任光輝

[摘 要] 為了解河南省魯山縣使用重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗免疫效果，為今后科學(xué)決策免疫程序提供依據(jù)，本文隨機(jī)選取魯山縣家11個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)共50個(gè)場(chǎng)群為調(diào)查對(duì)象，采用血凝抑制試驗(yàn)方法對(duì)1 670份血清進(jìn)行H5、H7亞型禽流感免疫抗體檢測(cè)。結(jié)果顯示，使用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗場(chǎng)群占64.0%，H5、H7亞型群體合格率分別為76.0%和50.0%，個(gè)體合格率分別為86.3%和59.5%;未使用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗的風(fēng)險(xiǎn)是使用該疫苗的3.8倍。這表明使用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗免疫效果較好，建議對(duì)不合格抗體的養(yǎng)殖場(chǎng)戶(hù)及時(shí)補(bǔ)免。

[關(guān)鍵詞] H5亞型;H7亞型;禽流感;血清學(xué);魯山縣

[中圖分類(lèi)號(hào)] S855.3 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1674-7909（2020）21-113-2

禽流感是由A型流感病毒引起的一種禽類(lèi)（家禽和野禽）傳染病[1]。病毒根據(jù)血凝素（HA）和神經(jīng)氨酸酶（NA）的抗原性不同進(jìn)行分類(lèi)，目前HA分為H1～H16亞型，NA分為N1～N9亞型。由H5、H7亞型毒株引起的疾病稱(chēng)為高致病性禽流感（HPAI），發(fā)病急，發(fā)病率和病死率可達(dá)100%，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列為法定通報(bào)動(dòng)物疫病，被我國(guó)列為優(yōu)先防控和重點(diǎn)防范的一類(lèi)動(dòng)物疫病[2]。2004年和2017年，我國(guó)分別對(duì)H5、H7亞型禽流感實(shí)行強(qiáng)制免疫和抗體監(jiān)測(cè)，并要求采用重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗（H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株）集中免疫[3]。為了解河南省魯山縣高致病性禽流感免疫效果，制訂科學(xué)合理的免疫程序，開(kāi)展評(píng)價(jià)工作，正確判斷禽流感防控形勢(shì)，2019年10月魯山縣畜牧局組織開(kāi)展本次免疫效果監(jiān)測(cè)，以便提供可靠的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 抽樣設(shè)計(jì)

抽樣設(shè)計(jì)方法采用先群體抽樣再個(gè)體抽樣[4]。根據(jù)《2019年平頂山市動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)與流行病學(xué)調(diào)查計(jì)劃》，按照估計(jì)免疫抗體陽(yáng)性率方法，設(shè)85%的預(yù)期免疫抗體合格率（p），10%的可接受誤差（d），在95%的置信水平（CL）下，根據(jù)公式N=1.962×p×（1-p）/d 2計(jì)算出抽樣場(chǎng)數(shù)N=49個(gè)。并結(jié)合魯山縣春秋季強(qiáng)制免疫實(shí)際，對(duì)11個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)隨機(jī)抽樣50個(gè)場(chǎng)群開(kāi)展集中監(jiān)測(cè)。場(chǎng)群內(nèi)采取系統(tǒng)抽樣，依據(jù)場(chǎng)群分類(lèi)不同，在家禽養(yǎng)殖場(chǎng)抽取1 490份、活禽交易場(chǎng)所抽取150份、散養(yǎng)戶(hù)抽取30份，共采集樣品1 670份。具體抽樣設(shè)計(jì)見(jiàn)表1。

1.2 樣品采集

無(wú)菌操作翅靜脈采集雞血液，每只2～3 mL，3 000 r/min離心10～15 min，析出血清，做好標(biāo)記，-20 ℃保存?zhèn)錂z。

1.3 檢測(cè)試劑

禽流感H5亞型病毒（Re-8株）血凝抑制試驗(yàn)抗原，批號(hào)2019062;禽流感H7亞型病毒（H7N9株），批號(hào)2019071。以上2種試劑均為哈爾濱維科生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司產(chǎn)品。

1.4 檢測(cè)方法與判斷標(biāo)準(zhǔn)

按照《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB/T 18936—2003）[5]中血凝抑制試驗(yàn)（HI）檢測(cè)H5、H7亞型禽流感免疫抗體。判斷標(biāo)準(zhǔn)按照個(gè)體HI抗體效價(jià)≥24為免疫合格個(gè)體，群體免疫抗體合格率≥70%為免疫合格群體，H5和H7群體免疫抗體合格率均≥70%為免疫合格場(chǎng)群[6]。

2 結(jié)果與分析

2.1 H5、H7亞型禽流感免疫整體情況

在50個(gè)場(chǎng)群中，有32個(gè)場(chǎng)群使用重組禽流感（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗，占場(chǎng)群數(shù)量的64.0%（32/50）;H5亞型場(chǎng)群合格率為76.0%（38/50），個(gè)體合格率為86.3%（1 442/1 670）;H7亞型場(chǎng)群合格率為50.0%，個(gè)體抗體合格率為59.5%（993/1 670）。養(yǎng)殖場(chǎng)的H5、H7亞型群體合格率和個(gè)體合格率均高于散養(yǎng)戶(hù)和活禽交易點(diǎn)，且差異顯著（P<0.05）。

2.2 使用不同疫苗的場(chǎng)群抗體合格率比較

在50個(gè)場(chǎng)群中，32個(gè)使用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗，18個(gè)使用其他禽流感類(lèi)型疫苗和未免疫。比較使用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗場(chǎng)群與使用其他疫苗和未免疫場(chǎng)群的H5、H7亞型免疫抗體，可以看出前者個(gè)體免疫抗體合格率均大于70%，分別比后者高出27.5%、187.3%，差異極顯著（P<0.01）;同時(shí)，前者群體合格率也大于未使用的群體合格率，分別高于37.9%、124.8%，差異極顯著（P<0.01）。不使用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗導(dǎo)致禽流感群體免疫合格率低于70%的風(fēng)險(xiǎn)是使用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗的2.6倍（OR=2.6，95%CL：1.1～13.0）。

2.3 群間分布

家禽種類(lèi)不同，H5、H7亞型禽流感場(chǎng)個(gè)體免疫抗體情況存在差別。雞和其他禽類(lèi)（鴨、鵝）全部場(chǎng)群合格率分別為50%和0，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。雞和其他禽類(lèi)（鴨、鵝）的H5亞型個(gè)體合格率分別為86.1%、91.4%，差異不顯著（P>0.05）;H7亞型個(gè)體合格率分別為62.1%、0，差異極顯著（P<0.01）。

2.4 空間分布

分析魯山縣高致病性禽流感空間分布，結(jié)果顯示，魯山縣11個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)區(qū)域內(nèi)群體合格率和個(gè)體合格率不均衡，存在較大差異。D、F、K鄉(xiāng)鎮(zhèn)的H5、H7亞型場(chǎng)群合格率和個(gè)體合格率均高于70%，占鄉(xiāng)鎮(zhèn)總數(shù)的27.3%（3/11），符合國(guó)家要求;而A、E、H、I和J鄉(xiāng)鎮(zhèn)的H7亞型免疫抗體未檢測(cè)到，占鄉(xiāng)鎮(zhèn)總數(shù)的45.5%（5/11）。

3 討論

高致病禽流感對(duì)養(yǎng)禽業(yè)危害巨大，我國(guó)將高致病性禽流感納入強(qiáng)制免疫計(jì)劃，實(shí)行H5亞型和H7亞型高致病性禽流感100%免疫。2017年秋季，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部要求使用H5+H7二價(jià)滅活疫苗替代重組禽流感病毒H5二價(jià)或三價(jià)滅活疫苗，對(duì)家禽實(shí)施免疫[3]。魯山縣按照平頂山市統(tǒng)一部署，要求家禽養(yǎng)殖場(chǎng)戶(hù)使用H5+H7二價(jià)滅活疫苗開(kāi)展高致病性禽流感免疫。本次檢測(cè)對(duì)魯山縣高致病性禽流感免疫抗體水平進(jìn)行初步整體情況了解和判斷，為下一步做好禽流感免疫工作打下基礎(chǔ)。

本次檢測(cè)是在秋季強(qiáng)制免疫21 d后進(jìn)行的抽樣抗體檢測(cè)，從本調(diào)查檢測(cè)數(shù)據(jù)看，場(chǎng)群免疫密度達(dá)不到100%。進(jìn)一步對(duì)抽樣檢測(cè)點(diǎn)進(jìn)行調(diào)查發(fā)現(xiàn)，主要是對(duì)該病重視度不夠，部分養(yǎng)禽場(chǎng)戶(hù)沒(méi)有按照要求替換使用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗。從群間分布看，雞的H5亞型個(gè)體免疫抗體合格率低于其他家禽（鴨、鵝），差異不顯著（P>0.05），而H7亞型個(gè)體免疫合格率遠(yuǎn)高于其他家禽，這可能與疫苗種類(lèi)不同，其疫苗毒株的免疫原性存在差別有關(guān)。根據(jù)空間分布調(diào)查來(lái)看，全區(qū)有3個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的H5、H7個(gè)體免疫抗體水平符合國(guó)家要求，其余鄉(xiāng)鎮(zhèn)未達(dá)標(biāo)。因此，建議開(kāi)展免疫普查，強(qiáng)化免疫效果監(jiān)測(cè)與評(píng)價(jià)，積極落實(shí)“先打后補(bǔ)”，對(duì)未達(dá)標(biāo)鄉(xiāng)鎮(zhèn)進(jìn)行補(bǔ)免。

對(duì)比使用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗和未使用場(chǎng)群的個(gè)體免疫抗體合格率，前者H5、H7亞型個(gè)體抗體免疫合格率均符合國(guó)家的規(guī)定，高于70%，而后者雖然H5個(gè)體抗體免疫合格率符合國(guó)家要求，但是H7亞型不符合要求，甚至沒(méi)有檢測(cè)出抗體。這與錢(qián)昌銀等[7]調(diào)查結(jié)果一致。風(fēng)險(xiǎn)分析也進(jìn)一步證實(shí)了使用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗的安全可靠性。

4 結(jié)論

本次血清學(xué)調(diào)查結(jié)果表明，使用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗免疫可以達(dá)到免疫保護(hù)水平，效果優(yōu)于未使用的。建議加大宣傳力度，要求家禽養(yǎng)殖場(chǎng)戶(hù)使用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗，對(duì)免疫不合格者進(jìn)行補(bǔ)免。

參考文獻(xiàn)

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[5]中國(guó)人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.高致病性禽流感診斷技術(shù)：GB/T 18936—2003[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2003.

[6]中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部.《2019年國(guó)家動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)與流行病學(xué)調(diào)查計(jì)劃》的通知[EB/OL].（2019-05-30）[2020-06-16].http：//www.xmsyj.moa.gov.cn/gzdt/201905/t20190530_6315850.htm.

[7]錢(qián)昌銀，程曉峰，劉華，等.2017年安徽省合肥市禽流感抗體檢測(cè)[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫，2018（12）：26-28，42.