陳傳偉，楊蘭增，趙會芬

(永城市疾病預防控制中心 檢驗科，河南 商丘 476600)

結核性胸膜炎是結核病中僅次于肺結核的常見疾病，在胸腔積液的病因中占55%左右，主要是由于胸腔內有結核桿菌或其代謝產物進入后，引起胸膜炎癥反應[1]。結核性胸膜炎發(fā)病早期并無特異性癥狀，需結合癥狀、體征、影像學檢查等進行診斷，傳統(tǒng)實驗室檢測方法無法準確進行診斷，而胸膜活檢因創(chuàng)傷性較大，并未被廣泛應用，因此對該病的診斷較困難[2]。結核感染T細胞斑點試驗(T-cell spot of tuberculosis test，T-SPOT.TB)是新型細胞學檢測技術，可通過檢測患者全血或胸腔積液中的特異性致敏T細胞，對該病進行診斷。鑒于此，本研究探討胸腔積液T-SPOT.TB對結核性胸膜炎的診斷價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料回顧性分析2018年1月至2020年1月永城市疾病預防控制中心72例結核性胸膜炎患者的臨床資料，將其納入觀察組，將同期53例非結核性胸膜炎患者納入對照組。觀察組男43例，女29例，年齡18～72歲，平均(49.68±5.73)歲，病程1～8周，平均(3.72±2.49)周，其中單純性結核性胸膜炎58例，合并陳舊性肺結核8例，合并免疫系統(tǒng)疾病6例。對照組男32例，女21例，年齡19～73歲，平均(49.73±5.78)歲，病程1.5～8周，平均(3.75±2.54)周，其中心源性胸腔積液17例，惡性胸腔積液12例，炎性胸膜炎18例，風濕性疾病3例，其他3例。兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)，有可比性。

1.2 入選標準(1)納入標準：①觀察組患者符合結核性胸膜炎診斷標準[3]，且經臨床癥狀、體征、經皮胸膜穿刺活檢、診斷性治療確診；②對照組患者存在胸腔積液，并隨訪1～3個月排除結核病；③人類免疫缺陷病毒陰性。(2)排除標準：①接受過抗結核治療；②嚴重心腎功能異常；③意識障礙或精神疾??；④存在穿刺禁忌證。

1.3 檢測方法(1)采用全自動生化儀(普朗，規(guī)格：PUZS-600A/B，京械注準20182220295)檢測胸腔積液腺苷脫氨酶(adenosine deaminase，ADA)。(2)采用熒光染色法檢測胸腔積液結核桿菌DNA(tuberculosis DNA，TB-DNA)，按試劑盒(成都博奧晶芯生物科技有限公司，國械注準20173401339)說明書進行檢測。(3)胸腔積液T-SPOT.TB。將30 mL胸腔積液經培養(yǎng)液處理后，將淋巴細胞用人淋巴細胞分離液進行分離，加入0.5 mL AIM-V培養(yǎng)液稀釋至每毫升含2.5×106個淋巴細胞，每份標本4個孔分別為AIM-V培養(yǎng)基、A抗原(早期分泌靶抗原6)、B抗原(培養(yǎng)濾液蛋白)及植物血凝素，將100 μL細胞終溶液加入每個孔，培養(yǎng)箱(體積分數為5%的二氧化碳，37 ℃)孵育16～18 h，次日洗板并加入50 μL酶標抗體工作液，孵育1 h(2～7 ℃)，再加入50 μL底物工作液，使用顯色劑及酶標二抗顯色6～7 min(室溫)，沖洗干燥后，使用顯微鏡(南京江南永新光學有限公司，蘇械注準20172221144)對斑點數進行計數。

1.4 判定標準依照說明書進行判定。(1)ADA陽性：胸腔積液ADA≥45 U·L-1。(2)TB-DNA陽性：3張TB-DNA涂片中任2張找到抗酸桿菌。(3)T-SPOT.TB陽性：第4孔斑點數在25個以上則試驗有效，第2孔、第3孔之和在6個以上判定為陽性[4]。

1.5 統(tǒng)計學方法采用SPSS 25.0統(tǒng)計軟件處理數據。計數資料以百分數和例數表示，組間比較采用χ2檢驗。計算胸腔積液ADA、TB-DNA、T-SPOT.TB診斷結核性胸膜炎的效能，采用一致性Kappa檢驗，以K值評價不同檢測結果的一致性，K值≥0.74即一致性高，0.40～<0.74即一致性一般，<0.40即一致性差。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 診斷結果及性能胸腔積液ADA診斷符合率為69.60%(87/125)，TB-DNA診斷符合率為68.80%(86/125)，T-SPOT.TB診斷符合率為85.60%(107/125)。T-SPOT.TB檢測的一致性最高(Kappa=0.742，P<0.05)。見表1。

表1 3種檢查方法陽性檢出率比較[n(%)]

2.2 診斷效能3種檢測方法組間比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，胸腔積液T-SPOT.TB檢測靈敏度、特異度、準確度高于ADA、TB-DNA(P<0.05)。見表2。

表2 3種檢測方法的診斷效能比較(%)

3 討論

我國結核桿菌感染率在全球僅次于印度，居于第2位，而結核桿菌引起的結核性胸膜炎較常見，但起病隱匿，易造成漏診、誤診[5]。臨床上診斷結核性胸膜炎常采用胸膜穿刺活檢進行結核菌培養(yǎng)試驗或病理檢查。由于細菌培養(yǎng)需要消耗較長時間，不利于早期診斷該病；病理檢查陰性率較高，存在一定的局限性。近年來，通過TB實驗室檢查診斷結核性胸膜炎越來越受到關注，其中ADA、TB-DNA較常見。ADA為特異性核酸代謝酶，可影響機體免疫活性，而結核性胸膜炎患者胸腔積液中的免疫細胞受刺激后，大量促進淋巴細胞釋放，而輔助性T細胞增多可使ADA水平升高[6]。雖然ADA檢測靈敏度、特異度均較高，但研究發(fā)現，胸腔積液為細菌感染性或風濕性時，ADA檢測水平也較高[7]。胸腔積液TB-DNA是通過對結核桿菌DNA的數量進行聚合酶鏈式反應技術檢測，判定是否存在結核桿菌感染，特異性極高，但其敏感性較差，考慮主要是由于胸腔積液中TB數量少所致[8]。

本研究結果顯示，T-SPOT.TB檢測的一致性最高，胸腔積液T-SPOT.TB檢測的靈敏度、特異度、準確度高于ADA、TB-DNA，說明T-SPOT.TB檢測胸腔積液對結核性胸膜炎靈敏度、準確度及一致性較高，具有重要的診斷價值。結核性胸膜炎感染后，記憶性T細胞可長期存在于胸腔積液中，當該病的特異性抗原與記憶性T細胞再次相遇時，可使其迅速增殖活化，釋放γ-干擾素。T-SPOT.TB是通過檢測IFN-γ分泌情況，分析TB特異性抗原是否對單核細胞產生刺激，以判斷是否存在結核桿菌感染[9]。A抗原、B抗原可使胸腔積液中效應T細胞受到刺激后釋放，使斑點數增加。該檢測技術具有快速、高效的優(yōu)勢，檢測全程1～2 d即可完成；刺激源選擇致病性TB抗原，具有較高特異性，并且能夠對1/100萬的細胞因子進行檢測，具有高靈敏度[10-11]。結核性胸膜炎患者接受治療后，TB被消滅，胸腔積液中的T淋巴細胞消失，因此該檢測方式還能夠對患者體內TB是否被消滅進行評估，從而評估治療效果[12]。

綜上所述，胸腔積液T-SPOT.TB檢測對結核性胸膜炎具有較高的靈敏度、準確度，具有重要的臨床診斷價值。