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【摘要】? 環(huán)磷酰胺;骨髓嗜多染紅細(xì)胞;微核;流式細(xì)胞儀;技術(shù)方法

引言

微核實(shí)踐研究是臨床用于細(xì)致檢查被檢測(cè)物所含遺傳性毒物的專業(yè)性測(cè)驗(yàn)形式，目前在臨床實(shí)踐病毒檢測(cè)中使用效果顯著，已得到較大范圍的使用。由于傳統(tǒng)人工方式在微核數(shù)值檢測(cè)的具體性檢測(cè)中工作量較大，找尋相對(duì)準(zhǔn)確的微核率較為困難，且存在一定程度上的干擾因素。流式細(xì)胞儀在實(shí)際使用中效率高、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)勢(shì)較為突出，且其實(shí)際檢測(cè)結(jié)果較為準(zhǔn)確，因此常用于骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核率的數(shù)值檢驗(yàn)之中。

一、資料與方法

（一）一般資料

本次實(shí)踐探究的主要研究對(duì)象包括符合研究條件的雄性SD大鼠和雄性KM小鼠各10只，小鼠的實(shí)際體重在20克左右，大鼠的實(shí)際體重在200克左右，大鼠與小鼠的最大生存月齡為一個(gè)半月。抽調(diào)的所有實(shí)踐研究對(duì)象經(jīng)檢測(cè)全部符合相關(guān)研究標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)參與實(shí)踐研究的對(duì)象進(jìn)行標(biāo)識(shí)處理，同時(shí)進(jìn)行科學(xué)化的小組分配，確保實(shí)踐研究效率的充分保障。

（二）研究方法

本次實(shí)踐研究中涉及的主要試劑包括：環(huán)磷酰胺、Sorensens緩沖液、AO水溶液、氯化鈉、戊二醛水溶液等。主要使用儀器包括：臨床流式細(xì)胞儀、離心機(jī)械、顯微鏡等。環(huán)磷酰胺藥物使用時(shí)需配合生理鹽水進(jìn)行調(diào)和。對(duì)分配完成的各個(gè)實(shí)驗(yàn)小組進(jìn)行差異性的藥物劑量投入，明確注射體積，對(duì)實(shí)驗(yàn)對(duì)象的腹部進(jìn)行藥物注射，藥物注射完成24小時(shí)后進(jìn)行標(biāo)本樣本收集[1]，以此為基礎(chǔ)進(jìn)行后續(xù)實(shí)踐研究。借助單一性質(zhì)的AO與FCM進(jìn)行骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核的數(shù)值檢測(cè)，與此同時(shí)，將流式細(xì)胞儀篩選出來的環(huán)磷酰胺用以處理SD大鼠和KM小鼠，將二者體內(nèi)骨髓內(nèi)部含有的骨髓嗜多染紅細(xì)胞以及較為成熟的骨髓紅細(xì)胞的微核數(shù)量進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算出相應(yīng)微核率后及時(shí)進(jìn)行對(duì)比分析。

（三）實(shí)驗(yàn)觀察指標(biāo)

借助流式細(xì)胞儀對(duì)相關(guān)實(shí)驗(yàn)提取物進(jìn)行細(xì)胞數(shù)值分析，將流式細(xì)胞儀篩選出來的環(huán)磷酰胺用以處理SD大鼠和KM小鼠，將二者體內(nèi)骨髓內(nèi)部含有的骨髓嗜多染紅細(xì)胞以及較為成熟的骨髓紅細(xì)胞的微核數(shù)量進(jìn)行測(cè)定。借助流式細(xì)胞儀進(jìn)行相關(guān)監(jiān)測(cè)的同時(shí)，醫(yī)療技術(shù)人員同時(shí)借助顯微鏡完成鏡檢工作。

二、結(jié)果

實(shí)踐研究過程中當(dāng)環(huán)磷酰胺的實(shí)際含量升高時(shí)，SD大鼠和KM小鼠骨髓中的骨髓嗜多染紅細(xì)胞以及較為成熟的骨髓紅細(xì)胞的實(shí)際數(shù)值逐漸增加，并且呈現(xiàn)出具有一定規(guī)律性的數(shù)量關(guān)系，采用多種計(jì)數(shù)方式進(jìn)行實(shí)踐研究環(huán)節(jié)的數(shù)值評(píng)定，并未發(fā)現(xiàn)較大的數(shù)據(jù)研究差異（P>0.05）。參與實(shí)踐調(diào)查研究的小鼠中檢測(cè)到多數(shù)的細(xì)胞群分布現(xiàn)象[2]，其中包括：骨髓嗜多染紅細(xì)胞、較為成熟的骨髓紅細(xì)胞、含微核的較為成熟的骨髓紅細(xì)胞等。通過觀察可有效區(qū)分微核細(xì)胞與未含微核細(xì)胞之間的區(qū)別。以此確定流式細(xì)胞儀對(duì)于此類微核細(xì)胞的區(qū)分存在一定程度上的主管性質(zhì)。與此同時(shí)，借助實(shí)踐研究發(fā)現(xiàn)不同使用劑量的環(huán)磷酰胺對(duì)于實(shí)驗(yàn)對(duì)象的影響。實(shí)踐研究樣本經(jīng)AO試劑染色后，待觀察的細(xì)胞狀態(tài)顯示為良好，骨髓嗜多染紅細(xì)胞與較為成熟的骨髓紅細(xì)胞相比二者在染色后存在顯著差異，其中骨髓嗜多染紅細(xì)胞可發(fā)出熒光，而較為成熟的骨髓紅細(xì)胞無此類現(xiàn)象。人工鏡檢檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)，與常規(guī)性的細(xì)胞相比，含有微核的紅細(xì)胞實(shí)際體積較大，借助WinMDI軟件對(duì)細(xì)胞群體的占據(jù)比例進(jìn)行檢測(cè)過程中，可發(fā)現(xiàn)當(dāng)CP的實(shí)際含量增多且其濃度上升到一定程度后，隨機(jī)出現(xiàn)了細(xì)胞抑制性情況。

三、討論

AO作為一種熒光性染料劑，因其對(duì)生物基因所具有的親和度，當(dāng)與單鏈核算或者雙鏈核酸進(jìn)行有效結(jié)合后將產(chǎn)生差異性的熒光反應(yīng)。環(huán)磷酰胺（cyclophosphamide）在進(jìn)入生物體內(nèi)后將于生物肝臟內(nèi)部進(jìn)行分子轉(zhuǎn)化，其在生物體外并無明顯的抗腫瘤活性功能，但在生物體內(nèi)將氧化酶轉(zhuǎn)化為醛磷酰胺后，存在一定程度上的不穩(wěn)定性，其在生物腫瘤細(xì)胞中還可進(jìn)一步分解成丙烯醛、酰胺氮芥等。探究臨床流式細(xì)胞儀篩選環(huán)磷酰胺以此誘導(dǎo)骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核的有效技術(shù)形式的主要目標(biāo)為提升流式細(xì)胞儀器在臨床探究中的實(shí)際使用性能。臨床探究中生物的骨髓細(xì)胞與其他細(xì)胞相比極具特異性，有核細(xì)胞的實(shí)際數(shù)值將在一定程度上對(duì)MN的檢測(cè)數(shù)值進(jìn)行存在影響，本次實(shí)踐探究活動(dòng)中借助借助單一性質(zhì)的AO與FCM進(jìn)行骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核的數(shù)值檢測(cè)，可在保存檢測(cè)樣本完整性的同時(shí)進(jìn)行數(shù)值測(cè)定，有效對(duì)微核及不微核的紅細(xì)胞進(jìn)行測(cè)定，檢測(cè)大鼠骨髓中的嗜多染紅細(xì)胞數(shù)量，將醫(yī)療器械檢測(cè)結(jié)果與人工鏡檢結(jié)果相對(duì)比，其統(tǒng)計(jì)學(xué)上的數(shù)值差異不大。

綜上所述，臨床流式細(xì)胞儀在臨床應(yīng)用中具有一定程度上的實(shí)用價(jià)值[3]，可用以篩選環(huán)磷酰胺以此誘導(dǎo)骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核的具體數(shù)值檢測(cè)，并值得在醫(yī)療服務(wù)研究領(lǐng)域進(jìn)行更深一步的拓展。

【參考文獻(xiàn)】

[1]張孝全，孫雯雯，李海生.淺析臨床流式細(xì)胞儀篩選環(huán)磷酰胺以此誘導(dǎo)骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核的有效技術(shù)形式以及結(jié)果研究[J].現(xiàn)代化醫(yī)療診斷，2017，04（14）：104.

[2]張曉強(qiáng)，王記奇，鄧苗苗.簡(jiǎn)述臨床流式細(xì)胞儀檢測(cè)骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核的有效技術(shù)形式改進(jìn)策略分析[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2017，34（14）：278-290.

[3]黃西夏，劉楠靈，張啟東.小議臨床流式細(xì)胞儀用以檢測(cè)小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核的有效技術(shù)方法探究[J].現(xiàn)代化醫(yī)學(xué)醫(yī)藥雜志，2018，34（15）：382.