100 ℃干燥雖然水溶性浸出物含量最高，但在此溫度下易導致藥材表皮皺縮、開裂，顏色加深，木質部與韌皮部分離，影響飲片外觀性狀及色澤?；诖?，苦參趁鮮切制后以70 ℃干燥為宜，既保證其內在質量，又兼顧藥材外觀性狀，方便后續(xù)飲片加工和工業(yè)投料生產。后期還需對苦參趁鮮切制的片型、規(guī)格、貯藏保管等方面開展深入研究，從而進一步規(guī)范苦參藥材趁鮮切制工藝。