任艷鑫，廖曼各，楊 潔，王曉莉，李曉江

（1） 昆明醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院頭頸外一科；2） 放療中心，云南昆明 650118）

甲狀腺癌是最常見的內(nèi)分泌惡性腫瘤，發(fā)病率在全世界逐年上升。甲狀腺乳頭狀癌（papillary thyroid cancer，PTC） 是最常見的類型，約占總體的80%～85%，甲狀腺癌在青春期前的男孩和女孩的發(fā)病率無差異，但是青春期女性發(fā)病率是男性的14 倍。絕經(jīng)后，女性甲狀腺癌患病率逐漸下降，因此，甲狀腺癌也被稱為激素依耐性腫瘤[1]。

雌激素受體（estrogen receptor，ER） 和人表皮生長(zhǎng)因子受體2（human epidermalgrowth factor receptor-2，HER-2） 作為乳腺癌的腫瘤標(biāo)記物，可指導(dǎo)乳腺癌的治療方式以及預(yù)后。研究發(fā)現(xiàn)ER和HER-2 同樣會(huì)促進(jìn)甲狀腺惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。本文章初步探討ER 和HER-2 在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)，為進(jìn)一步研究其機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 病例資料

選取2010 年1 月至2010 年6 月昆明醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院甲狀腺乳頭狀癌和甲狀腺良性腫瘤患者。所有患者由同一組醫(yī)生進(jìn)行手術(shù)治療，手術(shù)切除標(biāo)本由兩位有經(jīng)驗(yàn)的病理科醫(yī)生確診，同時(shí)排除其他惡性腫瘤。收集病例中甲狀腺乳頭狀癌76 例，男10 例，女性66 例；年齡16～75歲，平均43.5 歲，按2017 年AJCC 聯(lián)合提出的分化型甲狀腺癌TNM分期法進(jìn)行臨床分期：Ⅰ期38例，Ⅱ期18 例，Ⅲ期19 例，Ⅳ期1 例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的25 例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的51 例。甲狀腺良性腫瘤19 例，男5 例，女14 例；年齡20～63歲，平均40.7 歲，其中甲狀腺腺瘤8 例，結(jié)節(jié)性甲狀腺腫10 例，甲狀腺囊腫1 例。

1.2 免疫組化檢測(cè)組織中ER、HER-2 的表達(dá)

石蠟切片脫蠟，微波爐抗原修復(fù)，3%H2O2-甲醛浸泡10 min 后加入10%山羊血清置室溫20 min。分別加入一抗（ER、HER-2 兔抗人單抗，福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司），工作濃度1：100，4℃過夜。滴加二抗（ER、HER-2 鼠抗兔單抗，福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司），室溫孵育15 min，PBS 沖洗后加HRP 標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，37℃孵育10 min。DAB 顯色劑顯色，蘇木素復(fù)染，中性樹膠封固。所有切片均有兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)師盲法閱片。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS11.5 軟件包分析，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)或Fisher 確切概率法，甲狀腺乳頭狀癌局部復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移差異用Kaplan-Meier 分析，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ER、HER-2 在甲狀腺乳頭狀癌組織中高表達(dá)

ER 在甲狀腺乳頭狀癌組織中主要表達(dá)于細(xì)胞核，少量在細(xì)胞膜和細(xì)胞漿（圖1）；HER-2 在甲狀腺乳頭狀癌組織中主要表達(dá)于細(xì)胞膜，少量在細(xì)胞漿，色棕黃，呈灶狀或彌漫狀分布（圖2）。ER 在甲狀腺乳頭狀癌陽性表達(dá)率為65.8%，在良性腫瘤中陽性表達(dá)率為5.3%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。HER-2 在甲狀腺乳頭狀癌陽性表達(dá)率為93.4%，在良性腫瘤中陽性表達(dá)率為10.5%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

圖1 甲狀腺組織的ER 表達(dá)情況Fig.1 ER expression in thyroid tissue

表1 各組ER、HER-2 的表達(dá)率［n（%）］Tab.1 The positive rate of ER and HER-2in each group［n（%）］

2.2 甲狀腺乳頭狀癌組織中ER、HER-2 與臨床因素的關(guān)系

甲狀腺乳頭狀癌中ER 表達(dá)與腫瘤侵犯周圍組織相關(guān)，與年齡、性別、腫塊大小、是否為多灶、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分期無關(guān)（P＞0.05）。HER-2 表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（P＜0.05），與年齡、性別、腫塊大小、包膜侵犯、是否為多灶及分期無關(guān)（P＞0.05），見表2、表3。

表2 甲狀腺乳頭狀癌ER 表達(dá)率與臨床特征的相關(guān)性Tab.2 Correlation between ER expression and clinical features in papillary thyroid carcinoma

表3 甲狀腺乳頭狀癌HER-2 表達(dá)率與臨床特征的相關(guān)性Tab.3 Correlation between HER-2 expression and clinical features in papillary thyroid carcinoma

2.3 ER、HER-2 表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌局部復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的關(guān)系

所有甲狀腺癌患者按照指南進(jìn)行手術(shù)治療后接受規(guī)范內(nèi)分泌治療，部分患者按照指南接受I131治療，定期隨訪。發(fā)現(xiàn)ER 陽性表達(dá)的甲狀腺乳頭狀癌患者5 a 局部復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移率遠(yuǎn)高于ER 陰性表達(dá)患者（15.0% vs 2.1%，P＜0.05）。HER-2 陽性表達(dá)的甲狀腺乳頭狀癌患者5 a 局部復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移率也高于HER-2 陰性表達(dá)患者（13.5%vs 3.2%，P＜0.05），見圖3。

圖3 甲狀腺乳頭狀癌單因素Kaplan-Meier 分析Fig.3 The cumulative local recurrence and metastasis rates of papillary

3 討論

ER 屬于類固醇激素受體家族，雌激素通過與ER 結(jié)合調(diào)節(jié)生殖系統(tǒng)的生長(zhǎng)與分化，同時(shí)也影響肝、骨、腦及心血管、內(nèi)分泌等系統(tǒng)的生理功能。同時(shí)，雌激素與ER 相互作用促進(jìn)靶器官腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。謝辛慈等[3]發(fā)現(xiàn)ER 在多種實(shí)體腫瘤中存在過表達(dá)，多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)胃癌患者ER 表達(dá)高于正常胃組織，并且ER 表達(dá)與腫瘤分化程度相關(guān)，ER 是胃癌負(fù)性預(yù)后指標(biāo)[4]，Magri F 等[5]發(fā)現(xiàn)甲狀腺癌組織中ER 的表達(dá)率顯著高于正常甲狀腺組織。Chen D 等[6]采用免疫組化檢測(cè)甲狀腺乳頭狀癌患者ERα 的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)ERα 的高表達(dá)與腫瘤大小相關(guān)，作者認(rèn)為ERα 可作為是甲狀腺乳頭狀癌的預(yù)后指標(biāo)。Liu J 等[7]發(fā)現(xiàn)甲狀腺癌組織ER 高表達(dá)，而且與腫瘤分化程度相關(guān)，而與患者性別、年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤大小無相關(guān)性。Ahmed RA[8]發(fā)現(xiàn)甲狀腺乳頭狀癌ERα 表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、腺體外侵犯、是否多灶以及復(fù)發(fā)相關(guān)，并且腫瘤大小、腺體外侵犯及ER 表達(dá)是甲狀腺乳頭狀癌無進(jìn)展生存的獨(dú)立預(yù)后因素。目前認(rèn)為，ER 可以激活下游靶基因：血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vessel endothelial growth factor，VEGF）、E-鈣黏蛋白、波形蛋白、基質(zhì)金屬蛋白酶-9、CyclinD-1、NF-κB 等，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移[9]。本研究發(fā)現(xiàn)甲狀腺乳頭狀癌高表達(dá)ER 與腫瘤侵犯相關(guān)，間接說明ER 可能通過信號(hào)通路促進(jìn)腫瘤組織的生長(zhǎng)。

HER-2 是人表皮生長(zhǎng)因子受體家族的一員，HER-2 可以形成同源或者異源二聚體，磷酸化酪氨酸激酶激活下游信號(hào)通路（包括MAPK、Akt 和JNK） 調(diào)節(jié)腫瘤的增殖、分化和抗凋亡，HER-2可作為惡性腫瘤的預(yù)后指標(biāo)[10-11]。目前研究發(fā)現(xiàn)大約有20%的乳腺癌存在HER-2 的過表達(dá)，這提示患者容易出現(xiàn)淋巴結(jié)和遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移[12]。胃癌中HER-2 過表達(dá)預(yù)示患者預(yù)后不佳，HER-2 表達(dá)與患者的性別、腫瘤大小、腫瘤分期、有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及分型、分級(jí)相關(guān)[13]。Sugishita Y 等[14]研究發(fā)現(xiàn)HER-2 高表達(dá)的甲狀腺癌更易出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，預(yù)示不良預(yù)后，與本次研究結(jié)果一致。HER-2 的過度表達(dá)與甲狀腺癌患者端粒長(zhǎng)度的縮短以及基因RET/PTC1-3、ETV6-NTRK3、AGK-BRAF 和BRAFV600E 突變相關(guān)，HER-2 的過度擴(kuò)增代表腫瘤侵襲性增加[15-16]。

甲狀腺乳頭狀癌作為一種內(nèi)分泌惡性腫瘤，ER 和HER-2 的高表達(dá)均與甲狀腺癌的不良預(yù)后相關(guān)，兩者之間可能存在相互作用信號(hào)通路，尚需進(jìn)一步研究揭示其中機(jī)制，為甲狀腺乳頭狀癌的治療提供新的方法。