王清 李響 吳迪 張殿文 李偉

(吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130012)

W112化學(xué)名為4-正庚氧基-1，2，4-三唑-3-酮。W112是一類(lèi)全新結(jié)構(gòu)的化合物，其具有療效好、毒性低、價(jià)格低廉等特點(diǎn)。本文通過(guò)4種化學(xué)物質(zhì)誘發(fā)驚厥模型，探討W112的抗癲癇作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1動(dòng)物 昆明種小鼠，體重19～21 g，雌雄各半，購(gòu)自長(zhǎng)春生物制品研究所有限責(zé)任公司，合格證號(hào)：SCXK(吉)2011-0003。

1.2實(shí)驗(yàn)用藥與試劑 W112單體化合物，類(lèi)白色粉末，純度大于98.5%，由延邊大學(xué)藥化教研室提供，批號(hào)：20140502；陽(yáng)性對(duì)照藥：托吡酯片，西安楊森制藥有限公司，批號(hào)：131216725；卡馬西平片，北京諾華制藥有限公司，批號(hào)：X0477；苯妥英鈉片，天津力生制藥有限公司，批號(hào)：1302005。戊四唑(PTZ)，批號(hào)：1401097；荷包牡丹堿(Bic)，批號(hào)：20100601；3-巰基丙酸(MP)，批號(hào)：32755；硫代氨基脲(TSZ)，批號(hào)：34931，以上試劑均由上海晶純生化科技股份有限公司生產(chǎn)。羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)，批號(hào)：F20071228，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.3儀器 JA1003B型電子天平，上海越平科學(xué)儀器有限公司；T-1000型電子天平，常熟市雙杰測(cè)試儀器廠。

1.4對(duì)PTZ、Bic、3-MP、TSZ所致小鼠驚厥的影響 ①PTZ致小鼠驚厥：采用戊四唑驚厥發(fā)作閾試驗(yàn)(MET)〔1～3〕方法，取昆明種小鼠60只，隨機(jī)等分為六組，模型對(duì)照組、卡馬西平100 mg/kg、托吡酯片25 mg/kg、W112大、中、小劑量(120、80、40 mg/kg)組。灌胃給藥一次，體積均為20 ml/kg，模型對(duì)照組給予同體積0.5%CMC-Na。于給藥后1 h，每鼠均腹腔注射PTZ 100 mg/kg誘發(fā)驚厥模型，體積為10 ml/kg，觀察60 min。以全身陣攣性驚厥為觀察指標(biāo)，記錄驚厥潛伏期、強(qiáng)直率、死亡率及發(fā)作級(jí)別。若驚厥潛伏期超過(guò)60 min則按60 min計(jì)算。②采用文獻(xiàn)方法〔1～3〕，取昆明種小鼠60只，隨機(jī)等分為六組，模型對(duì)照組，托吡酯片25 mg/kg，苯妥英鈉40 mg/kg，W112大、中、小劑量組。灌胃給藥一次，體積均為20 ml/kg。模型對(duì)照組給予同體積0.5%CMC-Na。于給藥后1 h，每鼠均皮下注射Bic 2.7 mg/kg誘發(fā)驚厥模型，體積為10 ml/kg，觀察30 min。觀察指標(biāo)及記錄同PTZ誘發(fā)，若驚厥潛伏期超過(guò)30 min則按30 min計(jì)算。③采用文獻(xiàn)方法〔1～3〕，取昆明種小鼠60只，分組及給藥同Bic誘發(fā)。于給藥后1 h，每鼠均皮下注射3-MP 60 mg/kg誘發(fā)驚厥模型，體積為10 ml/kg，觀察30 min。觀察指標(biāo)及記錄同PTZ誘發(fā)，若驚厥潛伏期超過(guò)30 min則按30 min計(jì)算。④采用文獻(xiàn)方法〔1～3〕，取昆明種小鼠60只，分組及給藥同Bic誘發(fā)。于給藥后1 h，每鼠均腹腔注射TSZ 16 mg/kg誘發(fā)驚厥模型，體積為10 ml/kg，觀察120 min。觀察指標(biāo)同PTZ誘發(fā)，若驚厥潛伏期超過(guò)120 min則按120 min計(jì)算。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)，Z檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

W112大劑量能明顯延長(zhǎng)PTZ誘發(fā)驚厥鼠的驚厥潛伏期，降低強(qiáng)直率、死亡率和發(fā)作級(jí)別，作用強(qiáng)于托吡酯，與卡馬西平相近，見(jiàn)表1。W112大劑量能顯著降低Bic誘發(fā)驚厥鼠的強(qiáng)直率、發(fā)作級(jí)別，作用與托吡酯相近，但弱于苯妥英鈉。W112大劑量顯著降低3-MP驚厥鼠的強(qiáng)直率、發(fā)作級(jí)別，作用弱于苯妥英鈉。W112大劑量可顯著降低TSZ驚厥鼠的強(qiáng)直率、死亡率及發(fā)作級(jí)別，作用弱于苯妥英鈉，見(jiàn)表2。

表1 對(duì)PTZ所致小鼠驚厥的影響

表2 對(duì)Bic、3-MP、TSZ所致小鼠驚厥的影響

3 討 論

研究表明〔4〕，PTZ主要作用于腦干嘴側(cè)區(qū)及大腦，促使興奮性突觸的易化的過(guò)程增強(qiáng)，容易引起驚厥。PTZ是GABA受體拮抗劑，主要通過(guò)影響與GABA相關(guān)的氯離子通道的活性，使中樞抑制功能減弱，神經(jīng)元過(guò)度興奮而引發(fā)癲癇發(fā)作。文獻(xiàn)報(bào)道〔5〕，PTZ致驚厥發(fā)作可能還與提高中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞外K+濃度，使細(xì)胞膜部分去極化而使其興奮性增高有關(guān)。Bic是GABA受體的選擇性拮抗劑，它能降低腦中GABA能神經(jīng)系統(tǒng)的功能，從而誘發(fā)動(dòng)物驚厥。3-MP是GABA形成酶谷氨酸脫羧酶(GAD)的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，可抑制GABA的合成，降低腦中的GABA含量。除抑制GAD的活性外，還能特異性地抑制大鼠腦片中GABA的釋放，降低腦內(nèi)GABA能神經(jīng)系統(tǒng)的功能，從而引起動(dòng)物驚厥；TSZ是GAD抑制劑，抑制谷氨酸生成GABA，使GABA合成減少，腦內(nèi)GABA水平下降引起驚厥〔6，7〕。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，灌胃W112對(duì)4種化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)的驚厥均具有顯著的對(duì)抗作用，其抗癲癇作用機(jī)制可能主要是通過(guò)激活GABA神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)，產(chǎn)生類(lèi)GABA活性，從而起到抗癲癇作用。