龔翔

(云南省種羊繁育推廣中心，云南 尋甸 655200)

支原體又稱霉形體，屬于柔膜體綱，天然無細胞壁，所以細胞柔軟，高度多形性，可通過200～450 nm孔徑的濾膜。革蘭染色陰性(呈紅色)，姬姆薩染色呈淡紫色。常見多種支原體以隱性方式污染細胞培養(yǎng)物。多數(shù)支原體的生長需要平面分子膽固醇，且生長緩慢[1]。

支原體常引起動物呼吸系統(tǒng)疾病(鼻肺炎)、關(guān)節(jié)炎、乳腺炎或角膜結(jié)膜炎，耐過動物有堅強的免疫力。

鴿子支原體病和雞支原體病屬于同種類型，都是禽支原體，引起鴿子的疾病稱鴿慢性呼吸道病，主要引起鴿子呼吸道癥狀，一般呈群發(fā)性，傳播迅速，病原體會在鴿群中存在很長時間。發(fā)病的鴿子通常表現(xiàn)出流鼻涕，鼻孔粘有鼻痂，呼吸道啰音，生長速度減慢，飼養(yǎng)周期延長，造成殘疾鴿子和次級鴿子數(shù)量增多而影響?zhàn)B鴿收益。該病主要發(fā)生在秋冬、冬春寒冷季節(jié)，陰雨季節(jié)也常多發(fā)，鴿舍通風不良、空氣污濁是誘發(fā)該病的主要因素[2-4]。該病可感染不同日齡的鴿子，主要危害乳鴿、幼鴿，種蛋帶菌是乳鴿發(fā)病率升高的主要因素，尤其新發(fā)病的種鴿產(chǎn)的種蛋帶菌率極高，疾病的傳播也極為迅速，病原體通過胚胎傳給乳鴿，使該病在鴿群中快速傳播[5-8]，造成巨大的經(jīng)濟損失。

支原體病的主要傳染源是帶病的鴿子和隱性感染該病的鴿子，被病原污染的飼料、飲水、器械、空氣等也是該疾病的傳染源。該病的傳播方式比較廣泛，主要以水平和垂直傳播為主。水平傳播可以是飛沫、空氣、食入或吸入等傳播方式；垂直主要是通過種蛋傳播[9-11]。

2019年11月，昆明市某信鴿養(yǎng)殖場鴿群中部分鴿子出現(xiàn)呼吸困難、咳嗽、被毛蓬亂、精神沉郁、甩頭、觀星等癥狀，并有大量鴿子死亡。采集病料樣本進行實驗室檢測分析，確診后提供切實可行的治療方案，現(xiàn)將病例介紹如下，供同行參考。

1 材料與方法

1.1 樣品采集處理

在昆明市某信鴿養(yǎng)殖場3 000只鴿子中采集了7只發(fā)病鴿子的喉氣管和肺臟。用手術(shù)剪剪碎采集的喉氣管及肺臟，取剪碎樣品0.02 g在研缽中研磨1～2 min，加入1.5 mL生理鹽水繼續(xù)研磨，研磨液轉(zhuǎn)移到2 mL滅菌離心管中。

1.2 主要試劑儀器

核酸提取試劑盒購自云南晨綠生物科技有限公司，Buffer、Mix、Taq DNA 聚合酶、ddH2O購自大連寶生物有限公司。普通 PCR 儀(T100TM Thermal Cycler)，穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀(DYY-31A)，全自動凝膠成像儀(ChampGel 6000)。

2 診斷方法

2.1 臨床解剖觀察

對發(fā)病鴿群進行臨床觀察，然后選臨床癥狀具有代表性的鴿子，按常規(guī)方法進行解剖觀察并記錄。

2.2 實驗室檢測

按照核酸提取試劑盒說明書提取喉氣管及肺臟研磨液核酸。參考文獻[12]合成的支原體檢測引物，以提取的基因組作為模板進行PCR檢測。支原體PCR體系: Mix 12.5 μL,ddH2O 10.5 μL，上、下游引物各0.5 μL，DNA 模板1 μL，總反應(yīng)體系為25 μL。反應(yīng)條件均為:預(yù)變性95 ℃ 5 min,后進行 95 ℃ 15 s、54 ℃ 30 s、72 ℃ 60 s,30個循環(huán)；72 ℃ 10 min。反應(yīng)結(jié)束后取5 μL擴增產(chǎn)物進行1.0%瓊脂糖凝膠電泳,在凝膠成像系統(tǒng)上觀察結(jié)果并拍照。

3 結(jié)果

3.1 剖檢結(jié)果

臨床觀察發(fā)現(xiàn)發(fā)病鴿子的眼部分泌物增多，充滿干酪樣物，眼瞼粘連已經(jīng)造成失明；喉頭、鼻腔和氣管內(nèi)有乳白色和黃色的黏性分泌物，肺臟表面有一層略帶黃色的膜狀物。

3.2 實驗室檢測結(jié)果

1—7號發(fā)病鴿子樣品實驗室PCR檢測結(jié)果均出現(xiàn)條帶(497 bp)，與陽性對照大小一致(圖1)，支原體陽性。

1—7.檢測樣品；+.陽性對照；-.陰性對照；M.MDL-2000的Marker。

由臨床剖檢結(jié)果及PCR檢測結(jié)果可確診該養(yǎng)殖場的鴿子發(fā)病及死亡原因主要是支原體感染。

3.3 治療方案及效果

泰樂菌素和多西環(huán)素混飲、混飼，連用5 d，同時以中藥方劑白術(shù)150 g、茯苓100 g、山藥150 g、車前草20 g、生姜50 g、桂枝30 g熬湯加入飲水中，連喂14 d，同時加強養(yǎng)殖場日常消毒及飼養(yǎng)管理。該養(yǎng)殖場的鴿子病情得到了很好的控制，發(fā)病的鴿子病情已經(jīng)穩(wěn)定并趨于好轉(zhuǎn)，未發(fā)病的鴿子不再出現(xiàn)癥狀。

4 討論

畜禽支原體病主要以呼吸道感染為主，臨床治療應(yīng)該以清熱解毒、清熱燥濕及祛風殺蟲為主[12]。在選擇泰樂菌素和多西環(huán)素這類對支原體有效的大環(huán)內(nèi)酯類藥物混飲、混飼的同時，又增加了中藥方劑白術(shù)150 g、茯苓100 g、山藥150 g、車前草20 g、生姜50 g、桂枝30 g熬湯加入飲水中。

泰樂菌素和多西環(huán)素是主要抗支原體的藥物，其余為輔助治療，主要是增強機體的抗病能力[13]。泰樂菌素的主要作用是治療和預(yù)防由支原體引起的各種呼吸道、腸道感染；多西環(huán)素主要用于革蘭陽性菌和革蘭陰性桿菌引起的上呼吸道感染、支原體肺炎等；白術(shù)主要有健脾益氣、燥濕利水、和胃的功效；茯苓主要是利水滲濕，健脾；山藥主要是益氣養(yǎng)陰，對脾、肺、腎均有滋補作用，還能固精；車前草主要有利尿、清熱、明目、祛痰的功效；生姜能夠增進食欲、驅(qū)寒，還具有發(fā)汗的功效；桂枝主要促進出汗、利尿。這些藥物中，多西環(huán)素和泰樂菌素主要是從西醫(yī)學的角度進行治療；中藥方劑中的健胃、益氣類藥物主要是為了增強動物體自身抗病能力，利尿、瀉下、發(fā)汗類主要是為了促進瘀積在動物體內(nèi)的毒素排出[14]。