□ 陳 婷 彭 濤 吳福祥 張 文 閆 君 楊志敏 張 婕 蘭州市食品藥品檢驗(yàn)所

目前世界上生產(chǎn)的農(nóng)藥制劑有千余種，因農(nóng)藥施用不規(guī)范等問(wèn)題，農(nóng)藥殘留污染正嚴(yán)重威脅著人們的食品安全，并成為主要的蔬菜質(zhì)量安全問(wèn)題之一[1—3]。因此，各國(guó)也都在蔬菜農(nóng)藥殘留控制與管理方面做了大量工作，制定了嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)。近10年來(lái)，盡管我國(guó)蔬菜農(nóng)藥殘留檢驗(yàn)檢測(cè)合格率逐年上升，污染值有所下降，但仍然存在著不少制約因素和風(fēng)險(xiǎn)隱患[4]。因此，建立一種能夠同時(shí)快速監(jiān)測(cè)蔬菜中多種農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法具有非常重要的理論和實(shí)踐意義。

近年來(lái)，隨著農(nóng)藥殘留檢測(cè)項(xiàng)目的日益增多以及限量要求的不斷嚴(yán)格，液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜（LC—MS/MS）技術(shù)由于具有靈敏度高、方法精確等特點(diǎn)在多組分農(nóng)殘測(cè)定中得到廣泛應(yīng)用[5—9]，為當(dāng)前多組分農(nóng)藥殘留分析提供了新型技術(shù)。本文參考EN 15662—2008歐洲標(biāo)準(zhǔn)中QuEChERS提取法及 GB/T 20769—2008 國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[10—11]，采用LC—MS/MS分析檢測(cè)技術(shù)，以多種性質(zhì)差異較大的農(nóng)藥殘留作為研究對(duì)象，其中大部分不適宜用氣相或氣相色譜—質(zhì)譜方法分析，但在蔬菜生產(chǎn)中使用率和檢出率都較高，建立了蔬菜中22種農(nóng)藥殘留的快速篩查分析檢測(cè)方法，為蔬菜中多種農(nóng)藥快速檢測(cè)提供準(zhǔn)確、可靠的分析手段。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Shimadzu LC—20A 超快速液相色譜儀（UFLC，日本島津公司）；AB API 3200三重四極桿質(zhì)譜儀（美國(guó)AB公司）；旋渦混合器（上海琪特分析儀器有限公司）；KS501搖床（德國(guó)IKA公司）；乙腈、丙酮、甲醇與二氯甲烷（色譜純，美國(guó)Fisher公司）；提取劑包（4.0 g無(wú)水硫酸鎂，1.0 g氯化鈉，1.0 g檸檬酸鈉，0.50 g檸檬酸二鈉均為分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；試驗(yàn)用水（美國(guó)Millipore公司）；農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心，純度為97%～99.9%。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱(chēng)取一定量的各農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品至10 mL容量瓶中，選用甲醇或丙酮進(jìn)行溶解并定容至刻度，配成標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，將上述標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液根據(jù)試驗(yàn)需要，分別用甲醇稀釋成適當(dāng)濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，避光，0～4 ℃下保存。

1.3 樣品處理

取蔬菜樣品攪碎作為試樣，準(zhǔn)確稱(chēng)取10 g試樣,精確至0.01 g，置于50 mL離心管中，加入10.0 mL乙腈、提取劑包6.5 g，1顆陶瓷均質(zhì)子，蓋上離心管蓋，劇烈震蕩10 min后以3 900 r/min離心5 min，取上層乙腈提取液 500 μL，加入甲醇 250 μL，渦旋30 s，加入超純水250 μL，渦旋30 s，混勻，過(guò)0.22 μm有機(jī)微孔濾膜，濾液待LC—MS/MS檢測(cè)。

1.4 色譜條件

色譜柱：CAPCELL PAK C18（50 mm×2.0 mm，2.5 μm）；流速：0.3 mL/min；柱 溫：40 ℃； 進(jìn) 樣 體 積：5 μL；流 速：0.3 mL/min； 流 動(dòng) 相： 甲醇（A）—0.1% 甲 酸 水（B），梯度 洗脫：0～ 0.25 min，90% A；0.25～11.0 min，90% ～ 5%A；11.0～12.5 min，5%～90%A。

1.5 質(zhì)譜條件

離子源：ESI電離源，離子源溫度500 ℃；正離子模式監(jiān)測(cè)；監(jiān)測(cè)模式：MRM模式；噴霧電壓：5 000 V；氣簾氣壓力1.4×105Pa；霧化氣壓力70.0 psi；輔助霧化氣壓力55.0 psi，以上3種氣體均為氮?dú)狻?/p>

2 結(jié)果與討論

2.1 提取溶劑的選擇

本試驗(yàn)分別采用二氯甲烷、丙酮、乙腈作為提取溶劑進(jìn)行提取，結(jié)果表明，采用二氯甲烷作提取溶劑時(shí)氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥提取率偏低，均低于60%；采用丙酮作為提取溶劑時(shí)，蠅毒磷和甲胺磷提取率偏低，分別為49%、54%，不能滿(mǎn)足同時(shí)提取22種農(nóng)藥的要求，而用乙腈提取時(shí)，提取率均達(dá)到要求。因此，為達(dá)到同時(shí)提取多種農(nóng)藥殘留的要求，本試驗(yàn)首選乙腈作為提取溶劑?？紤]到生鮮蔬菜基質(zhì)的特點(diǎn)，使用適當(dāng)酸化的提取溶劑可將其組織酸化，促進(jìn)農(nóng)藥的溶出，進(jìn)而提高提取效率。本試驗(yàn)比對(duì)了乙腈和含0.1%乙酸的乙腈溶液的提取效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)含0.1%乙酸的乙腈溶液作為提取溶劑時(shí)22種農(nóng)藥的提取率均高且穩(wěn)定，因此本試驗(yàn)選用含0.1%乙酸的乙腈溶液作為提取溶劑。

2.2 色譜及質(zhì)譜條件的優(yōu)化

確定了以甲醇—0.1%甲酸水溶液作為流動(dòng)相后，分別優(yōu)化離子源溫度、霧化氣、氣簾氣、輔助氣等參數(shù)。優(yōu)化后的監(jiān)測(cè)離子、碰撞電壓（CE）、去簇電壓（DP）、碰撞室入口電壓（EP）、碰撞室出口電壓（CXP）等參數(shù)見(jiàn)表1。然后在最優(yōu)條件下檢測(cè)添加了0.05 mg/kg的22種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的花椰菜得出，22種農(nóng)藥在13 min內(nèi)均出峰，且分離度與峰形較好（總離子流色譜圖見(jiàn)圖1）。

圖1 花椰菜空白基質(zhì)中添加0.05 mg/kg的22種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)的總離子流色譜圖

2.3 基質(zhì)效應(yīng)

本試驗(yàn)通過(guò)比較花椰菜、芹菜、辣椒空白基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液與甲醇混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的斜率，評(píng)價(jià)基質(zhì)效應(yīng)，計(jì)算公式：基質(zhì)效應(yīng)（ME）=基質(zhì)匹配校準(zhǔn)曲線斜率/純?nèi)軇?biāo)準(zhǔn)曲線斜率×100%。當(dāng)ME（%）在±0～20%范圍內(nèi)對(duì)結(jié)果的影響可忽略不計(jì)；ME（%）在±20%～50%范圍內(nèi)表示有基質(zhì)效應(yīng)；ME（%）＞50%或＜—50%，則樣品的基質(zhì)效應(yīng)對(duì)結(jié)果的影響不可忽略。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，不同農(nóng)藥在不同基質(zhì)中的ME不同，絕大多數(shù)表現(xiàn)出抑制效應(yīng)，因此，本試驗(yàn)采用基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行校正。

2.4 方法學(xué)驗(yàn)證

2.4.1 方法的線性范圍、標(biāo)準(zhǔn)曲線與檢出限

將22種農(nóng)藥的混合標(biāo)準(zhǔn)液用花椰菜空白基質(zhì)提取液配成0.01～200 μg/L的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，在優(yōu)化測(cè)定條件下進(jìn)行LC—MS/MS測(cè)定，22種農(nóng)藥基質(zhì)標(biāo)樣的響應(yīng)值與質(zhì)量濃度在一定濃度的線性范圍內(nèi)均呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均高于0.99。以3倍信噪比（S/N）確定各農(nóng)藥的檢出限（LOD），得出22種農(nóng)藥的檢出限范圍為0.4～1.2 μg/kg，以10倍信噪比（S/N） 確定各農(nóng)藥的方法定量限（LOQ），范圍為 1.2～ 4.0 μg/kg，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.4.2 方法的回收率和精密度

采用花椰菜空白樣品，以各農(nóng)藥定量限、5倍定量限和10倍定量限分別作為添加水平，進(jìn)行回收率和精密度試驗(yàn)，每個(gè)添加水平重復(fù)5次，計(jì)算各農(nóng)藥的平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見(jiàn)表2，在各添加水平范圍內(nèi)的平均回收率范圍為79.1%～117.6%，RSD均 小 于10%，符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)藥殘留分析測(cè)試要求。

表2 22種農(nóng)藥的方法學(xué)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.5 實(shí)際樣品測(cè)定

采用本方法對(duì)市售的菠菜、白菜、番茄、生姜等7類(lèi)蔬菜125個(gè)樣品進(jìn)行快速檢測(cè)，其中檢測(cè)出多菌靈等農(nóng)藥殘留。對(duì)檢出的蔬菜 農(nóng) 藥 采 用GB/T20769—2008方法進(jìn)行確證，結(jié)果表明二者數(shù)據(jù)相近，該方法準(zhǔn)確性較高（結(jié)果見(jiàn)表 3）。

表3 蔬菜樣品快速檢測(cè)結(jié)果與GB/T 20769-2008方法檢測(cè)結(jié)果的比較

3 結(jié)論

本文通過(guò)超快速液相色譜儀（UFLC）與三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜的聯(lián)用，建立了生鮮蔬菜中22種農(nóng)藥殘留的LC—MS/MS快速檢測(cè)方法，可同時(shí)實(shí)現(xiàn)蔬菜中22種殘留農(nóng)藥的定性與定量分析。該方法具有良好的檢測(cè)靈敏度和重復(fù)性，且省時(shí)省力，適用于蔬菜中多農(nóng)藥殘留的快速、準(zhǔn)確檢測(cè)分析。