唐 健，呂夢欣，何建萍，羅勝軍，黨峰博，錢 源，羅 蘭

（1） 昆明市婦幼保健院醫(yī)學遺傳與產前診斷科，云南昆明 650031；2） 昆明醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院，云南省檢驗醫(yī)學重點實驗室，云南昆明 650032；3） 昆明醫(yī)科大學細胞生物學與醫(yī)學遺傳學系，云南昆明 650500）

地中海貧血（以下簡稱地貧） 是由于珠蛋白肽鏈合成障礙而引發(fā)的溶血性貧血，屬于常染色體隱性遺傳病，全球約有1.5%的人為地貧基因攜帶者[1]。目前對地貧尚無有效的根治方法，中重度地貧患兒出生后，終生只能依靠定期輸血、祛除鐵、脾臟切除、藥物治療、預防并發(fā)癥等常規(guī)治療維持生命[2]。因此，進一步做好婚前檢查、孕前檢查、產前篩查、產前診斷等地貧防控工作，避免中重型地貧患兒的出生，是提高出生人口質量與素質的重要舉措之一[3]。

地貧基因診斷是檢測地貧基因攜帶者的有效方法[4]，也是地貧防控體系中的重要檢測手段。云南省地貧防控項目啟動較晚，雖然開展了一些區(qū)域性的流行病學調查，但覆蓋范圍和調查的樣本量均較為有限，尚缺乏系統(tǒng)的資料。因此，本研究對昆明地區(qū)孕婦人群進行地貧基因診斷，以深入了解昆明地區(qū)地貧基因突變譜分布特點，填補昆明地區(qū)孕婦地貧基因突變譜的空白，為昆明地區(qū)地貧防控體系的構建創(chuàng)造有利的條件。

1 對象與方法

1.1 研究對象

本研究經醫(yī)院倫理委員會同意，選自2019 年1 月至6 月來昆明市婦幼保健院進行常規(guī)產檢的5 284 名孕婦，在自愿簽署23 型我國常見地貧基因型檢測知情同意書后，采集外周靜脈血3 mL，EDTA-K2 抗凝備用。

1.2 研究方法

1.2.1 DNA 提取 采用亞能生物技術（深圳） 有限公司提供的全血DNA 提取試劑盒進行DNA 提取，操作過程按試劑盒說明書進行。

1.2.2 基因診斷 采用亞能生物技術（深圳） 有限公司提供的地中海貧血基因檢測試劑盒（PCR-反向點雜交法），操作先按說明書進行基因擴增，然后對擴增產物進行23 型常見地中海貧血基因型（SEA、-α3.7、-α4.2、αCSα、αQSα、αWSα、41-42M、654M、-28M、71-72M、17M、βEM、IVS-I-1M、IVS-I-5M、27/28M、43M、-29M、-30M、31M、-32M、14-15M、IntM 和CAPM）DNA 反向點雜交1.5～4 h、洗膜15 min、孵育30 min、3，3’，5，5’-四甲基聯苯胺顯色5 min、判讀結果。

1.3 統(tǒng)計學處理

孕婦信息及檢測結果經核實整理后采用SPSS軟件進行統(tǒng)計學分析，計數資料以例數或百分率表示，將檢測出的α-地貧、β-地貧、α 復合β 地貧三組隨機區(qū)組設計資料采用χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

地貧基因檢測結果：5 284 例孕婦中檢出23 型常見地貧基因型共計313 例，地貧總攜帶率為5.92%，其中檢出α-地貧229 例，攜帶率為4.33%，占地貧總攜帶數的73.16%；檢出β-地貧80 例，攜帶率為1.51%，占地貧總攜帶數的25.56%；檢出復合型地貧5 例，攜帶率為0.09%，占地貧總攜帶數的1.60%，見表1。對常見三種地貧基因型構成比進行χ2檢驗，所有格子理論頻數均大于5，χ2=372.621，P=0.001，統(tǒng)計學具有顯著性差異，可認為昆明地區(qū)地貧基因型以α-地貧為主，占總檢出率的73.16%，較β-地貧和復合型地貧檢出率高。

α-地貧的基因型檢測結果顯示：6 種常見基因型中，如表1 所示，αα/-α3.7型占地貧總攜帶數的44.09%；αα/--SEA型占地貧總攜帶數的16.93%；αα/-α4.2型占地貧總攜帶數的5.11%；αCSα/αα 型占地貧總攜帶數的2.88% ；-α3.7/-α3.7型占地貧總攜帶數的 0.96% ；--SEA/-α3.7型占地貧總攜帶數的 0.64% ；-α3.7/αWSα 型占地貧總攜帶數的0.32% ；αQSα/αα 型未檢出。檢出的α-地貧按攜帶率排序，前五位順位排列依次為αα/-α3.7型、αα/--SEA型、αα/-α4.2型、αCSα/αα 型和-α3.7/-α3.7型，見圖1A～圖1E。

β-地貧的基因型檢測結果顯示：17 種常見基因型中，如表1 所示，βEM/N 型占地貧總攜帶數的6.71%；IVS-Ⅱ-654M/N 型占地貧總攜帶數的5.43%；CD17M/N 型占地貧總攜帶數的5.43%；-28M/N 型占地貧總攜帶數的0.64%；CAPM/N 型占地貧總攜帶數的0.64%；CD43M/N 型占地貧總攜帶數的0.32%；-32M/N 型占地貧總攜帶數的0.32%；其余8 種基因型未檢出。檢出的β-地貧按攜帶率排序，前五位順位排列依次為βEM/N型、IVS-Ⅱ-654M/N 型、CD17M/N 型、CD41－42M/N 型和CD71-72M/N 型，見圖2A～圖2E。

復合型地貧的基因型檢測結果顯示：檢出5 例復合型地貧，如表1 所示，2 例αα/--SEA復合βEM/N 型占地貧總攜帶數的0.64% ；1 例αα/-α3.7復合βEM/N 型占地貧總攜帶數的0.32%；1 例αα/-α3.7復合IVS-Ⅱ-654M/N 型占地貧總攜帶數的0.32%；1 例αCSα/αα 復合CD17M/N 型占地貧總攜帶數的0.32%，見圖3A～圖3D。

表1 地貧基因檢測結果（%）Tab.1 Statistical table of gene detection results of thalassemia（%）

圖1 α-地貧基因檢測結果Fig.1 Results of α-thalassemia genetic test

圖2 β-地貧基因檢測結果Fig.2 Results of β-thalassemia genetic test

圖3 αβ-地貧復合型基因檢測結果Fig.3 Results of α-thalassemia combined β-thalassemia genetic test

3 討論

地貧最早發(fā)現于地中海沿岸地區(qū)而得名，主要分布在東南亞、地中海沿岸地區(qū)以及熱帶與亞熱帶地區(qū)[5-7]，云南省與廣西接壤，毗鄰東南亞，是我國瘧疾流行的主要區(qū)域[8]。有研究表明，瘧疾選擇壓力使人類血紅蛋白基因發(fā)生改變，導致地貧的高發(fā)病率[9]。地貧可分為α 地貧、β 地貧、γ 地貧、δβ 地貧等，以α 和β 地貧最為常見.中國α 地貧主要以-α3.7、SEA、-α4.23 種大片段缺失型以及αCSα、αWSα、αQSα3 種點突變型為主；β地貧主要以41-42M、654M、-28M、71-72M、17M、βEM、IVS-I-1M、IVS-I-5M、27/28M、43M、-29M、-30M、31M、-32M、14-15M、IntM、CAPM等17 種點突變?yōu)橹鱗10]。

本研究結果表明：昆明地區(qū)5 284 例孕婦中地貧攜帶率為5.92%，低于我國地貧發(fā)病率最高的廣西[11]、廣東[12]等地區(qū)，但高于福建[13]、湖南[14]等地區(qū)，這說明昆明地區(qū)地貧發(fā)病率也相對較高。在檢出的地貧類型中，α-地貧攜帶者占73.16%（P＜0.01），β-地貧攜帶者占25.56% （P＜0.01）。地貧類型構成比經χ2檢驗具有顯著性差異。這表明昆明地區(qū)的地貧防治干預應以α-地貧為主，同時也要兼顧β-地貧。

α-地貧的基因檢測結果表明：昆明地區(qū)α-地貧常見的基因型以αα/-α3.7型最為多見，其后依次為αα/--SEA、αα/-α4.2和αCSα/αα。其中αα/-α3.7型占43.95%，這與云南本省[15]以及我國南方部分省份α-地貧基因攜帶中αα/--SEA基因型占首位的報道差異較大[16-18]，這可能與這些文獻報道中基因檢測樣本均選取血液學篩查陽性的樣本有關。有研究表明，αα/-α3.7型一般血液學表現為正?；蛘咻p度貧血[19-20]，當αα/-α3.7型血液學表現為正常時，地貧防控中血液學篩查則為假陰性，若與αα/--SEA型婚配，有1/4 的概率會生育Hb H 型地貧患兒。因此，αα/-α3.7基因型攜帶者的及時檢出對地貧防控有著積極的促進作用。

β-地貧的基因檢測結果表明：昆明地區(qū)β-地貧常見的基因型以βEM/N 最為多見，其后依次為IVS-Ⅱ-654M/N、CD17M/N、CD41-42M/N 基因型，這與朱寶生[15]報道的βEM/N（CD26G ＞A）在云南省人群中的第一順位突變基因型一致。海南和廣東地區(qū)人群檢出的β 珠蛋白突變基因第一順位均為CD41-42M/N[10，17]，而貴州和廣西人群檢出的β 珠蛋白突變基因第一順位為CD17M/N[10]，這提示昆明地區(qū)人群的β 珠蛋白突變譜與我國南方其他地區(qū)有所不同。

復合型地貧的基因型檢測結果表明：昆明地區(qū)復合地貧攜帶率為1.6%，與黃道連[21]在廣東中山市檢出的復合型地貧攜帶率1.58%接近。有研究表明，在地貧高發(fā)區(qū)，復合型地貧攜帶率越高越易形成惡性循環(huán)，生育中重型地貧患兒的概率越高[22]，因此，應高度重視對復合型地貧攜帶者的婚育指導。

綜上所述，昆明地區(qū)孕婦人群地貧攜帶率為5.92%，其中α-地貧占73.16%，以αα/-α3.7型最為常見；β-地貧占25.56%，以βEM/N 最為常見；復合型地貧占1.60%。這提示昆明地區(qū)人群的地貧基因突變譜與我國南方其他地區(qū)有所不同，多 見αα/-α3.7、αα/--SEA、βEM/N、IVS-Ⅱ-654M/N、CD17M/N 這5 種基因型。在孕婦中進行地貧基因攜帶者的基因檢測，是高風險胎兒進行產前地貧基因診斷的重要前提，也是昆明地區(qū)地貧防控體系構建的重要參考依據。