廖叢娟，張旭升， 黃戰(zhàn)軍， 樊小容，譚小青，蔡博治

代謝綜合征(MS)包括高血壓和血脂、血糖及尿酸代謝異常等臨床表現(xiàn)，作為與心血管系統(tǒng)疾病密切相關(guān)的多種危險(xiǎn)因素，可損傷血管內(nèi)皮功能、促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化、細(xì)胞增殖及膠原沉積等病理過程，最終引起心肌及血管重構(gòu)發(fā)生[1]。MS誘導(dǎo)心肌重構(gòu)的機(jī)制相當(dāng)復(fù)雜，研究發(fā)現(xiàn)高血壓導(dǎo)致血流高剪切力、血脂和尿酸代謝異常及胰島素抵抗等作用扮演了重要角色。心肌局部炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激及脂肪細(xì)胞因子等活性因子的作用均參與了心肌重構(gòu)等過程，而血管活性多肽的生物學(xué)效應(yīng)也越來越受到關(guān)注[2-4]。尾加壓素Ⅱ(UⅡ)是一種類生長抑制素的血管活性多肽， UⅡ特異受體(UT)為GRP14，屬G蛋白耦聯(lián)受體，兩者在心血管組織中均有表達(dá)，UⅡ通過結(jié)合UT而發(fā)揮強(qiáng)烈收縮血管、促進(jìn)膠原沉積、心肌細(xì)胞增殖及血管鈣化等生物學(xué)效應(yīng)[5-6]。因此，防治MS誘導(dǎo)的心肌重構(gòu)除了控制相應(yīng)的危險(xiǎn)因素，還需要應(yīng)用針對(duì)其分子機(jī)制的藥物，麝香保心丸具有抑制炎癥反應(yīng)及抑制細(xì)胞凋亡等作用[7]，本課題組早期研究發(fā)現(xiàn)，麝香保心丸可抑制MS誘導(dǎo)的心肌重構(gòu)[8]，但分子機(jī)制未進(jìn)一步探討，為此，本實(shí)驗(yàn)觀察麝香保心丸對(duì)MS大鼠模型心肌重構(gòu)的變化，同時(shí)觀察心肌組織UⅡ/UT表達(dá)的變化，探討麝香保心丸的分子作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、藥品及儀器設(shè)備 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為8周齡雄性SD大鼠。鼠尾動(dòng)脈測(cè)壓儀由汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，高果糖飼料(60%)由北京華阜康生物科技有限公司配制提供；Beckman Coulter AU5800生化儀購自美國，由汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科提供；血糖試紙及快速血糖儀購自美國雅培；UⅡ放射免疫試劑盒由北京華英生物研究所提供；UT一抗(多克隆)購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司，二抗購自武漢博士德公司；麝香保心丸購自上海和黃藥業(yè)有限公司。

1.2 MS大鼠模型建立及分組 取雄性SD大鼠24只，先隨機(jī)分成正常對(duì)照組(8只)和MS組(16只)，分別用普通飼料和高果糖飼料喂養(yǎng)，8周后檢測(cè)大鼠空腹血糖、血清三酰甘油濃度和尾動(dòng)脈壓，以確定MS模型建立成功。然后再將MS組大鼠隨機(jī)分成模型對(duì)照組(8只)和麝香保心丸組(8只)， 麝香保心丸組予麝香保心丸25 mg/kg灌胃，每天1次。兩組均繼續(xù)高果糖飼料喂養(yǎng)，飼養(yǎng)4周。

1.3 標(biāo)本收集及處理 3組大鼠均禁食、禁水8 h以上，常規(guī)稱重麻醉，剪開胸腔暴露心臟取血，取一部分血置于普通試管，靜置凝固析出血清；一部分血置于含有EDTA和抑肽酶的試管中，低溫離心分離血漿，-80 ℃保存。摘取心臟，稱重后切取部分心肌組織，4%多聚甲醛固定，制作蠟塊，用錫紙包裹其余心肌組織，于-80 ℃保存。

1.4 大鼠空腹血糖、血清三酰甘油和尾動(dòng)脈壓測(cè)定 采用快速血糖儀檢測(cè)血糖；采用Beckman Coulter AU5800生化儀檢測(cè)血清三酰甘油濃度；采用鼠尾動(dòng)脈測(cè)壓儀測(cè)量血壓。

1.5 心肌肥厚指數(shù)測(cè)定和心肌組織Masson染色 心肌肥厚指數(shù)=心臟重量/體重；取大鼠心肌組織蠟塊，制作4 μm厚切片，脫蠟、水化、脫水，滴入Masson復(fù)合染色液進(jìn)行染色(按照說明書操作)，脫水、透明、封片，在光鏡下觀察。

1.6 大鼠血漿和心肌組織UⅡ含量測(cè)定 采用放射免疫法測(cè)定UⅡ含量，具體步驟按試劑盒說明書操作。

1.7 心肌組織UT表達(dá)測(cè)定 制作切片，脫蠟入水，5%胎牛血清封閉非特異性抗原，滴加UT一抗(濃度1∶200)過夜，滴加二抗，DAB顯色，具體步驟按說明書進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.1 大鼠MS模型的特點(diǎn) 與正常對(duì)照組相比，MS組大鼠血糖、三酰甘油和尾動(dòng)脈平均壓水平均明顯升高(P<0.01)。詳見表1。

表1 兩組空腹血糖、三酰甘油和尾動(dòng)脈平均壓水平比較(±s)

2.2 心肌組織膠原染色對(duì)比 MS大鼠心肌組織心肌細(xì)胞排列紊亂，細(xì)胞間質(zhì)可見明顯膠原沉積，心臟肥厚指數(shù)較正常組明顯增加。詳見圖1。

圖1 大鼠心肌組織Masson染色(×40)(藍(lán)色為膠原成分)

2.3 大鼠血漿和心肌組織UⅡ含量變化 與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組大鼠血漿UⅡ含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，心肌組織UⅡ含量、心臟肥厚指數(shù)明顯增加，用麝香保心丸干預(yù)后，心肌組織中UⅡ含量、心臟肥厚指數(shù)有所下降(P<0.01)。詳見表2。

表2 各組大鼠血漿、心肌組織UⅡ含量和心臟肥厚指數(shù)比較(±s)

2.4 大鼠心肌組織UT的表達(dá) MS大鼠心肌組織UT表達(dá)明顯上調(diào)，用麝香保心丸干預(yù)后，UT表達(dá)有所下調(diào)。詳見圖2。

圖2 大鼠心肌組織UT免疫組化染色(×100)(棕黃色為陽性表達(dá))

3 討 論

MS包括高血壓、尿酸及糖脂代謝異常等多種心血管危險(xiǎn)因素，這些均可導(dǎo)致血管損傷、細(xì)胞增殖、膠原沉積及心肌肥厚等作用，最終導(dǎo)致心血管重構(gòu)的發(fā)生，病理表現(xiàn)在平滑肌細(xì)胞、心肌細(xì)胞及心肌成纖維細(xì)胞等增殖明顯、細(xì)胞排列結(jié)構(gòu)紊亂、細(xì)胞間質(zhì)膠原明顯沉積等，主要分子機(jī)制包括血管活性因子作用、炎癥反應(yīng)、脂肪因子效應(yīng)及氧化應(yīng)激作用等[1-2，9]。而肥胖是導(dǎo)致MS的重要因素，近年來因生活方式的改變，肥胖人群明顯增多，導(dǎo)致MS發(fā)病率升高，因此，防治MS誘導(dǎo)的心肌重構(gòu)已成為主要治療目標(biāo)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，高果糖飼料飼養(yǎng)大鼠8周后可誘導(dǎo)具有典型MS特征的大鼠模型，并且MS大鼠心肌組織出現(xiàn)心肌細(xì)胞增殖、排列紊亂，膠原蛋白明顯沉積等，心臟肥厚指數(shù)較正常對(duì)照組大鼠明顯增加，提示大鼠心肌發(fā)生重構(gòu)，與其他學(xué)者研究結(jié)果[4]一致。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)MS大鼠心肌組織UⅡ/UT表達(dá)明顯增加，與心肌重構(gòu)的程度相關(guān)，而3組大鼠血漿UⅡ水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示UⅡ/UT可能通過自分旁分泌的方式參與了MS大鼠心肌重構(gòu)的過程。

UⅡ是近些年來發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)血管收縮物質(zhì)，UⅡ主要分布在心血管組織、神經(jīng)組織及內(nèi)分泌系統(tǒng)，研究發(fā)現(xiàn)UⅡ/UT 系統(tǒng)在心血管上的效應(yīng)主要是引起細(xì)胞增殖、遷移，促進(jìn)心肌細(xì)胞膠原蛋白合成，加重心血管重構(gòu)的發(fā)生與發(fā)展，與鈣離子、鈣調(diào)素、蛋白激酶C、絲裂素活化蛋白激酶及ERK/NF-κB等信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)[10-12]。本研究發(fā)現(xiàn)UⅡ/UT在正常生理狀態(tài)下在心血管組織的表達(dá)很少，但在高血壓、高脂血癥及胰島素抵抗等病理狀態(tài)的刺激和誘導(dǎo)下，UⅡ在心血管組織局部大量表達(dá)，同時(shí)UT表達(dá)上調(diào)并與UⅡ結(jié)合，從而發(fā)揮其促心肌細(xì)胞增殖、膠原蛋白沉積等生物學(xué)效應(yīng)，結(jié)合外周血液UⅡ表達(dá)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，考慮UⅡ/UT以自分泌/旁分泌的方式發(fā)揮作用可能性較大。

有研究發(fā)現(xiàn)，麝香保心丸具有保護(hù)血管內(nèi)皮功能、穩(wěn)定動(dòng)脈粥樣硬化斑塊、抑制炎癥反應(yīng)及血管鈣化[13-15]等作用。本實(shí)驗(yàn)用麝香保心丸干預(yù)后，MS大鼠心肌組織UⅡ和UT表達(dá)明顯下降，同時(shí)心肌組織膠原沉積和心臟肥厚指數(shù)有所減輕，提示麝香保心丸可抑制UⅡ/UT表達(dá)，改善心肌重構(gòu)，可能是改善心肌重構(gòu)的重要分子機(jī)制之一，這將為心肌重構(gòu)的機(jī)制研究及防治提供新的思路和作用靶點(diǎn)。