陳明華，史康佳，李志杰，蔡 菲，張 浩，張建輝，胡文濤

(1：南昌大學(xué)鄱陽(yáng)湖環(huán)境與資源利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南昌330031)(2：南昌大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院生態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)室，南昌330031)(3：南昌大學(xué)資源環(huán)境與化工學(xué)院，南昌330031)

浮游植物是水生生態(tài)系統(tǒng)中重要的初級(jí)生產(chǎn)者[1-2]，準(zhǔn)確地分析浮游植物種群和群落數(shù)量是河流、湖泊生態(tài)健康評(píng)價(jià)和生態(tài)功能分析的基礎(chǔ). 浮游植物定量分析方法現(xiàn)有鏡檢法、光密度法、流式攝像機(jī)計(jì)數(shù)法、流式細(xì)胞儀法、葉綠素a法等[3]，其中鏡檢法又分為計(jì)數(shù)框行格法、目鏡視野法、目鏡行格法、倒置顯微鏡視野法，選擇不同鏡檢方法對(duì)生物量計(jì)算有影響. 浮游植物生物量計(jì)算方法有標(biāo)準(zhǔn)法、細(xì)分法、粗分法和資料法[1]，以上方法都是基于浮游植物細(xì)胞生物量體積法[4-5]. 影響浮游植物定量分析的因素有采樣、濃縮和鏡檢等，其中浮游植物鏡檢尤其突出，顯微鏡鏡檢法作為浮游植物計(jì)數(shù)最經(jīng)典方法，是檢驗(yàn)其他方法是否有效的依據(jù)[2]，是衡量浮游植物計(jì)數(shù)是否準(zhǔn)確的標(biāo)準(zhǔn)，在河流湖泊生態(tài)學(xué)研究中具有不可替代的作用.

顯微鏡鏡檢法不僅可以測(cè)定浮游植物生物量，還可以進(jìn)行浮游植物的種類及群落結(jié)構(gòu)分析[6]，顯微鏡鏡檢法不僅能較為全面地反映樣品的種類分布情況，而且準(zhǔn)確度高、變異系數(shù)小，目前仍為國(guó)際上浮游植物調(diào)查研究最通用的方法[1-2,6-8]，通常采用的顯微鏡鏡檢法有計(jì)數(shù)框正置鏡檢法和Uterm?hl管倒置鏡檢法[4-5,9-17]. 鏡檢法以外的方法在定量分析過(guò)程中很難解釋浮游植物群落結(jié)構(gòu)的變化及演替，例如流式細(xì)胞技術(shù)提供了一種簡(jiǎn)單、快速分析浮游生物的實(shí)驗(yàn)方法[4]，但存在較大誤差，無(wú)法準(zhǔn)確評(píng)價(jià)浮游植物在湖泊河流生態(tài)系統(tǒng)中的作用. 鏡檢法通常依靠人的眼睛觀察但存在問(wèn)題：對(duì)浮游植物計(jì)數(shù)和體積測(cè)量因顯微鏡和研究人員不同而結(jié)果不同，尤其是鏡檢次數(shù)對(duì)計(jì)數(shù)影響如何？一個(gè)樣品重復(fù)鏡檢多少次符合實(shí)際情況？不同門(mén)類浮游植物鏡檢次數(shù)是否要一樣？不同倍數(shù)下鏡檢次數(shù)對(duì)計(jì)數(shù)影響如何？微囊藻與硅藻的計(jì)數(shù)次數(shù)是否應(yīng)該一樣？同一鏡檢條件下不同藻類如何鏡檢？這些實(shí)際問(wèn)題直接影響浮游植物定量分析. 浮游植物生態(tài)學(xué)研究雖然已經(jīng)積累了豐富的數(shù)據(jù)，但以上實(shí)際計(jì)數(shù)方法上的差異性導(dǎo)致研究結(jié)果較難與國(guó)際接軌. 現(xiàn)隨著顯微拍攝技術(shù)的發(fā)展，本研究提出倒置顯微鏡拍照法，減少人為因素導(dǎo)致的鏡檢誤差，對(duì)拍照法的影響進(jìn)行分析，進(jìn)一步完善浮游植物計(jì)數(shù)的定量化研究，為藻類生態(tài)學(xué)研究提供科學(xué)方法.

1 材料與方法

1.1 樣品采集

實(shí)驗(yàn)選用的浮游植物樣品分為純?cè)鍢悠泛鸵巴鈽悠罚冊(cè)鍢悠窞閷?shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的四尾柵藻、斜生柵藻、小球藻3種純?cè)?，野外樣品為鄱?yáng)湖出湖口、主湖區(qū)和湖汊3種生境浮游植物樣品. 野外浮游植物樣品在水面與0.5 m深的水層之間使用柱狀采水器采集，用網(wǎng)目孔徑為4 μm的浮游植物網(wǎng)過(guò)濾5 L水樣，并將浮游植物樣品加1滴魯格氏液保存在50 mL的樣品瓶中，樣品使用冷藏箱保存等待鏡檢. 野外樣品須在水體透明度大于30 cm的水體采集，若透明度小于30 cm時(shí)，須將混后水樣在10 L水桶中待泥沙沉降后再取混合水樣，以避免泥沙對(duì)浮游植物鏡檢的影響.

1.2 樣品鏡檢

計(jì)數(shù)框行格法采用長(zhǎng)20 mm、寬20 mm、體積0.1 mL的計(jì)數(shù)框?qū)Ω∮沃参镞M(jìn)行鏡檢，樣品厚度約為250 μm，計(jì)數(shù)框橫、豎各劃分10行格，共100個(gè)小方格. 將計(jì)數(shù)樣品充分搖勻，吸取0.1 mL到計(jì)數(shù)框中，對(duì)計(jì)數(shù)框上第2、5、8行共30個(gè)小方格(面積為120 mm2)進(jìn)行計(jì)數(shù)[18]，在5、10、20和40倍下分別需觀察15、30、97和392個(gè)視野數(shù).

倒置顯微鏡拍照法采用直徑27.5 mm、面積593.6 mm2、體積5 mL的管狀浮游浮游植物計(jì)數(shù)管對(duì)浮游植物進(jìn)行鏡檢. 取0.5 mL樣品置于計(jì)數(shù)管內(nèi)，樣品厚度約為842 μm，靜置30 min，通過(guò)顯微鏡攝像頭對(duì)浮游植物拍照. 倒置顯微鏡拍照法不需長(zhǎng)時(shí)間沉淀和次級(jí)抽樣步驟而直接計(jì)數(shù)，在5、10、20和40倍下對(duì)樣品分別拍攝5、10、20和20張浮游植物照片，且40倍條件下至少拍攝每個(gè)樣品中所含有種類數(shù)的照片量，即有多少種就需拍攝多少?gòu)堈掌掌瑧?yīng)均勻分布在計(jì)數(shù)管內(nèi).

1.3 計(jì)數(shù)公式

計(jì)數(shù)框行格法計(jì)數(shù)公式為：

(1)

式中，N為每升原水樣中的浮游植物數(shù)量(個(gè)/L)，Sk為計(jì)數(shù)框面積(mm2)，Sj為計(jì)數(shù)面積(mm2)，Vs為濃縮后水樣的體積(mL)，Va為取樣鏡檢水樣體積(計(jì)數(shù)框體積)(0.1 mL)，n為計(jì)數(shù)所得浮游植物的數(shù)量，Vm為野外水樣體積(mL).

倒置顯微鏡拍照法計(jì)數(shù)公式為：

N=∑Ni

(2)

(3)

式中，Ni為第i物種在1 L水樣中的個(gè)體數(shù)量，Sg為計(jì)數(shù)管面積(mm2)，Sj為計(jì)數(shù)照片面積(mm2)，P為照片數(shù).

2 結(jié)果與分析

2.1 計(jì)數(shù)框行格法計(jì)數(shù)

采用計(jì)數(shù)框行格法對(duì)純?cè)鍢悠泛鸵巴鈽悠愤M(jìn)行觀察，樣品在5倍下觀察形狀為兩方格(圖1)，浮游植物個(gè)體太小，個(gè)數(shù)太多，無(wú)法計(jì)數(shù)；樣品在10倍下觀察形狀為一個(gè)小方格(有少部分不在視野中)，個(gè)體太小，個(gè)數(shù)太多，無(wú)法計(jì)數(shù)；樣品在20倍下觀察計(jì)數(shù)形狀為圓形，小球藻個(gè)體偏小，個(gè)數(shù)太多，四尾柵藻、斜生柵藻個(gè)體清晰可見(jiàn)，計(jì)數(shù)準(zhǔn)確，野外樣品個(gè)體清晰可見(jiàn)，計(jì)數(shù)準(zhǔn)確，但有些種類識(shí)別不出；樣品在40倍下觀察計(jì)數(shù)形狀為圓形，純?cè)鍢悠泛鸵巴鈽悠犯∮沃参锴逦梢?jiàn)且計(jì)數(shù)準(zhǔn)確.

小球藻在20倍下計(jì)數(shù)5個(gè)視野，平均每個(gè)視野浮游植物144個(gè)，在40倍下計(jì)數(shù)10個(gè)視野，平均每個(gè)視野浮游植物28個(gè)；四尾柵藻在20倍下計(jì)數(shù)5個(gè)視野，平均每個(gè)視野浮游植物74個(gè)，在40倍下計(jì)數(shù)10個(gè)視野，平均每個(gè)視野浮游植物13個(gè)；斜生柵藻在20倍下計(jì)數(shù)5個(gè)視野，平均每個(gè)視野浮游植物222個(gè)，在40倍下計(jì)數(shù)10個(gè)視野，平均每個(gè)視野浮游植物42個(gè). 出湖口樣品在20倍下計(jì)數(shù)5個(gè)視野，平均每個(gè)視野浮游植物6個(gè)，在40倍下計(jì)數(shù)10個(gè)視野，平均每個(gè)視野浮游植物2個(gè)；主湖區(qū)樣品在20倍下計(jì)數(shù)5個(gè)視野，平均每個(gè)視野浮游植物18個(gè)，在40倍下計(jì)數(shù)10個(gè)視野，平均每個(gè)視野浮游植物10個(gè)；湖汊樣品在20倍下計(jì)數(shù)5個(gè)視野，平均每個(gè)視野浮游植物18個(gè)，在40倍下計(jì)數(shù)10個(gè)視野，平均每個(gè)視野浮游植物3個(gè)(表1).

2.2 倒置顯微鏡拍照法計(jì)數(shù)

采用倒置顯微鏡拍照法對(duì)純?cè)鍢悠泛鸵巴鈽悠愤M(jìn)行觀察，樣品在5、10、20、40倍下觀察計(jì)數(shù)形狀都為長(zhǎng)方形即照片形狀(圖2)；樣品在5倍下觀察計(jì)數(shù)個(gè)體太小，個(gè)數(shù)太多，無(wú)法計(jì)數(shù)；樣品在10倍下觀察計(jì)數(shù)個(gè)體太小，個(gè)數(shù)太多，估算計(jì)數(shù)；樣品在20倍下觀察計(jì)數(shù)，小球藻個(gè)體偏小，個(gè)數(shù)較多，四尾柵藻、斜生柵藻、野外樣品個(gè)體清晰可見(jiàn)且計(jì)數(shù)準(zhǔn)確；樣品在40倍下觀察計(jì)數(shù)，小球藻、四尾柵藻、斜生柵藻和野外樣品藻體清晰可見(jiàn)且計(jì)數(shù)準(zhǔn)確.

小球藻在10倍下計(jì)數(shù)2張照片，平均每張照片浮游植物302個(gè)，在20倍下計(jì)數(shù)5張照片，平均每張照片浮游植物73個(gè)，在40倍下計(jì)數(shù)10張照片，平均每張照片浮游植物18個(gè)；四尾柵藻在10倍下計(jì)數(shù)2張照片，平均每個(gè)照片浮游植物102個(gè)，在20倍下計(jì)數(shù)5張照片，平均每張照片浮游植物27個(gè)，在40倍下計(jì)數(shù)10張照片，平均每張照片浮游植物7個(gè)；斜生柵藻在10倍下計(jì)數(shù)2張照片，平均每個(gè)照片浮游植物325個(gè)，在20倍下計(jì)數(shù)5張照片，平均每張照片浮游植物77個(gè)，在40倍下計(jì)數(shù)10張照片，平均每張照片浮游植物20個(gè). 出湖口樣品在20倍下計(jì)數(shù)5個(gè)視野，平均每個(gè)視野浮游植物2個(gè)，在40倍下計(jì)數(shù)10個(gè)視野，平均每個(gè)視野浮游植物0.5個(gè)；主湖區(qū)樣品在20倍下計(jì)數(shù)5個(gè)視野，平均每個(gè)視野浮游植物10個(gè)，在40倍下計(jì)數(shù)10個(gè)視野，平均每個(gè)視野浮游植物2～3個(gè)；湖汊樣品在20倍下計(jì)數(shù)5個(gè)視野，平均每個(gè)視野浮游植物13個(gè)，在40倍下計(jì)數(shù)10個(gè)視野，平均每個(gè)視野浮游植物3～4個(gè)(表2).

2.3 兩種方法計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)分析

采用計(jì)數(shù)框行格法和倒置顯微鏡拍照法對(duì)6種樣品進(jìn)行鏡檢計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)分析. 結(jié)果表明，計(jì)數(shù)框行格法計(jì)數(shù)的變異系數(shù)都較大，變異系數(shù)最大的是四尾柵藻樣品(25.980)，變異系數(shù)最小的是出湖口樣品(9.157)；倒置顯微鏡拍照法計(jì)數(shù)的變異性都較小，變異系數(shù)最大的是出湖口樣品(6.356)，變異系數(shù)最小的是湖汊樣品(0.812)(表3). 與計(jì)數(shù)框行格法相比，倒置顯微鏡拍照法變異系數(shù)較小，說(shuō)明倒置顯微鏡拍照法在浮游植物計(jì)數(shù)時(shí)穩(wěn)定，存在較少影響因素.

圖1 計(jì)數(shù)框行格法計(jì)數(shù)視野Fig.1 Counting field of view by counting box row grid method

圖2 倒置顯微鏡拍照法計(jì)數(shù)照片F(xiàn)ig.2 Counting photos with inverted microscope

表3 兩種鏡檢方法的變異系數(shù)

3 討論

3.1 影響浮游植物定量分析的因素

影響浮游植物定量分析的因素主要有采樣、鏡檢和浮游植物種類等. ① 因野外采樣方法不同常導(dǎo)致浮游植物定量分析不準(zhǔn)確，例如使用浮游植物網(wǎng)采樣會(huì)使微小浮游植物丟失；使用濃縮法在浮游植物樣品濃縮不同倍數(shù)時(shí)浮游植物損失各不相同，因?qū)嶋H操作時(shí)濃縮法存在很大的經(jīng)驗(yàn)性，從而降低了不同來(lái)源數(shù)據(jù)之間的可比性[2]；使用聯(lián)合國(guó)教科文組織1978年編入《浮游植物手冊(cè)》(Phytoplankton manual)[17]的Uterm?hl法可較好地避免浮游植物采樣影響，但在移除樣品上清液時(shí)會(huì)導(dǎo)致浮游植物損失，且Uterm?hl倒置計(jì)數(shù)管視野法最大的沉淀樣品量為100 mL. ② 浮游植物因鏡檢方法不同導(dǎo)致定量分析不準(zhǔn)確，比如：計(jì)數(shù)框行格法、目鏡視野法、目鏡行格法、Uterm?hl倒置計(jì)數(shù)管視野法等不同鏡檢方法在不同倍數(shù)條件下對(duì)定量分析的影響；因鏡檢使用不同容器及不同體積樣品(如計(jì)數(shù)框0.1 mL和計(jì)數(shù)管1 mL)對(duì)定量分析的影響；因使用正置顯微鏡和倒置顯微鏡等不同顯微鏡及鏡檢不同人對(duì)定量分析的影響. 因此鏡檢方法選擇是浮游植物定量分析的關(guān)鍵. ③ 浮游植物因種類不同而導(dǎo)致定量分析有差異. 不同門(mén)類植物的計(jì)數(shù)方式不同，例如盤(pán)星藻屬、微囊藻屬與裸藻屬等計(jì)數(shù)方式不同，常導(dǎo)致定量分析不準(zhǔn)確；不同浮游植物物種線性參數(shù)測(cè)量不同，浮游植物體積生物量計(jì)算模型構(gòu)建不同. ④ 浮游植物定量分析從野外采樣到數(shù)據(jù)分析，共經(jīng)歷3次重新抽樣：第1次是野外采樣調(diào)查；第2次是從樣品中取0.1～1 mL計(jì)數(shù)；第3次是從計(jì)數(shù)框或計(jì)數(shù)管中選擇觀察的視野面積. 3次重新抽樣分析和“采樣、鏡檢和種類參數(shù)”分析未形成操作標(biāo)準(zhǔn)程序，常導(dǎo)致浮游植物定量分析數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確，最終研究結(jié)論較難解釋實(shí)際現(xiàn)象和科學(xué)問(wèn)題.

3.2 鏡檢方法的比較分析

鏡檢方法有正置鏡檢法和Uterm?hl倒置計(jì)數(shù)管視野法，其中正置鏡檢法又分為計(jì)數(shù)框行格法、目鏡視野法和目鏡行格法，以上4種鏡檢方法都是人工視野法，即研究人員通過(guò)眼睛在目鏡中觀察每個(gè)視野，記錄每個(gè)視野下有多少個(gè)浮游植物. 計(jì)數(shù)框行格法、目鏡視野法、目鏡行格法、Uterm?hl倒置計(jì)數(shù)管視野法和倒置顯微鏡拍照法這5種鏡檢方法的比較分析見(jiàn)表4，以上5種方法在5、10倍下因浮游植物個(gè)體太小、個(gè)數(shù)太多，無(wú)法計(jì)數(shù)；目鏡視野法、Uterm?hl倒置計(jì)數(shù)管視野法在20、40倍下觀察計(jì)數(shù)形狀都為圓形，即一個(gè)視野，20、40倍下視野直徑分別為1200、600 μm，面積分別為1.23、0.306 mm2，計(jì)數(shù)與計(jì)數(shù)框行格法結(jié)果一樣. 目鏡行格法在20、40倍下觀察計(jì)數(shù)形狀為寬度150或100 μm、長(zhǎng)度2 mm的長(zhǎng)方形，計(jì)數(shù)面積小于20、40倍下一個(gè)視野面積，故沒(méi)采用目鏡行格法計(jì)數(shù)方法.

本研究提出倒置顯微鏡拍照法可以減少以上4種方法缺陷，實(shí)現(xiàn)計(jì)數(shù)穩(wěn)定. 倒置顯微鏡拍照法是將顯微鏡下觀察到的浮游植物拍照保存，鏡檢過(guò)程僅需按程序拍照，然后對(duì)浮游植物照片進(jìn)行分析計(jì)數(shù)及種類識(shí)別，避免因鏡檢人專業(yè)水平等因素影響. 影響倒置顯微鏡拍照法定量分析主要因素是顯微鏡的攝像頭像素和拍照照片數(shù)量，樣品靜置沉降時(shí)間長(zhǎng)短對(duì)定量分析有一定影響，由于浮游植物的沉降與藻體本身的形態(tài)、大小和生理狀態(tài)等都有密切的關(guān)系, 理論上沉降的時(shí)間越長(zhǎng)越好,但實(shí)際工作往往都有時(shí)間的限制[13]，倒置顯微鏡拍照法沉淀浮游植物樣品為0.5 mL，樣品厚度842 μm，故此法沉降的時(shí)間在30 min即可消除沉降時(shí)間對(duì)鏡檢的影響.

表4 五種鏡檢方法的比較分析

3.3 鏡檢視野數(shù)和個(gè)體計(jì)數(shù)分析

鏡檢視野數(shù)和個(gè)體計(jì)數(shù)因浮游植物不同種類個(gè)體大小差異常導(dǎo)致定量分析不準(zhǔn)確. 目前鏡檢法計(jì)數(shù)方式為：① 計(jì)數(shù)100～500個(gè)視野，計(jì)數(shù)值至少在300個(gè)以上，先計(jì)數(shù)100個(gè)視野，如計(jì)數(shù)后數(shù)值太少，再增加100個(gè)視野，計(jì)數(shù)視野均勻分布在計(jì)算框上；② 牛海玉等[7]認(rèn)為鏡檢時(shí)選擇計(jì)數(shù)400個(gè)即可基本保證定量數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性；③ 王驥等[19]認(rèn)為視野在計(jì)數(shù)框中分布要滿足均勻性和隨機(jī)性，每次計(jì)數(shù)100個(gè)視野，每個(gè)樣品計(jì)數(shù)兩次取其平均值. 以上計(jì)數(shù)方法對(duì)浮游植物定量分析有較大不確定性，例如：計(jì)數(shù)值300個(gè)如何確定，盤(pán)星藻屬與裸藻屬計(jì)算個(gè)數(shù)方法不同；某些樣品中浮游植物個(gè)數(shù)沒(méi)有300個(gè)，又如何計(jì)數(shù)；“先計(jì)數(shù)100個(gè)視野”是在多少倍下計(jì)數(shù)沒(méi)確定，不同藻類需在不同倍數(shù)下才能分清種類；在40倍條件下100個(gè)視野僅占計(jì)數(shù)框的8.1%，計(jì)數(shù)100個(gè)視野所用時(shí)間通常100～200 min，工作量太大. 鏡檢法計(jì)數(shù)常因研究人員不同，導(dǎo)致 “藻類計(jì)數(shù)、視野次數(shù)”等結(jié)果出現(xiàn)偏差，因此顯微鏡人工鏡檢對(duì)專業(yè)水平要求高[3]. 以上4種鏡檢方法并未對(duì)浮游植物分類及計(jì)數(shù)留下可重復(fù)分析的證據(jù)，常導(dǎo)致浮游植物定量分析不可重復(fù)計(jì)數(shù).

3.4 倒置顯微鏡拍照法分析

倒置顯微鏡拍照法對(duì)四尾柵藻、斜生柵藻、小球藻和野外浮游植物樣品進(jìn)行拍照分析，拍照數(shù)量可依據(jù)浮游植物密度而增減，在20倍下鏡檢時(shí)，當(dāng)每張照片浮游植物個(gè)數(shù)少于5個(gè)時(shí)，拍攝照片數(shù)不少于20張；當(dāng)每張照片浮游植物個(gè)數(shù)為6～10個(gè)時(shí)，拍攝照片數(shù)不少于10張；當(dāng)每張照片浮游植物個(gè)數(shù)為11～15個(gè)時(shí)，拍攝照片數(shù)不少于5張；當(dāng)每張照片浮游植物個(gè)數(shù)大于15個(gè)時(shí)，需對(duì)水樣進(jìn)行稀釋再觀察，任何倍數(shù)下拍攝照片總面積不少于計(jì)數(shù)管面積的0.2%. 顯微鏡選擇倒置Leica DMI4000B顯微鏡，視野參數(shù)、照片參數(shù)、計(jì)數(shù)照片數(shù)見(jiàn)表5.

表5 倒置顯微鏡拍照法鏡檢參數(shù)

倒置顯微鏡拍照法計(jì)數(shù)依據(jù)照片上的浮游植物進(jìn)行計(jì)數(shù)，以保證計(jì)數(shù)結(jié)果的可比性和重復(fù)性. 在拍照過(guò)程中，常遇到某些個(gè)體一部分在照片中，另一部分在照片外，可規(guī)定出現(xiàn)在照片上都計(jì)數(shù)，因?yàn)槊繌堈掌伎蓡为?dú)拍照，相互之間獨(dú)立. 計(jì)數(shù)單位可以用個(gè)體或細(xì)胞表示，用個(gè)體數(shù)表示，計(jì)數(shù)時(shí)較省力，但由于藻類的個(gè)體有單細(xì)胞或由數(shù)目相差懸殊的多細(xì)胞組成的群體，因此用個(gè)體數(shù)表示不及用細(xì)胞數(shù)表示精確. 當(dāng)用細(xì)胞數(shù)表示時(shí)，對(duì)絲狀、群體種類，可先計(jì)算個(gè)體數(shù)，然后求出該種類的個(gè)體的平均細(xì)胞數(shù)進(jìn)行換算. 計(jì)數(shù)前先對(duì)樣品在5倍物鏡下作定性觀察，以熟悉主要種類及其形態(tài)特點(diǎn)；在10、20和40倍物鏡下分別拍攝10、20和20張，每個(gè)樣品應(yīng)取樣計(jì)數(shù)3次，通過(guò)增加拍照數(shù)可提高計(jì)數(shù)的穩(wěn)定性.

倒置顯微鏡拍照法影響因素主要有顯微鏡攝像頭和浮游植物種類對(duì)計(jì)數(shù)影響. 浮游植物不同種類因個(gè)體大小相差懸殊而影響鏡檢計(jì)數(shù)，主要影響在一張照片上包含藻類數(shù)量，例如小球藻、四尾柵藻屬可在一張40倍照片上，但顆粒直鏈藻則需在20倍下觀察，因此在多少倍物鏡條件下鏡檢要依據(jù)不同浮游植物種類來(lái)確定，避免對(duì)每種浮游植物測(cè)量線性參數(shù)和計(jì)數(shù)的影響. 采用浮游植物個(gè)體數(shù)量來(lái)估算浮游植物豐度可以說(shuō)是不夠精確的，因?yàn)椴煌N的浮游植物細(xì)胞大小差別很大[6]，因此倒置顯微鏡拍照法才能準(zhǔn)確地對(duì)每種物種進(jìn)行計(jì)數(shù)分析，在進(jìn)行生物量計(jì)算前首先要確定不同種類浮游植物的細(xì)胞大小及其計(jì)數(shù)的個(gè)數(shù)，依據(jù)種的計(jì)數(shù)才能計(jì)算出屬、門(mén)等個(gè)數(shù).

4 結(jié)論

1)倒置顯微鏡拍照法是浮游植物鏡檢的最佳方法. 在20倍下拍攝20張照片，對(duì)20張照片進(jìn)行照片圖像分析，避免傳統(tǒng)方法的人為因素干擾. 增加鏡檢樣品數(shù)和拍照次數(shù)，可提高定量分析數(shù)據(jù)穩(wěn)定性. 倒置顯微鏡拍照法減少人為鏡檢不專業(yè)因素，為浮游植物長(zhǎng)期觀測(cè)數(shù)據(jù)可靠性奠定基礎(chǔ).

2)倒置顯微鏡拍照法比計(jì)數(shù)框行格法、目鏡視野法、目鏡行格法、倒置顯微鏡計(jì)數(shù)法對(duì)浮游植物計(jì)數(shù)更加穩(wěn)定. 建議國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)將倒置顯微鏡拍照法列為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，有利于統(tǒng)一浮游植物定量分析的穩(wěn)定性，有利于建立浮游植物大數(shù)據(jù)中心和浮游植物自動(dòng)識(shí)別鑒定分析系統(tǒng)，更加有利于湖泊河流生態(tài)健康評(píng)價(jià).