趙成龍，吳巖，冷靜，姜春梅，2，崔起超，蓋苗苗，梁晚?xiàng)?，趙少偉

(1.延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院動物醫(yī)學(xué)系，吉林 延吉 133000； 2.吉林大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，吉林 長春 130062)

豬瘟(CSF)曾被稱為豬霍亂(HC)，俗稱“爛腸病”，是由豬瘟病毒(CSFV)所引起的豬急性熱性全身敗血性疾病，具有高度傳染性，流行范圍廣?；疾∝i主要特征為食欲減退、嘔吐、腹瀉、體溫升高、行動緩慢。豬為豬瘟病毒最主要的易感動物，各種年齡各種品種均可通過多種途徑感染。豬瘟垂直傳播會造成仔豬帶毒持續(xù)傳染，而且仔豬發(fā)病極為嚴(yán)重，被國家列為一類傳染病，給我國養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。沙門氏菌病(salmonellosis)又名副傷寒(paratyphoid),是沙門菌屬細(xì)菌引起各種動物疾病的總稱[1]。患病豬主要特征為體溫升高、精神不振、寒戰(zhàn)、喜鉆墊草和腹瀉。臨床上主要表現(xiàn)為腸炎和敗血癥。豬、牛、羊、駱駝、禽等沙門氏菌的眾多宿主中，豬對其具有較強(qiáng)的易感性。亞急性沙門氏菌病和慢性豬瘟有很多相似處，本病也可繼發(fā)于豬瘟等疾病，故需注意加以區(qū)分。筆者所在團(tuán)隊(duì)于2019年6月12日在延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院動物醫(yī)院接診一起病例，經(jīng)診斷確診為豬瘟病毒和沙門氏菌混合感染，現(xiàn)將該病例的診治與防控情況報(bào)道如下。

1 流行病學(xué)調(diào)查

吉林省延邊朝鮮族自治州和龍市某養(yǎng)豬場有基礎(chǔ)母豬400余頭和育肥豬200余頭，全進(jìn)全出的養(yǎng)殖模式。經(jīng)主人敘述該豬群育肥豬和生產(chǎn)母豬于2019年6月5日開始陸續(xù)發(fā)病，自行治療無效后，于6月12日到延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院動物醫(yī)院進(jìn)行求助咨詢。就診前已發(fā)病57頭，死亡22頭。

2 臨床癥狀

發(fā)病豬精神不振、行動緩慢、寒戰(zhàn)、顫抖、喜鉆墊草、厭食、嘔吐等癥狀，同時(shí)伴有腹瀉，很快消瘦；觸診體表淋巴結(jié)腫大；測量體溫溫度(40～42 ℃)高于正常值。

3 剖檢病變

心臟衰竭，左心耳瘀血；肝臟腫大；脾臟邊緣梗死、出血；肺臟水腫、間質(zhì)增寬；腎臟皮質(zhì)、髓質(zhì)出血；腸系膜水腫、腸道水腫、小腸充血、出血；胸腔內(nèi)臟器官與壁粘連呈膠胨狀；回盲口潰瘍。

4 實(shí)驗(yàn)室診斷

4.1 細(xì)菌學(xué)檢測

4.1.1鏡檢

無菌條件下分別取病死豬的肝臟、脾臟制成涂片，干燥、固定，然后進(jìn)行革蘭氏法染色，呈陰性，短小桿菌，兩端鈍圓，無芽孢和莢膜，周身有鞭毛可運(yùn)動。

4.1.2細(xì)菌分離純化

無菌采集病豬心臟血液，劃線接種于SS瓊脂培養(yǎng)基和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，在溫箱37 ℃培養(yǎng)24 h。然后挑取可疑單個(gè)菌落進(jìn)行純培養(yǎng)，37 ℃震蕩過夜。在SS瓊脂培養(yǎng)基上可見邊緣整齊、中間微凸、中心為黑色的圓形小菌落；在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上可見灰白色、光滑濕潤圓形小菌落。然后接種到沙門氏菌顯色培養(yǎng)基上可見到紫色小菌落，故疑似沙門氏菌落。革蘭氏染色鈍化后的細(xì)菌鏡檢結(jié)果顯示為革蘭氏陰性，兩頭鈍圓、單個(gè)或成對存在的短桿菌。

4.1.3細(xì)菌生化鑒定

參照孫娜等的方法[2]，挑取單個(gè)菌落接種于LB肉湯中，37 ℃培養(yǎng)16～18 h,用生理鹽水將培養(yǎng)好的菌稀釋到105CFU，取5～10 μL稀釋好的菌液接種于葡萄糖、麥芽糖、乳糖、甘露醇、蔗糖、MR試驗(yàn)、靛基質(zhì)試驗(yàn)、尿素、VP試驗(yàn)、枸櫞酸鹽、硫化氫試驗(yàn)生化反應(yīng)管中37 ℃培養(yǎng)24 h后觀察。結(jié)果為分離菌對葡萄糖、麥芽糖、甘露醇、MR試驗(yàn)、枸櫞酸鹽和硫化氫試驗(yàn)表現(xiàn)為陽性；乳糖、蔗糖、尿素、靛基質(zhì)試驗(yàn)和VP試驗(yàn)為陰性。其生化特性符合沙門氏菌特性。

4.1.4動物試驗(yàn)

將12只體況良好、年齡相近的小白鼠，隨機(jī)均分為2組，對照組6只，試驗(yàn)組6只。試驗(yàn)組腹腔注射病豬血液、對照組注射等量生理鹽水，每8 h觀察一次并記錄發(fā)病情況[3]。對照組小白鼠96 h內(nèi)無明顯發(fā)病跡象，試驗(yàn)組小白鼠注射72 h內(nèi)出現(xiàn)死亡或發(fā)病跡象，臨床癥狀表現(xiàn)為精神萎靡、皮毛松亂、腹瀉和糞便有黏液。剖檢試驗(yàn)組死亡小白鼠，病理變化表現(xiàn)為肺臟水腫、肝脾腫大出血。挑取病變器官直接進(jìn)行涂片、染色、鏡檢，鏡下菌形態(tài)特征符合沙門氏菌特性。

4.2 藥敏試驗(yàn)

采用K-B紙片擴(kuò)散法檢測分離株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。無菌采集細(xì)菌純培養(yǎng)產(chǎn)物，配置菌液。用無菌棉棒蘸取菌液均勻涂抹于SS瓊脂培養(yǎng)基上，菌液量大約為0.3 mL，待菌液干燥后，用滅菌眼科鑷將藥敏紙片按順序貼于培養(yǎng)基上，并輕輕按壓藥敏紙片使其與培養(yǎng)基表面密切貼合，沒有縫隙。要注意藥敏紙片與培養(yǎng)基邊緣、藥敏紙片與藥敏紙片之間距離適當(dāng)，以免抑菌環(huán)重疊。貼完后，在室溫環(huán)境下靜置15 min，翻轉(zhuǎn)SS瓊脂培養(yǎng)基放置在37 ℃恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24 h后，觀察并測量結(jié)果，結(jié)果如表1所示。

表1 分離株的藥敏試驗(yàn)結(jié)果

4.3 ELISA檢測

試驗(yàn)利用ELISA法對豬瘟病毒(CSFV)、豬圓環(huán)病毒(PCV)、豬偽狂犬病毒(PRV)、豬藍(lán)耳病毒(PRRSV)和豬流行性腹瀉病毒(PEDV)分別進(jìn)行檢測。無菌采取3頭病豬的血液，無菌分離血清，采用雙抗原一步夾心法對目標(biāo)抗體進(jìn)行檢測，設(shè)置陰、陽性對照孔和樣本孔?？字杏惺孪劝缓玫奶禺愋钥乖?。步驟如下：①陰性和陽性對照孔中分別加入陰性標(biāo)準(zhǔn)品、陽性標(biāo)準(zhǔn)品各50 μL，樣本孔中加入待測血清10 μL,再添加40 μL樣本稀釋液；②各孔中依次加入檢測抗原HRP 100 μL，孔口以封板膜密封，并迅速置于恒溫培養(yǎng)箱中，37 ℃反應(yīng)1 h；③取出檢測板，反復(fù)洗板5次，并于定性濾紙上拍干孔內(nèi)液體；④各孔中依次加入底物A、B各50 μL，37 ℃避光孵育15 min，隨后迅速加入終止液50 μL,反應(yīng)5～10 min；⑤將檢測板置于酶標(biāo)儀中，波長設(shè)置為450 nm，測定吸光度。所得樣本OD值與CUT OFF值相比較。結(jié)果顯示采集的3份血清樣本中PCV、PRV、PEDV、PRRSV的抗體檢測均呈陰性；CSFV檢測樣本的OD值分別為3.94、2.13和1.90，大于臨界值0.45，抗體檢測均呈陽性。

5 診斷結(jié)果

結(jié)合臨床癥狀、病理剖檢變化、流行病學(xué)特點(diǎn)和實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)果，確診該豬群為豬瘟和沙門氏菌的混合感染。

6 治療與防控

考慮到養(yǎng)殖場養(yǎng)殖規(guī)模較大，發(fā)病豬數(shù)目較多，注射用藥會造成豬群應(yīng)激反應(yīng)，所以主要以口服的方式進(jìn)行治療。用藥方案如下：全豬群使用“活力金維電解多維”口服(批號201401066，新鄉(xiāng)華畜商貿(mào)有限公司生產(chǎn))，用法為一袋2 kg兌水4 t，自由飲用，連用7～10 d；使用七清敗毒散拌料口服(主要成分為黃芩、虎杖、白頭翁、板藍(lán)根等，批號為2016041215002，新鄉(xiāng)華畜商貿(mào)有限公司生產(chǎn))，用法為每10袋(規(guī)格為100 g/袋)混合飼料0.75 t,連用10 d；使用四味穿心蓮拌料口服(主要成分為穿心蓮、辣蓼、大青葉、葫蘆茶等，批號為2016120042745，新鄉(xiāng)華畜商貿(mào)有限公司生產(chǎn))，用法為每袋(規(guī)格為500 g/袋)混合飼料1 t，連用10 d；使用阿莫西林口服(批號為161012859，新鄉(xiāng)華畜商貿(mào)有限公司生產(chǎn))，用法為每3袋(100 g/袋)混合飼料1 t，連用10 d；病情嚴(yán)重豬再皮下注射瘟殺注射液每千克體重5 mg(主要成分為頭孢噻呋鈉和黃芪多糖，批號為180272021，湖南省亞牧動物藥業(yè)有限公司生產(chǎn))。治療期間先將病死豬無害化處理，將病豬與健康豬隔離,統(tǒng)一治療，全群豬注射豬瘟疫苗，病豬根據(jù)體重大小注射4～8倍豬瘟疫苗。防控方面保持飼料與飲水的清潔與衛(wèi)生；保持飼養(yǎng)環(huán)境衛(wèi)生，糞便及時(shí)清理；外來人員全面消毒后進(jìn)入廠區(qū)，做好場內(nèi)滅鼠工作。治療期間，新發(fā)病23頭，死亡15頭，其余豬病情得到控制。用藥治療后，豬場內(nèi)共患病78頭，治愈55頭(治愈率70.51%)，死亡23頭(病死率29.49%)。

7 討論與體會

豬瘟具有高度接觸傳染性，流行范圍廣，在世界各地都有暴發(fā)，是豬病中危害最大、最受重視的疫病之一。近年來，隨著養(yǎng)殖戶對豬瘟防疫意識的增強(qiáng)，疫苗利用率上升，典型豬瘟已非常少見。病癥非典型化、多地區(qū)散發(fā)性流行、病情復(fù)雜、混合感染多、妊娠母豬帶毒已成為新的豬瘟發(fā)病特征。尤其豬瘟經(jīng)常出現(xiàn)混合感染或者繼發(fā)感染其他疾病，在臨床上應(yīng)全面考慮，特別是細(xì)菌性疾病，常常會增加豬瘟治療的難度，正如本例中豬瘟與沙門氏菌的混合感染不但造成了治療困難，而且也使病死率顯著上升。在豬瘟的防控上，免疫程序應(yīng)科學(xué)合理，可根據(jù)當(dāng)?shù)氐木唧w情況加大免疫劑量，一旦出現(xiàn)豬瘟疫情即可進(jìn)行緊急接種，以減少損失，控制疫情的擴(kuò)散。防疫注射時(shí)做到無菌，避免醫(yī)療器械交叉使用[4]。沙門氏菌病在世界各地廣泛流行，對動物繁殖和幼齡動物健康造成嚴(yán)重威脅，目前國內(nèi)臨床以混合感染病例居多，在治療過程中，不可濫用抗生素，應(yīng)根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果選擇恰當(dāng)?shù)挠盟幏桨?。在本例中，藥敏試?yàn)結(jié)果顯示該菌對頭孢噻呋、阿米卡星和慶大霉素均有較高的敏感性，但是在治療的過程中只選擇頭孢噻呋的原因是阿米卡星和慶大霉素同屬氨基糖苷類藥物，此類藥物具有較強(qiáng)的腎毒性，病豬的剖檢結(jié)果顯示腎臟均具有不同程度的損傷，故選擇頭孢噻呋鈉進(jìn)行治療。在今后的獸醫(yī)臨床中，選藥用藥不應(yīng)只停留在試驗(yàn)結(jié)果表面，要有整體的觀念，結(jié)合病例實(shí)際制定治療方案。