帕爾哈提·沙依木 艾克熱木·玉蘇甫 肉斯旦·圖爾迪 趙澤亮 王海江

胃癌全世界發(fā)病率排第5位，死亡率排第3位，東亞地區(qū)胃癌發(fā)病率最高[1]。我國(guó)胃癌發(fā)病率、死亡率排第2和第3，占全部惡性腫瘤死亡的23.24%[2]。生存素(Survivin)作為凋亡抑制蛋白家族的成員，起抑制腫瘤細(xì)胞凋亡、促進(jìn)增殖作用[3-4]。磷酸酶基因(PTEN)是迄今發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)具有雙特異磷酸酶活性的抑癌基因[5]近年來(lái)，越來(lái)越多的數(shù)據(jù)證明Survivin、PTEN在胃癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著重要的作用。但兩者在胃癌中的表達(dá)及臨床相關(guān)性存在不同說(shuō)法，樣本量亦較少。因此，本研究在擴(kuò)大樣本量的基礎(chǔ)上，應(yīng)用免疫組織學(xué)技術(shù)檢測(cè)Survivin、PTEN的表達(dá)陽(yáng)性率，分析其與臨床指標(biāo)的相關(guān)性，為Survivine、PTEN在胃癌發(fā)生發(fā)展中作用提供更加可靠的參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

收集新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院2009年1月至2012年12月經(jīng)病理證實(shí)的有完整病歷資料的胃癌患者石蠟組織標(biāo)本300例，作為胃癌組，選擇120例癌旁正常組織患者作為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理證實(shí)為原發(fā)性胃腺癌；②術(shù)前未經(jīng)過(guò)任何治療(放化療等)；③有完整的臨床病理及隨訪資料；④患者知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患者拒絕參與本項(xiàng)研究；②術(shù)前接受過(guò)治療，如中藥、放療、化療等，③不能手術(shù)的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者及晚期患者。

1.2 研究方法

所有病理標(biāo)本均經(jīng)10%的甲醛固定，石蠟包埋存檔。蠟塊行4 μm厚連續(xù)切片5張，每例均行HE染色證實(shí)確診，并行Survivin和PTEN蛋白免疫組織化學(xué)(SP法)染色觀察，嚴(yán)格按說(shuō)明書進(jìn)行操作。用已知的陽(yáng)性胃癌組織作為陽(yáng)性對(duì)照。將PBS作為陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定

細(xì)胞質(zhì)染成淡黃色至棕黃色為Survivin陽(yáng)性細(xì)胞。Survivin陽(yáng)性細(xì)胞率(陽(yáng)性細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的百分比)<5%為Survivin陰性表達(dá)，≥5%為陽(yáng)性表達(dá)。PTEN陽(yáng)性細(xì)胞胞質(zhì)顯示棕黃或棕褐色。400倍顯微鏡下隨機(jī)抽取5個(gè)視野，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分比。陽(yáng)性比P<10%者視為陰性，P≥10%者視為陽(yáng)性；免疫組化結(jié)果由兩名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師采用盲法閱片的方式進(jìn)行評(píng)分，出現(xiàn)結(jié)果不一致時(shí)，共同討論決定。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 Survivin和PTEN蛋白在兩組中的表達(dá)

免疫組化結(jié)果顯示，胃癌組中的Survivin主要定位于細(xì)胞質(zhì)及胞膜，少量定位于胞核，陽(yáng)性率為72.0%(216/300)，而對(duì)照組中其陽(yáng)性率為5.0%，兩組陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。PTEN在胃癌組中主要定位于細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)，陽(yáng)性表達(dá)率僅為34.0%，而對(duì)照組中其陽(yáng)性表達(dá)率為92.5%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表1)。

表1 Survivin和PTEN蛋白在兩組中的表達(dá)(例，%)

2.2 胃癌組Survivin和PTEN蛋白表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系

從表2可知，Survivin表達(dá)程度與胃癌的大體類型、組織學(xué)類型、分化程度、浸潤(rùn)深度、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及病理分期等有關(guān)。相關(guān)性分析顯示，潰瘍型、粘液腺癌或印戒細(xì)胞癌、分化程度越差，浸潤(rùn)深度越深、有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者中Survivin陽(yáng)性表達(dá)率隨之增高。PTEN蛋白表達(dá)程度與胃癌腫瘤大小、組織學(xué)類型、分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及病理分期有關(guān)。相關(guān)性分析顯示，腫瘤越大、粘液腺或印戒細(xì)胞癌、分化程度越差，浸潤(rùn)深度越深、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)越多，PTEN陽(yáng)性表達(dá)隨之降低。Survivin和PTEN表達(dá)間存在負(fù)相關(guān)(P=0.000，γ=-0.524)，即隨著Survivin陽(yáng)性表達(dá)率的升高，PTEN陽(yáng)性表達(dá)率下降(表3)。

2.3 Survivin和PTEN蛋白表達(dá)陽(yáng)性與陰性患者生存率比較

生存分析顯示，Survivin和PTEN蛋白表達(dá)陽(yáng)性與陰性患者生存率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=98.3，P=0.000和χ2=94.4，P=0.000)。當(dāng)選擇Survivin陽(yáng)性同時(shí)PTEN陰性患者與其他患者生存率對(duì)比時(shí)，發(fā)現(xiàn)前者生存率更低(χ2=145，P=0.000)，見(jiàn)圖1。

3 討論

Survivin作為凋亡抑制蛋白家族的成員在多種實(shí)體腫瘤中高表達(dá)，抑制凋亡、促進(jìn)增殖。本研究結(jié)果顯示，Survivin胃癌組中表達(dá)陽(yáng)性率為72.0%，而對(duì)照組中只有5.0%的陽(yáng)性率，提示胃癌組織中的Survivin蛋白表達(dá)明顯上調(diào)。梁堃等報(bào)道，Survivin在胃癌中表達(dá)率70.0%，而正常組織中不表達(dá)[6]。原位雜交、免疫組化、免疫印跡、RT-PCR等檢查陽(yáng)性率亦均不一，但結(jié)果相近[7-8]。本研究還發(fā)現(xiàn)，潰瘍型、粘液腺癌或印戒細(xì)胞癌、分化程度越差，浸潤(rùn)深度越深、有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、病期越晚患者中Survivin陽(yáng)性表達(dá)率隨之增加，與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[9-10]。Survivin高表達(dá)與胃癌預(yù)后差有關(guān)。Lee等[11]的研究顯示，下調(diào)Survivin基因的表達(dá)可以達(dá)到治療胃癌的目的。以上均提示Survivin在胃癌發(fā)生發(fā)展中起重要作用，與胃癌侵襲、轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后有關(guān)。

表2 Survivin和PTEN蛋白表達(dá)與胃癌病理分期因素的關(guān)系(例，%)

表3 Survivin和PTEN蛋白在胃癌組織中表達(dá)的相關(guān)性/例

圖1 Survivin和PTEN蛋白表達(dá)陽(yáng)性與陰性患者生存率比較

PTEN基因作為第1個(gè)被發(fā)現(xiàn)的腫瘤抑制基因，在細(xì)胞的生長(zhǎng)、凋亡、遷移等方面起著重要的調(diào)控作用，是一個(gè)強(qiáng)有力的抑癌基因，在腫瘤中頻繁發(fā)生突變，其頻率可以與P53相匹敵[12]。PTEN基因的失活可能在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移中起到重要的作用[13]。本研究中PTEN在胃癌和正常組織中表達(dá)率分別為34.0%和92.5%，可見(jiàn)胃癌中明顯下調(diào)，與已有的研究基本一致[14-15]。本研究還發(fā)現(xiàn)，粘液腺或印戒細(xì)胞癌、分化程度越差，浸潤(rùn)深度越深、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)越多，PTEN陽(yáng)性表達(dá)率隨之降低。Zhu等報(bào)道，PTEN表達(dá)下調(diào)與胃癌分化程度及病理分期有密切的關(guān)系，提示PTEN丟失預(yù)示病期屬于晚期、預(yù)后不良[16]。PTEN低表達(dá)與預(yù)后差有關(guān)，這結(jié)果與LI SUI等報(bào)道一致[17]，提示PTEN表達(dá)下調(diào)與腫瘤發(fā)生、進(jìn)展和不良預(yù)后有關(guān)。

趙錦艷等報(bào)道[18]，在胃癌組織中PTEN與Survivin表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)。本研究相關(guān)分析亦顯示，Survivin和PTEN之間存在負(fù)相關(guān)關(guān)系，即隨著Survivin陽(yáng)性表達(dá)的增強(qiáng)，PTEN陽(yáng)性表達(dá)減弱，且Survivin陽(yáng)性同時(shí)PTEN陰性患者預(yù)后較其他患者更差，提示Survivin的過(guò)度表達(dá)、PTEN活性的喪失可能會(huì)抑制胃癌細(xì)胞的凋亡能力，導(dǎo)致其無(wú)限制的生長(zhǎng)及克隆，使其具有較高的惡性行為。

綜上，胃癌發(fā)生中Survivin的上調(diào)可能影響PTEN表達(dá)下調(diào)而起促進(jìn)腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移等。兩之間可能存在直接或間接負(fù)調(diào)控關(guān)系，為此需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)。PTEN與Survivin在胃癌中表達(dá)特點(diǎn)及相關(guān)性可能為胃癌的治療提供新的思路和靶點(diǎn)。