李筱婧 韋英杰 汪晶 許歡 黃一平 江阿古麗·艾山 陳斌

[摘要] 目的 建立瑪瑙膏的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 方法 采用薄層色譜法對(duì)制劑中五靈脂、延胡索、大黃、補(bǔ)骨脂、三七進(jìn)行定性鑒別;采用高效液相色譜法對(duì)制劑中延胡索乙素進(jìn)行含量測(cè)定，以乙腈-0.1%磷酸三乙胺體系為流動(dòng)相，梯度洗脫，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm。 結(jié)果 薄層色譜法斑點(diǎn)清晰，分離度好，陰性無干擾;延胡索乙素在2.022～20.22 μg/mL（r = 0.9999）范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均加樣回收率為100.27%（RSD = 2.39%）。 結(jié)論 本研究建立的方法穩(wěn)定性、重復(fù)性好，可用于瑪瑙膏的質(zhì)量控制。

[關(guān)鍵詞] 瑪瑙膏;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);薄層色譜法;高效液相色譜法;延胡索乙素

[中圖分類號(hào)] R927.1? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-7210（2020）07（c）-0133-04

Quality standard for Ma′nao Gao

LI Xiaojing1? ?WEI Yingjie1，2? ?WANG Jing1，2? ?XU Huan1? ?HUANG Yiping1，2? ?Janagul·As3? ?CHEN Bin1，2

1.The Third Clinical Medical College， Nanjing University of Chinese Medicine， Jiangsu Province， Nanjing? ?210028， China; 2.Key Laboratory for Traditional Chinese Medicine Drug Release System Under State Administration of Traditional Chinese Medicine， Jiangsu Province Academy of Traditional Chinese Medicine， Jiangsu Province， Nanjing? ?210028， China; 3.Xinjiang Yili Kazak Autonomous Prefecture Hospital of Traditional Chinese Medicine， Xinjiang Uygur Autonomous Region， Yining? ?835000， China

[Abstract] Objective To establish a quality control method for Ma′nao Gao. Methods Thin layer chromatography was applied to the qualitative identification of Faeces Togopteri， Corydalis Rhizoma， Rhei Radix et Rhizoma， Psoraleae Fructus， Notoginseng Radix et Rhizoma. High performance liquid chromatography was used for the content determination of tetrahydropalmatine， acetonitrile-0.1% triethylamine phosphate system was used as the mobile phase of gradient elute. The column temperature was 30°C and the detection wavelength was set at 280 nm. Results Thin layer chromatography spots was clear， which had good resolution without interference. Tetrahydropalmatine had good linear relationship with the range of 2.022-20.22 μg/mL （r = 0.9999） respectively， the average recovery was 100.27% （RSD = 2.39%）. Conclusion The method is reliable with good stability and good repeatability， and can be used for quality control of Ma′nao Gao.

[Key words] Ma′nao Gao; Quality standardization; Thin layer chromatography; High performance liquid chromatography; Tetrahydropalmatine

哈薩克民族醫(yī)藥是中國(guó)民族醫(yī)藥體系中重要的組成部分，哈薩克醫(yī)藥秘方瑪瑙膏是外敷治療外傷性腫痛的“明珠”，由五靈脂、延胡索、大黃等11味藥材組成，主要用于治療跌打損傷、四肢疼痛等血瘀癥和痹證，具有消腫止痛、活血化瘀、行氣消腫、促進(jìn)骨愈合的作用，效果明確。江阿古麗等[1]通過抗炎鎮(zhèn)痛動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，發(fā)現(xiàn)瑪瑙膏對(duì)實(shí)驗(yàn)性腫痛有明顯的治療作用，表現(xiàn)出顯著的抗炎效果。此外，還進(jìn)行了瑪瑙膏外敷治療骨與軟組織損傷的臨床研究[2]，對(duì)外傷致骨及軟組織損傷患者于治療前后進(jìn)行病情評(píng)分分析，結(jié)果顯示，瑪瑙膏對(duì)外傷性腫痛的消腫止痛作用明顯優(yōu)于對(duì)照組（P < 0.001）。哈藥瑪瑙膏目前暫無質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為適應(yīng)民族藥醫(yī)院制劑制造規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化，以確保臨床療效及用藥安全，本試驗(yàn)進(jìn)行瑪瑙膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，建立瑪瑙膏中五靈脂、延胡索、大黃、補(bǔ)骨脂、三七的薄層色譜鑒別方法及延胡索乙素的高效液相色譜法（HPLC）含量測(cè)定方法。

2.2.7 精密度試驗(yàn)? 精密吸取濃度為12.132 μg/mL的延胡索乙素對(duì)照品溶液，按照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，測(cè)定值的RSD為0.088%，結(jié)果提示精密度良好。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn)? 取批號(hào)為20190724的瑪瑙膏樣品，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積計(jì)算含量。6份樣品測(cè)定值的RSD為2.32%，結(jié)果提示本法重復(fù)性良好。

2.2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn)? 精密吸取同一供試品溶液，按照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件，于0、2、4、8、12、24 h時(shí)測(cè)定其峰面積并計(jì)算RSD為2.16%，結(jié)果提示供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.10 加樣回收率試驗(yàn)? 取批號(hào)為20190724的瑪瑙膏樣品10 g，共9份，精密稱定，分別按已知含量的80%、100%、120%加入對(duì)照品，按照“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算含量，得延胡索乙素的加樣回收率均在95%～105%之間，平均回收率為100.27%，RSD為2.39%，結(jié)果見表1，提示該方法回收率良好。

2.2.11 樣品含量測(cè)定? 取3批瑪瑙膏樣品，精密稱定，按照“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算延胡索乙素含量，測(cè)定結(jié)果顯示，批號(hào)為20190724、20190725、20190726的延胡索乙素含量分別為25.15、25.80、25.23 μg/g。

3 討論

本試驗(yàn)中薄層色譜法結(jié)果顯示，供試品色譜在與對(duì)照藥材色譜或?qū)φ掌飞V相應(yīng)的位置上顯相同顏色斑點(diǎn)，陰性樣品均無干擾。薄層色譜法供試品處理方法參照2015年版《陜西省藥材標(biāo)準(zhǔn)》[3]與2015年版《中國(guó)藥典》一部[4]方法，但由于制劑所含化學(xué)成分較多，部分藥味薄層色譜圖上斑點(diǎn)過多，影響分離與鑒別，增加純化步驟費(fèi)時(shí)繁瑣，樣品耗費(fèi)量大，故改用石油醚超聲處理樣品。經(jīng)石油醚提取所得供試品，成分少，薄層色譜背景淺，適用于五靈脂及補(bǔ)骨脂薄層色譜法。本試驗(yàn)中所有薄層色譜法方法均已對(duì)薄層層析硅膠板品牌、展開劑、溫度、濕度、點(diǎn)樣量進(jìn)行了耐用性考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在不同色譜條件下均能實(shí)現(xiàn)較好的分離。

本試驗(yàn)建立了瑪瑙膏中延胡索乙素的HPLC含量測(cè)定方法，延胡索為瑪瑙膏中君藥之一，其活性成分延胡索乙素與本方活血止痛等功效起到了主導(dǎo)作用。由于該制劑由11味藥材與煉蜜制成，其所含化學(xué)成分繁復(fù)，參考生物堿提取的相關(guān)文獻(xiàn)[21-22]，考察甲醇、乙醇、80%甲醇及濃氨-甲醇四種提取溶劑，以及超聲、回流兩種提取方式。經(jīng)過一系列預(yù)試驗(yàn)，最終確定以濃氨-甲醇（1∶20）混合溶液為提取試劑，加熱回流后經(jīng)中性氧化鋁柱純化得到供試品溶液。流動(dòng)相考察了不同比例甲醇-0.1%磷酸三乙胺和乙腈-0.1%磷酸三乙胺等度洗脫，分離度差，而“2.2.1”項(xiàng)下梯度洗脫的色譜條件分離效果良好。在HPLC含量測(cè)定時(shí)，通過全波長(zhǎng)掃描發(fā)現(xiàn)延胡索乙素在280 nm處有較大吸收，且無陰性干擾，參考藥典及其他文獻(xiàn)，最終選擇280 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

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（收稿日期：2019-11-25）