周利娟，常璐

（許昌市中心醫(yī)院產(chǎn)科，河南 許昌461000）

卵巢儲(chǔ)備功能異常疾病的發(fā)病率明顯的上升，部分地區(qū)的流行病學(xué)分析可見，卵巢儲(chǔ)備功能異常疾病的發(fā)病率可超過485/1 萬人左右[1]。 臨床上的觀察研究發(fā)現(xiàn),卵巢儲(chǔ)備功能異常疾病導(dǎo)致的多器官功能障礙或者不良心血管臨床結(jié)局的風(fēng)險(xiǎn)也明顯的上升[2]。 臨床上缺乏對(duì)卵巢儲(chǔ)備功能異常疾病患者病情評(píng)估的血清學(xué)指標(biāo),通過對(duì)相關(guān)血清學(xué)指標(biāo)的分析研究,能夠?yàn)榕R床上卵巢儲(chǔ)備功能異常疾病的診斷和治療工作提供參考。 抗苗勒氏管激素（AMH）是富含500 多個(gè)氨基酸的糖蛋白家族成員，作為轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子家族成員，其能夠通過影響到顆粒細(xì)胞的活性,參與到起始卵泡的募集和發(fā)育成熟過程,進(jìn)而影響到卵泡的成熟和體內(nèi)的性激素水平[3,4]。 部分研究者探討了AMH 在多囊卵巢綜合癥（PCOS）患者中的表達(dá)情況，認(rèn)為在PCOS 患者中,AMH 的表達(dá)可明顯上升[5],但缺乏對(duì)于AM H的表達(dá)與其他性激素水平的關(guān)系研究。 為了揭示AMH 的表達(dá)與卵巢儲(chǔ)備功能異常疾病的關(guān)系,本次研究選取2017 年1 月至2018 年6 月在我院治療的PCOS 患者87 例,探討了AMH 的表達(dá),報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017 年1 月至2018 年6 月在我院治療的PCOS 患者87 例，POF 患者62 例，納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴PCOS 診斷符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的標(biāo)準(zhǔn)[6]；⑵POF 診斷符合：40 歲以前至少有4 個(gè)月以上閉經(jīng),≥2 次血清卵泡刺激素（FSH）＞40U/L，雌二醇（E2）＜15pg/ml，泌乳素（PRL）正常，甲狀腺和腎上腺功能正常；⑶患者及家屬知情同意。 排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴近3 個(gè)月使用過激素治療； ⑵合并有肝腎功能障礙、惡性腫瘤、免疫系統(tǒng)疾病等。 同時(shí)選取健康女性80 例作為對(duì)照組，各組受試者年齡等一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 各組受試者一般資料比較

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 采集患者入院后24h 內(nèi)或者治療后6~8h 內(nèi)的肘部靜脈血4ml，1500r/min 離心15min,收集上清液,在每個(gè)聚苯乙烯板中加入上述液體0.1ml,4℃過夜孵育,加入磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌3 次，每次3min，在每個(gè)聚苯乙烯板孔中加入AMH 蛋白抗體(1：800 購自南京伯斯金生物公司),37℃孵育30min，加入磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌3次,每次3min,每孔中加入TMB 溶液底物0.1ml,37℃20min,加入2M 硫酸0.05ml 終止反應(yīng),采用DG 5033A 酶標(biāo)儀（南京華東電子科技公司）進(jìn)行OD值檢測(cè)。

在入院后第二天常規(guī)采集患者肘部靜脈血4ml, 自然凝固后采集上層清亮液體，-20℃放置冰箱保存。 采用貝克曼庫爾特公司生產(chǎn)的DX800 免疫發(fā)光儀器及配套試劑進(jìn)行PRL、FINS 和T、LH、E2、PRL、FSH 等的檢測(cè)，室內(nèi)質(zhì)量控制符合標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS19.0 軟件，計(jì)量資料采用（x±s)表示，多組間比較使用方差分析，兩兩比較采用LSD-t 檢驗(yàn)；相關(guān)性采用Pearson 相關(guān)分析。 檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 各組血清AMH、FSH 等指標(biāo)比較 PCOS 組血清AMH、PRL、FINS 和T 水平明顯高于正常組和ROF 組（P＜0.05）;ROF 組血清FSH 和LH 明顯高于正常組和PCOS 組（P＜0.05）,而E2明顯低于正常組和PCOS 組（P＜0.05）。 見表2。

表2 各組血清AMH、FSH 等指標(biāo)比較

2.2 ROF 組血清AMH 與其他指標(biāo)相關(guān)性分析 將ROF 組血清AMH 與FSH、LH 等指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)分析，結(jié)果顯示：ROF 組血清AMH 與FSH 呈負(fù)相關(guān)（r=-0.544,P＜0.05）,其余指標(biāo)未見相關(guān)性（P＞0.05）。

2.3 PCOS 組血清AMH 與其他指標(biāo)相關(guān)性分析將PCOS 組血清AMH 與FSH、LH 等指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)分析， 結(jié)果顯示：PCOS 組血清AMH 與LH、T、FINS 呈正相關(guān) （r=0.346、0.411 和0.432，P＜0.05），其余指標(biāo)未見相關(guān)性（P＞0.05）。

3 討論

強(qiáng)烈的精神情感應(yīng)激、手術(shù)創(chuàng)傷等,均能夠促進(jìn)卵巢儲(chǔ)備功能異常疾病的發(fā)生,特別是在具有基礎(chǔ)性下丘腦-垂體-卵巢軸功能障礙的患者中，卵巢儲(chǔ)備功能異常疾病的發(fā)病率可進(jìn)一步上升[7]。 臨床上相關(guān)疾病的發(fā)生,能夠在影響到患者性激素水平的同時(shí),還能夠增加心血管系統(tǒng)疾病或者其他代謝性疾病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn),影響到遠(yuǎn)期不良臨床結(jié)局的發(fā)生率[8,9]。 越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，基礎(chǔ)細(xì)胞因子或者分子生物學(xué)水平的改變,能夠在卵巢儲(chǔ)備功能異常疾病的發(fā)生過程中發(fā)揮重要的作用。 其中細(xì)胞因子的改變，能夠在卵泡的發(fā)育成熟、起始卵泡的募集或者顆粒細(xì)胞的分化等過程中發(fā)揮作用。 而本次研究通過對(duì)于卵巢儲(chǔ)備功能異常疾病患者體內(nèi)AMH 的表達(dá)分析研究,具有下列方面的價(jià)值：⑴能夠深入揭示臨床上卵巢儲(chǔ)備功能異常疾病的發(fā)病機(jī)理;⑵能夠?yàn)榕R床上卵巢儲(chǔ)備功能異常疾病的病情評(píng)估提供血清學(xué)參考指標(biāo)。

AMH 是糖蛋白家族成員, 其能夠通過其羧基末端的絲氨酸蛋白結(jié)構(gòu),誘導(dǎo)起始卵泡向生長(zhǎng)卵泡的轉(zhuǎn)換障礙，并影響卵泡對(duì)于卵泡雌激素（FSH）的敏感性,從而干預(yù)卵泡顆粒細(xì)胞的成熟和性激素囊泡的釋放。相關(guān)研究也發(fā)現(xiàn)，AMH 的表達(dá)上升能夠抑制卵泡細(xì)胞的募集，降低卵泡細(xì)胞內(nèi)DNA 的修復(fù)損傷能力,進(jìn)而導(dǎo)致卵泡生理功能的喪失[10]。 部分研究者探討了AMH 在PCOS 或者卵巢早衰(ROF)患者中的表達(dá)情況，認(rèn)為AMH 的表達(dá)上升與PCOS 患者的性激素水平的紊亂或者妊娠結(jié)局的改變密切相關(guān)[11]，但缺乏對(duì)于AMH 的表達(dá)與卵泡刺激素(FSH)、泌乳素(PRL)、空腹胰島素(FINS)和睪酮（T）的關(guān)系研究。

本次研究發(fā)現(xiàn), 在PCOS 患者中血清AMH、PRL、FINS 和T 的表達(dá)濃度均明顯上升，高于對(duì)照組及ROF 組, 比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, 提示了在PCOS 患者中存在明顯的相關(guān)激素水平的波動(dòng),其中PRL、FINS 和T 的表達(dá)上升主要與雌激素負(fù)反饋調(diào)節(jié)的機(jī)制異常有關(guān)，而AMH 的上升主要由于卵泡顆粒細(xì)胞皮層損傷導(dǎo)致的細(xì)胞內(nèi)糖蛋白的釋放有關(guān)。 在ROF 患者中LH 及FSH 水平均明顯上升，而E2 水平明顯的下降，這主要由于ROF 患者體內(nèi)E2 水平下降誘導(dǎo)的垂體促性激素相關(guān)成分如LH 或者FSH 的釋放增多有關(guān)。譚容容等[12]研究者也發(fā)現(xiàn)，在PCOS 患者中，AMH 的表達(dá)濃度可上升40%~45%左右, 同時(shí)在病程較長(zhǎng)或者性激素紊亂程度較高的患者中，AMH 的表達(dá)濃度可持續(xù)性的上升。 相關(guān)關(guān)系分析研究可見，ROF 組血清AMH 與FSH 呈負(fù)相關(guān)， 提示了AMH 的表達(dá)與性激素水平的關(guān)系,分析其基礎(chǔ)方面的原因，考慮由于AMH 的下列幾個(gè)方面的作用有關(guān)[13-15]：⑴AMH的表達(dá)上升能夠影響到細(xì)胞色素P450 芳香化酶的合成， 進(jìn)而導(dǎo)致患者體內(nèi)性激素FSH 的水平波動(dòng)； ⑵AMH 的表達(dá)能夠通過影響到體內(nèi)游離雌激素的轉(zhuǎn)化活性，進(jìn)而反饋性影響到FSH 的水平。最后本次研究還發(fā)現(xiàn)，PCOS 組血清AMH 與LH、T、FINS 呈正相關(guān)，提示了AMH 的表達(dá)與PCOS 患者的性激素水平同樣存在密切的聯(lián)系， 這主要由于AMH 的表達(dá)波動(dòng)， 能夠通過影響到性激素的代謝和轉(zhuǎn)化速度，影響到性激素的結(jié)合狀態(tài)，進(jìn)而影響到LH、T 等激素的波動(dòng)情況。臨床上可以通過檢測(cè)AMH 的水平,進(jìn)而評(píng)估PCOS 患者的綜合性病情。

綜上所述，在PCOS 患者中AMH 的表達(dá)水平明顯的上升，同時(shí)在PCOS 患者ROF 患者中AMH的表達(dá)與患者的性激素水平密切相關(guān)。