李 丹,吳海紅,岳 玲,馮秀麗

(遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所,遼寧 沈陽 110161)

蟆葉秋海棠又稱王秋海棠、毛葉秋海棠,是著名的盆栽花卉,為秋海棠屬多年生草本觀葉植物。 葉片卵圓形,正面綠色,帶金屬光澤,具有不規(guī)則的紅色環(huán)紋,葉片背面紅色,葉柄紅色,葉片與葉柄均多毛。 花朵飽滿呈淡粉紅色,清新雅致,同時(shí)具有很好的觀葉與觀花效果。 是應(yīng)用較多的室內(nèi)裝飾植物,適用于賓館、廳室、櫥窗等的擺放點(diǎn)綴。 盆栽幾年之后,植株長勢減弱,葉片色彩變淡,需要重新繁殖。 海棠屬的植物種子多不易獲得,有性繁殖能力弱,且易發(fā)生變異,優(yōu)良性狀難以保持。 蟆葉秋海棠采用傳統(tǒng)的分株于葉插得繁殖,繁殖系數(shù)低,速度慢,且受季節(jié)限制。 采用組織培養(yǎng)的方法對蟆葉秋海棠進(jìn)行繁殖,具有繁殖系數(shù)高、不受季節(jié)限制等優(yōu)點(diǎn)。 本試驗(yàn)以蟆葉秋海棠的葉片和葉柄為外植體,旨在建立一套完整的蟆葉秋海棠快繁技術(shù)體系。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

蟆葉海棠植株2018 年11 月份采于遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院連棟溫室內(nèi),將其葉片與葉柄一并剪下,作為外植體。

1.2 試驗(yàn)方法

將剪下的外植體用洗衣粉水清洗掉表面污垢,放到流水下沖洗30 min 左右。 將葉柄剪下,切成1.5 cm 左右的小段,葉片切成1.5 ～2 cm 見方的小塊待用。 在超凈工作臺(tái)上,用濾紙將實(shí)驗(yàn)材料表面的水分吸干,放入到0.1%的氯化汞溶液中滅菌,滅菌時(shí)間設(shè)計(jì)為3、5、7 min,然后用無菌水沖洗3 ～4 次,將葉片與葉柄接觸到氯化汞的邊緣分別切掉0.5 cm 備用。 將準(zhǔn)備好的試驗(yàn)材料接種到誘導(dǎo)愈傷培養(yǎng)基上,待長出愈傷組織后,將愈傷切塊,接種到增殖培養(yǎng)基上,每瓶接種4 塊,當(dāng)增殖的不定芽長到一定大小后切下,接種到生根培養(yǎng)基中,培養(yǎng)30 d 左右練苗移栽。

誘導(dǎo)愈傷:培養(yǎng)基采用MS 作為基本培養(yǎng)基,添加不同濃度的6-BA 與NAA 組合,6-BA 的濃度設(shè)計(jì)為0.1、0.5、1.0 mg/L,NAA 的濃度為0.01、0.1、0.5 mg/L,共9個(gè)組合,培養(yǎng)基pH 調(diào)至5.8,加入蔗糖30 g/L。 增殖培養(yǎng):培養(yǎng)基采用MS 作為基本培養(yǎng)基,添加不同濃度的6-BA 與 NAA 組 合, 6-BA 的 濃 度 設(shè) 計(jì) 為 0.1、 0.5、2.0 mg/L,NAA 的濃度為0.01、0.1、1.0 mg/L。 生根培養(yǎng):以 1/2MS 為 基 本 培 養(yǎng) 基, 添 加 NAA 0.1、 0.5、1.0 mg/L 進(jìn)行培養(yǎng)。

2 結(jié)果與分析

2.1 滅菌時(shí)間的選擇

每個(gè)滅菌時(shí)間接種30 瓶培養(yǎng)基,其中3 min 的滅菌時(shí)間污染率達(dá)到40%左右,5 min 與7 min 的處理污染率都為0,可見蟆葉海棠葉片與葉柄的消毒時(shí)間5 min 即可。

2.2 誘導(dǎo)培養(yǎng)基的選擇

將滅完菌的葉片與葉柄分別接種到6-BA 與NAA 組合的9 種培養(yǎng)基中,其中葉柄無論在哪個(gè)組合的培養(yǎng)基中都沒有愈傷組織長出,可見葉柄并不適合作為誘導(dǎo)愈傷的外植體使用。 葉片在6-BA0.1 mg/L,NAA 0.01 mg/L的組合中誘導(dǎo)率最高,愈傷組織呈綠色,質(zhì)地緊密,可見芽點(diǎn),易 于 出 芽。 高 濃 度 的6-BA 0.1 mg/L,NAA 0.01 mg/L 的組合也有愈傷組織長出,但愈傷呈白色,出現(xiàn)透明狀,有玻璃化的趨勢,不利于出芽。 由此可見,蟆葉海棠的愈傷誘導(dǎo)需要低濃度的6-BA 與NAA 組合,6-BA 的濃度是NAA 的10 倍,有利于愈傷的長出。

表 1 不同6-BA 與NAA 濃度對葉片誘導(dǎo)愈傷的影響

2.3 增殖培養(yǎng)基的選擇

帶芽點(diǎn)的愈傷塊接種到增殖培養(yǎng)基上后,各激素濃度組合的培養(yǎng)基都會(huì)有芽增殖,高濃度的6-BA 產(chǎn)生大量的叢生芽,但芽不會(huì)長大,不能用于接種生根,高濃度NAA 不利于芽的增殖,培養(yǎng)一段時(shí)間后愈傷組織塊褐化嚴(yán)重,低濃度的激素組合有利于芽的增殖與生長,適合的增殖培養(yǎng)基是6-BA 0.1 mg/L,NAA 0.01 mg/L。

表 2 不同6-BA 與NAA 濃度對芽增殖的影響

2.4 生根培養(yǎng)基的選擇

當(dāng)不定芽長到3 ～5 cm 時(shí)切下,接種到生根培養(yǎng)基中,14 d 以后觀察結(jié)果。 當(dāng)NAA 的濃度為1.0 mg/L 時(shí),沒有根長出,濃度為0.1 mg/L 時(shí)有少量的根長出,但根系弱,根數(shù)少,不適合移栽。 NAA 濃度為0.5 mg/L 時(shí),有較多的根長出,根系壯。 適合生根的培養(yǎng)基是1/2MS 為基本培養(yǎng)基,添加NAA 0.5 mg/L。

2.5 移栽

待苗長到5 cm 以上,且有多條根時(shí),在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)把瓶口擰松,進(jìn)行練苗,2 d 后移栽。 把苗從瓶內(nèi)取出,洗凈根部殘留的瓊脂,避免滋生細(xì)菌,移栽入蛭石與草炭1 ∶2的基質(zhì)中。 由于秋海棠原產(chǎn)熱帶及亞熱帶,大多數(shù)品種抗寒性較差,且組培苗抗逆性較弱,對溫度、濕度要求較嚴(yán)格,溫度控制在20 ～25 ℃,早、中、晚3 次葉片噴霧,使?jié)穸缺３?0%,14 d 統(tǒng)計(jì)成活率,可達(dá)96%以上。

表 3 不同NAA 濃度對生根的影響

3 結(jié)論與討論

在蟆葉秋海棠的組培快繁體系中葉片可以作為外植體使用,葉柄不宜作為外植體,通過誘導(dǎo)葉片產(chǎn)生愈傷組織,愈傷組織增殖長出叢生芽從而得到完整的植株。 誘導(dǎo)愈傷和增殖的培養(yǎng)基均以MS 作為基本培養(yǎng)基,添加低濃度的6-BA 與NAA,6-BA 以0.1 mg/L 為 宜,NAA 以0.01 mg/L 為宜。 生根培養(yǎng)基以1/2 MS 為基本培養(yǎng)基,添加NAA 0.5 mg/L,高濃度的NAA 不利于生根。 蟆葉秋海棠組培苗的移栽對栽培基質(zhì)的要求不高,但對栽培環(huán)境有一定的要求,控制好溫度與濕度,就可得到較高的成活率。

在叢生芽增殖的過程中,雖然有較高的增殖率,但也存在愈傷組培塊褐化的情況,這也是以后的工作中重點(diǎn)研究的問題。