張瑩， 陶梁春， 姜路晴， 呂惠子

( 延邊大學(xué) 藥學(xué)院， 吉林 延吉 133002 )

石龍芮為毛茛科植物石龍芮(RanunculussceleratusL.)的干燥全草，朝醫(yī)稱之為銅罐草.《朝藥志》中記載，石龍芮主要用于治療癰癤腫毒、瘰疬結(jié)核、瘧疾、下肢潰瘍、腎虛、痢疾等癥[1].現(xiàn)代研究表明，石龍芮具有抗炎[2]、抗菌[3-5]、抗寄生蟲(chóng)[6]等藥理活性，臨床上用于淋巴結(jié)結(jié)核、瘧疾、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)痛、蛇咬傷等[7].還有研究表明，用鮮石龍芮可以治療食道癌與乳腺癌[8].目前，對(duì)石龍芮的研究多是對(duì)其化學(xué)成分的研究[9-11]，而對(duì)其性狀、微米顯微特征等生藥學(xué)方面的研究較少[12-13].為此，本文進(jìn)一步研究石龍芮的生藥學(xué)特征，為制定其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)參考.

1 實(shí)驗(yàn)儀器與材料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

BDS400倒置生物顯微鏡，重慶奧特光學(xué)儀器有限公司； KQ5200型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司； JYD -325B生物組織石蠟切片機(jī)，金華市宇典醫(yī)療器械廠； FA2004電子天平，上海良平儀器儀表有限公司； RRH-100萬(wàn)能高速粉碎機(jī)，上海緣沃工貿(mào)有限公司.

1.2 實(shí)驗(yàn)材料

硅膠GF254薄層板，煙臺(tái)江友硅膠開(kāi)發(fā)有限公司；β-谷甾醇，上海源葉生物科技有限公司(純度≥98%，批號(hào)HS237710198)；水合氯醛、無(wú)水乙醇、95%乙醇、二甲苯、石油醚、乙酸乙酯、濃硫酸均為分析純，遼寧泉瑞試劑有限公司；石蠟，上海華靈康復(fù)器械廠(批號(hào)20130415)；番紅染料、固綠染料，上?；瘜W(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng)站；中性樹(shù)膠，上海標(biāo)本模型廠；中藥篩(380 μm)，杭州同祺儀器有限公司.采集的10批石龍芮經(jīng)延邊大學(xué)藥學(xué)院李鎬教授鑒定確認(rèn)，并將標(biāo)本存放在延邊大學(xué)藥學(xué)院朝藥標(biāo)本室.石龍芮的采集時(shí)間和地點(diǎn)(GPS定位)如表1所示.

表1 10批石龍芮藥材信息

2 方法與結(jié)果

2.1 基源考證

石龍芮首次記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》：“主風(fēng)寒濕痹；心腹邪氣；利關(guān)節(jié)；止煩滿.久服輕身明目，不老，生川澤石邊.”[14]與毛茛科石龍芮“全草含原白頭翁素，有毒，藥用能消結(jié)核、截瘧及治癰腫、瘡毒、蛇毒和風(fēng)寒濕痺”[15]的功效對(duì)比可知，《神農(nóng)本草經(jīng)》中記載的石龍芮不是毛茛科石龍芮.

漢代《名醫(yī)別錄》中記載的石龍芮為：“上品，生于山川澤石旁，五月五采子，二月、八月采皮陰干，無(wú)毒.”[16]而毛茛科石龍芮為水生草本，植株細(xì)小，不僅無(wú)法采皮，而且因其含有原白頭翁素，所以有劇毒.由上述可知，《名醫(yī)別錄》中記載的石龍芮并非是毛茛科石龍芮.

唐代《新修本草》中記載的石龍芮為：“俗名水堇，苗似附子，實(shí)如桑椹，故名地椹.生于濕地，五月熟，葉子味皆辛.”[17]從石龍芮的性狀和生境來(lái)看，它與毛茛科石龍芮相符.《本草拾遺》中記載的石龍芮為：“水茛，葉圓而光，有毒，生水旁.”[18]該書(shū)證實(shí)了《新修本草》中記載的水堇為毛茛科石龍芮.

宋代《本草圖經(jīng)》中記載的石龍芮為：“今惟出兗州，一叢數(shù)莖，莖青紫色，每莖三葉，其葉芮芮，短小多刻缺，子如葶藶而色黃，生水邊石上.”[19]《本草衍義》中記載的石龍芮為：“陸生者葉有毛，而末銳.陸生者又謂之天灸，取少葉系臂上，一夜作大泡，如火燒.”[20]該書(shū)所記載的石龍芮的毒性與文獻(xiàn)[21-22]報(bào)道的內(nèi)容(毛茛屬植物石龍芮含原白頭翁素，有劇毒，刺激性極強(qiáng)，與皮膚接觸可導(dǎo)致嚴(yán)重的炎癥和水泡)一致.由此可知，《本草圖經(jīng)》和《本草衍義》中記載的石龍芮為毛茛科石龍芮.

明代《本草綱目》中記載的石龍芮為：“生近水下濕地，高者尺許，其根如莽，三月生苗，叢生，圓莖分枝，一枝三葉，葉青而光滑，有三尖，多細(xì)缺，四、五月開(kāi)黃花，結(jié)小實(shí)，大如豆，狀如初生桑椹，青綠色，搓散則子甚細(xì)，如葶藶子.”[23]從上述植物形態(tài)表述表明，書(shū)中所記載的植物為毛茛科石龍芮.

清代《植物名實(shí)圖考》中記載的石龍芮為：“今處處有之，性狀正如水堇，生水邊者肥大、平原者瘦小，其實(shí)亦能灸瘧.”[24]從上述內(nèi)容可知，該書(shū)所記載的石龍芮為毛茛科石龍芮.

綜上所述，漢代記載的石龍芮并非是毛茛科石龍芮，而自唐代開(kāi)始記載的石龍芮為毛茛科石龍芮，并沿用至今.

2.2 藥材性狀

對(duì)采集的石龍芮進(jìn)行性狀研究顯示：石龍芮須根細(xì)長(zhǎng)(5～7 cm)，呈白色，質(zhì)較軟；莖表面光滑無(wú)毛，質(zhì)堅(jiān)韌不易折斷，直徑為5 cm～1 mm；莖中空，呈淺綠色，斷面呈黃白色；葉呈綠色，形態(tài)皺縮或卷曲；花呈黃色；氣微，味苦.辛石龍芮的上述性狀與文獻(xiàn)[25]的表述一致.石龍芮的性狀見(jiàn)圖1.

2.3 石龍芮的顯微鑒別

取石龍芮根、莖、葉，對(duì)其進(jìn)行制片(利用傳統(tǒng)石蠟切片法)和染色(番紅-固綠混染法).將整株植物研磨成粉末，過(guò)中藥篩(380 μm)后將其制成水合氯醛裝片.在顯微鏡下觀察石龍芮根、莖、葉的組織結(jié)構(gòu)及粉末特征.

2.3.1根橫切面的顯微特征 圖2為石龍芮根的橫切面放大10倍和40倍的圖.由圖2可以看出：石龍芮根的橫切面呈圓形；表皮細(xì)胞由一層大小不等的細(xì)胞組成；皮層由5～8層的薄壁細(xì)胞組成，排列疏松；內(nèi)皮層的細(xì)胞較小，且排列不整齊；輻射型維管束多為三原型；木質(zhì)部與韌皮部相間排列.上述石龍芮根的橫切面特征與文獻(xiàn)[12]中的表述一致.

2.3.2莖橫切面的顯微特征 圖3為石龍芮莖的橫切面放大10倍和40倍的圖.由圖3可以看出：石龍芮莖的橫切面呈圓形，有髓腔；表皮細(xì)胞由一層呈圓形的細(xì)胞組成，排列緊密，近表皮處皮層存在大量的通氣組織，有非腺毛；皮層薄壁細(xì)胞排列緊密，大小不一；維管束呈外韌型，多數(shù)存在，且大小不一，環(huán)狀排列；木質(zhì)部導(dǎo)管呈圓形；韌皮部細(xì)胞排列整齊.上述石龍芮莖的橫切面特征與文獻(xiàn)[13]中的表述一致.

2.3.3葉橫切面的顯微特征 圖4為石龍芮葉的橫切圖放大40倍的圖.由圖4可以看出：石龍芮葉的表皮細(xì)胞為一層，上表皮細(xì)胞略大于下表皮細(xì)胞，且上下表皮均有氣孔分布；柵欄組織為一列，呈長(zhǎng)柱形，排列疏松；海綿組織排列稀疏，無(wú)規(guī)則，且多數(shù)有空腔存在；無(wú)厚角組織；維管束呈外韌型，多處存在；木質(zhì)部呈半圓形，導(dǎo)管不規(guī)則排列；韌皮部細(xì)胞較小，排列緊密.

2.3.4粉末的顯微鑒別 圖5為石龍芮的粉末特征圖(放大40倍).由圖5可以看出：石龍芮的粉末呈深綠色；葉表皮細(xì)胞為多角形，呈波狀彎曲；氣孔為不定式；非腺毛較多，由單細(xì)胞構(gòu)成；纖維較多，成束或散生，較長(zhǎng)(可達(dá)300 μm)；螺紋導(dǎo)管、網(wǎng)紋導(dǎo)管和環(huán)紋導(dǎo)管較多；花粉粒(淡黃色)較多，呈圓形或類圓形，直徑為25～30 μm，且花粉粒中有3孔溝和顆粒狀的小雕紋；草酸鈣簇晶較多；石細(xì)胞呈圓形或近圓形，較少，單個(gè)存在；淀粉粒較少；有厚壁細(xì)胞存在，呈多角形.

2.4 薄層色譜鑒別

依據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典：一部》[26]采用TLC鑒定石龍芮的理化性質(zhì).供試品溶液的制備：取10批石龍芮藥材粉末各0.4 g，分別加入石油醚10 mL，超聲提取30 min；過(guò)濾，濾液濃縮，備用.對(duì)照品的制備：取β-谷甾醇，加甲醇制成200 mg/L的對(duì)照品溶液，備用.點(diǎn)樣、展開(kāi)及顯色：用毛細(xì)管吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液各5 μL，點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上.以體積比為6∶1的石油醚-乙酸乙酯為展開(kāi)劑，用體積分?jǐn)?shù)為10%的硫酸-乙醇溶液顯色.

圖6為石龍芮的薄層色譜圖，圖中S為β-谷甾醇對(duì)照品，1—10為各批石龍芮的供試品.由圖可見(jiàn)，10批供試品在日光下均可見(jiàn)到6個(gè)清晰的斑點(diǎn)，重復(fù)性好，且未出現(xiàn)邊緣效應(yīng)及拖尾現(xiàn)象.供試品色譜中所顯斑點(diǎn)的位置與對(duì)照品色譜所顯的斑點(diǎn)一致，經(jīng)測(cè)定其Rf值為0.3.

3 結(jié)論

本文經(jīng)對(duì)石龍芮進(jìn)行系統(tǒng)的生藥學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，其鑒別特征為：須根呈白色，質(zhì)柔韌；莖表面光滑無(wú)毛，質(zhì)堅(jiān)韌不易折斷；莖中空,呈淺綠色，斷面呈黃白色；葉皺縮或卷曲；氣微，味苦，辛.粉末呈深綠色，氣孔為不定式，非腺毛較多；花粉粒為淡黃色，呈圓形或類圓形，并有顆粒狀小雕紋；草酸鈣簇晶較多.薄層色譜鑒別中，10批測(cè)試樣品均在相同的位置出現(xiàn)清晰的斑點(diǎn)，且重復(fù)性好.本文研究結(jié)果可為制定石龍芮的藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù).今后我們將利用高效液相色譜法對(duì)石龍芮的成分做進(jìn)一步測(cè)定.