楊明容 陶雪瑩 陳 婷 魯亞飛

(1.江西生物科技職業(yè)學(xué)院，江西 南昌 330200；2.南昌大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國家重點實驗室，江西 南昌 330200)

泥鰍作為一種優(yōu)質(zhì)經(jīng)濟魚類，其養(yǎng)殖日趨集約化、規(guī)?；?。利用有益微生物能維持養(yǎng)殖水環(huán)境的微生態(tài)平衡，防止養(yǎng)殖病害的發(fā)生，促進水產(chǎn)動物的生長，對于推進水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的綠色高質(zhì)量發(fā)展，具有重大意義。

枯草芽孢桿菌是廣泛分布于自然界中的一種好氧的革蘭氏陽性細菌，具有來源豐富、易于分離培養(yǎng)和保存等特點，以及生物降解、抑菌、免疫增強、抗氧化等生物學(xué)活性，可加工成水產(chǎn)養(yǎng)殖用微生態(tài)制劑。許多研究報告表明，枯草芽孢桿菌能提高水產(chǎn)動物生長性能、改善機體免疫力、改良水質(zhì)等，且本身無毒副作用、不產(chǎn)生耐藥性，因此被廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)?？莶菅挎邨U菌在泥鰍養(yǎng)殖中的應(yīng)用還沒有系統(tǒng)的研究報道。本試驗向泥鰍養(yǎng)殖水體中施加不同劑量的枯草芽孢桿菌，比較研究不同處理組對泥鰍生長性能以及抗氧化力的影響，為枯草芽孢桿菌在泥鰍人工養(yǎng)殖中的合理利用提供理論和試驗依據(jù)。

一、材料與方法

1.試驗材料 試驗用魚為臺灣泥鰍幼魚，購自余江縣宏鑫特種水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司。泥鰍初始體長為(6.78±0.42)厘米，初始個體重為(3.87±0.26)克。

試驗用枯草芽孢桿菌由正邦科技股份有限公司微生物研究所制備，有效活菌含量為1.0×1010個/克，試驗前3小時，用純水＋1%紅糖將其活化，制備成1.0×109個/毫升的菌懸液備用。

試驗用飼料為泥鰍專用配合飼料，粗蛋白質(zhì)含量38.5%，粗脂肪含量4.2%。

2.試驗設(shè)計與飼養(yǎng)管理 新購泥鰍幼魚先用2%食鹽水消毒，在江西生物科技職業(yè)學(xué)院水產(chǎn)養(yǎng)殖實訓(xùn)中心暫養(yǎng)15天后，挑選規(guī)格一致且健康的泥鰍540尾，隨機分成6組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)30尾泥鰍，飼養(yǎng)于相對獨立的水族箱(直徑1米，高1米)中，每個重復(fù)用1個水族箱，水深0.5米。每組泥鰍水體中施加不同濃度的枯草芽孢桿菌制劑。試驗分組及枯草芽孢桿菌濃度見表1。定期測量水體中枯草芽孢桿菌濃度并及時補加。

表1 試驗分組及枯草芽孢桿菌濃度

按常規(guī)養(yǎng)殖方法進行飼養(yǎng)管理，每天9:00、17:00定時投喂，投喂量分別為泥鰍幼魚體重的2%和3.3%，根據(jù)殘餌情況酌情增減。下午投食2小時后吸污。每天記錄投喂量、幼魚攝食和死亡情況。每隔3天換水1/3。飼養(yǎng)期間水溫保持在23～26℃，溶氧≥5.2毫克/升，pH7.1±0.2。本次試驗共計58天。

3.樣品采集 試驗結(jié)束后停飼24小時，統(tǒng)計每個重復(fù)的泥鰍數(shù)量，計算成活率；從每個重復(fù)中隨機取10尾泥鰍進行體長和體重的測定，用于計算生長指標(biāo)；另從每個水族箱中隨機挑選10尾泥鰍，用于測定肝臟抗氧化指標(biāo)。

4.測定指標(biāo)及方法

(1)生長性能指標(biāo)測定。根據(jù)初始體長、體重以及終末體長、體重，計算泥鰍幼魚的增重率、特定生長率、飼料系數(shù)和肥滿度。計算公式如下：

增重率(WGR)＝[(Wt－W0)/W0]×100%；

特定生長率(SGR)＝[(lnWt－lnW0)/t]×100%；

飼料系數(shù)(FCR)＝總攝食量/體重總增加量；

肥滿度(CF)＝(Wt/Lt3)×100%；

成活率(SR)＝(終末魚尾數(shù)/初始魚尾數(shù))×100%。

式中：Lt表示試驗結(jié)束時魚平均體長(厘米)，W0和Wt分別表示試驗開始和結(jié)束時魚體平均體重，t表示試驗天數(shù)。

(2)抗氧化指標(biāo)測定。將泥鰍肝臟組織4℃解凍，取約0.2克樣品，用冷生理鹽水漂洗，拭干稱重，加入樣品9倍體積的冷生理鹽水并進行勻漿。勻漿液2000轉(zhuǎn)/分低溫離心10分鐘，取上清液測定以下指標(biāo)：超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)等酶活性及總抗氧化力(T-AOC)指標(biāo)、丙二醛(MDA)含量。以上指標(biāo)的具體測定方法嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行，試劑盒購買于南京建成生物工程研究所。

5.數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析 試驗數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±S.D.)表示。采用SPSS22.0統(tǒng)計軟件中的one-wayANOVA程序進行單因素方差分析，用Duncan法進行多重比較。

二、結(jié)果

1.水體中枯草芽孢桿菌施加水平對泥鰍幼魚生長性能的影響(表2)

表2 水體中枯草芽孢桿菌水平對泥鰍幼魚生長性能的影響

由表2可見，水體中施加枯草芽孢桿菌，泥鰍幼魚的WGR、SGR和CF均比對照組升高，當(dāng)施加水平為(1.0～10.0)×108個/升時，泥鰍幼魚WGR和SGR升高顯著(P＜0.05)；當(dāng)施加水平為1.0×108個/升時，泥鰍幼魚CF較對照組升高顯著(P＜0.05)；隨著枯草芽孢桿菌施加水平的增加，3個指標(biāo)值均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，在施加水平為1.0×108個/升時達到最大。FCR隨著枯草芽孢桿菌施加水平的增加先下降再上升，當(dāng)施加水平為(1.0～10.0)×108個/升 時 ， 下 降 顯 著(P＜0.05)。SR隨枯草芽孢桿菌施加水平的增加先上升后下降，在施加水平為1.0×108個/升時達到最大，顯著高于對照組、1.0×105個/升和1.0×106個/升施加組(P＜0.05)。

2.水體中枯草芽孢桿菌施加水平對泥鰍抗氧化能力的影響(表3)

水體中施加枯草芽孢桿菌對泥鰍肝臟CAT、GSH-Px、SOD活性和T-AOC、MDA含量均有影響。隨著枯草芽孢桿菌施加水平的增加，泥鰍肝臟CAT、GSH-Px活性和T-AOC均呈先上升后下降趨勢，在施加水平為1.0×108個/升時達到最大，顯著高于對照組(P＜0.05)。泥鰍肝臟SOD活力也隨枯草芽孢桿菌施加水平的增加先上升后下降，在施加水平為1.0×107個/升時達到最大，顯著高于對照組、1.0×105個/升 和1.0×106個/升 施 加 組(P＜0.05)，但與1.0×108個/升和1.0×109個/升施加組差異不顯著(P＞0.05)。泥鰍肝臟MDA，施加組均顯著低于對照組(P＜0.05)，施加水平為1.0×108個/升時最低，但施加組間差異不顯著(P＞0.05)。

表3 水體中枯草芽孢桿菌水平對泥鰍幼魚抗氧化指標(biāo)

三、討論

1.枯草芽孢桿菌對泥鰍生長性能影響 枯草芽孢桿菌對人和養(yǎng)殖動物無毒副作用，安全穩(wěn)定，是我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部正式批準(zhǔn)使用的一種微生態(tài)制劑，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用極為廣泛。許多研究表明，飼料中添加枯草芽孢桿菌可以明顯改善青魚、方斑東風(fēng)螺、尼羅羅非魚、草魚、大黃魚、 海參、刺參等的生長性能，水體中潑灑1.0×106個/米3枯草芽孢桿菌能顯著促進刺參的生長。在本試驗條件下，水體中施加1.0×108個/升枯草芽孢桿菌，能顯著提高泥鰍幼魚的WGR、SGR、CF和SR，降低FCR，表明水體中施加適宜的枯草芽孢桿菌對泥鰍幼魚的生長有顯著的促進作用?？莶菅挎邨U菌定植水體，可以通過競爭或拮抗作用抑制有害微生物的生長，并且分泌多種胞外酶降解水體中的有機物，有效改善水生態(tài)環(huán)境；枯草芽孢桿菌定植動物腸道，產(chǎn)生的各種氨基酸和維生素可以增強動物的營養(yǎng)，產(chǎn)生的淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等可以幫助動物進行消化，提高飼料的吸收利用率，從而促進動物生長?？莶菅挎邨U菌對不同水產(chǎn)動物促生長的最適添加水平存在一定的差異，可能與動物種類、芽孢桿菌類型、養(yǎng)殖環(huán)境有關(guān)。

2.枯草芽孢桿菌對泥鰍抗氧化能力影響 在本試驗條件下，水體中施加1.0×108個/升枯草芽孢桿菌，泥鰍幼魚肝臟的SOD、CAT、GSH-Px活性和T-AOC含量顯著升高，MDA含量顯著降低，表明適宜含量的枯草芽孢桿菌可以提高泥鰍的抗氧化能力，與鞠守勇等(2018)對草魚、李盈鋒等(2014)對黑鯛幼魚、孫盛明等(2016)對團頭魴、Fan等(2013)對海參、程遠等(2014)對吉富羅非魚(GIFT)的研究結(jié)果一致?？莶菅挎邨U菌進入機體有利于保持動物腸道微生態(tài)平衡，提高了動物腸道的抗氧化能力。另外，枯草芽孢桿菌分泌的某些細胞因子可能間接誘導(dǎo)抗氧化酶的產(chǎn)生，這有待于進一步研究。

四、小結(jié)

通過本次試驗證實枯草芽孢桿菌能顯著提高泥鰍生長性能和抗氧化能力。在本試驗研究條件下，水體中施加(1.0～10.0)×108個/升枯草芽孢桿菌，泥鰍的增重率、特定生長率以及成活率顯著提高，抗氧化能力顯著增強。綜合考慮，泥鰍養(yǎng)殖水體中枯草芽孢桿菌最適宜添加量為1.0×108個/升。