張萌　封亮　賈曉斌

摘要 中藥質(zhì)量的評(píng)控問(wèn)題是制約中藥現(xiàn)代化發(fā)展的瓶頸，因此有必要在現(xiàn)有檢測(cè)方法的基礎(chǔ)上結(jié)合生物評(píng)價(jià)，繼而更為全面地保證中藥質(zhì)量。生物評(píng)價(jià)是完善中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、保證臨床功效和安全性評(píng)價(jià)的重要方法，已成為中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化發(fā)展趨勢(shì)之一。在此處主要論述了近年來(lái)基于生物活性與效應(yīng)基準(zhǔn)的中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)技術(shù)和已取得的部分研究進(jìn)展，同時(shí)對(duì)目前中藥質(zhì)量生物評(píng)價(jià)研究與應(yīng)用中存在的主要問(wèn)題進(jìn)行探討，進(jìn)一步對(duì)其未來(lái)應(yīng)用做出展望，從而更好的對(duì)中藥質(zhì)量進(jìn)行控制。

關(guān)鍵詞 中藥;生物活性;效應(yīng)基準(zhǔn);質(zhì)量評(píng)價(jià)技術(shù);發(fā)展現(xiàn)狀;展望

Development Status and Prospect of Traditional Chinese Medicine Quality Evaluation Technology Based on Biological Activity and Efficacy Benchmark

ZHANG Meng，F(xiàn)ENG Liang，JIA Xiaobin

（School of Traditional Chinese Pharmacy，China Pharmaceutical University，Nanjing 211198，China）

Abstract The evaluation and control of the quality of traditional Chinese medicine（TCM）is the bottleneck that restricts the development of modernization of TCM.Therefore，it is necessary to combine the biological evaluation with the existing detection methods to ensure the quality of TCM more comprehensively.Biological evaluation is an important method to improve the quality standard，and ensure the clinical efficacy and safety evaluation of TCM，which has become one of the development trends of quality standardization of TCM.This paper mainly discusses the quality evaluation technology of TCM based on biological activity and effect benchmarks in recent years and some of the research progress that has been made.Meanwhile，it discusses the main problems existing in the current biological evaluation of TCM quality and its application，and further its future application，making an outlook to better control the quality，so as to better control the quality of TCM.

Keywords Traditional Chinese medicine; Biological activity; Efficacy benchmark; Quality evaluation technique; Development status; Prospect

中圖分類(lèi)號(hào)：R285;R284.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.15.007

中藥質(zhì)量是中藥發(fā)揮臨床療效的保障，對(duì)于中藥質(zhì)量的控制與評(píng)價(jià)研究一直是推動(dòng)中藥現(xiàn)代化進(jìn)程中的重點(diǎn)和難點(diǎn)[1]。中藥多組分、多靶點(diǎn)、多途徑的特點(diǎn)決定了其物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制的復(fù)雜性。隨著現(xiàn)代分析技術(shù)的飛速發(fā)展以及各學(xué)科交叉的融合創(chuàng)新，中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)研究有了全方位的進(jìn)步，經(jīng)歷了從形態(tài)鑒別到化學(xué)成分定性及定量檢測(cè)再到全過(guò)程動(dòng)態(tài)控制，從單個(gè)指標(biāo)的含量測(cè)定到基于指紋圖譜的多指標(biāo)同時(shí)測(cè)定，從基于對(duì)照品的含量測(cè)定到一測(cè)多評(píng)等變化，從整體上對(duì)中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)水平進(jìn)行了提升[2]。然而，僅基于化學(xué)基準(zhǔn)的中藥質(zhì)量控制模式存在指標(biāo)性成分難以全面地反映整體質(zhì)量、與臨床有效性及安全性關(guān)聯(lián)不夠緊密、不能充分體現(xiàn)中醫(yī)藥特色等問(wèn)題，仍存在較大的局限性。因此，有學(xué)者提出構(gòu)建“中藥品質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)控力金字塔”，在基于化學(xué)基準(zhǔn)的基礎(chǔ)上增加效應(yīng)基準(zhǔn)，逐步建立以生物評(píng)價(jià)為核心手段和指標(biāo)之一的中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系，這將是中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化建設(shè)的重要發(fā)展方向[3]?；诨瘜W(xué)基準(zhǔn)的中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)重在檢驗(yàn)藥材的“真?zhèn)巍保谏锘钚耘c效應(yīng)基準(zhǔn)的中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)重在把關(guān)藥材的“優(yōu)劣”。生物評(píng)價(jià)以理化分析和常規(guī)檢定為物質(zhì)化前提，常規(guī)檢定以生物評(píng)價(jià)為效應(yīng)性判定，兩者應(yīng)是相輔相成、互為補(bǔ)充[4]，共同完善中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)體系。見(jiàn)圖1。

生物評(píng)價(jià)技術(shù)是以藥物的生物效應(yīng)為基礎(chǔ)，利用整體動(dòng)物、離體組織、器官、微生物和細(xì)胞以及相關(guān)生物因子等為試驗(yàn)系，評(píng)價(jià)藥物有效性或毒性的方法，是繼性狀評(píng)價(jià)、化學(xué)評(píng)價(jià)之后，推動(dòng)中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)走進(jìn)臨床、關(guān)聯(lián)療效的關(guān)鍵舉措[4]。2006年肖小河研究團(tuán)隊(duì)首次提出將生物評(píng)價(jià)作為中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)的重要內(nèi)容[5]，構(gòu)建基于道地藥材和生物評(píng)價(jià)的中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)模式，促進(jìn)了中藥質(zhì)量生物評(píng)價(jià)的蓬勃發(fā)展。繼2010版《中華人民共和國(guó)藥典》一部[6]收錄“中藥生物活性測(cè)定指導(dǎo)原則”后，2015版《中華人民共和國(guó)藥典》[7]增添了“基于基因芯片的藥物評(píng)價(jià)技術(shù)與方法指導(dǎo)”和“中藥材DNA條形碼分子鑒定法指導(dǎo)原則”，2020版《中華人民共和國(guó)藥典》又增加了“DNA測(cè)序技術(shù)指導(dǎo)原則”和“標(biāo)準(zhǔn)核酸序列建立指導(dǎo)原則”[8]。美國(guó)FDA也于2015年發(fā)布《植物藥開(kāi)發(fā)指南（草案）》[9]，明確指出與臨床療效相關(guān)的生物檢測(cè)方法是植物藥質(zhì)量控制手段的發(fā)展方向，預(yù)示著生物測(cè)定必將成為中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)體系中的重要指標(biāo)之一。

目前中藥質(zhì)量生物評(píng)價(jià)技術(shù)大體可分為2大類(lèi)：1）基于遺傳信息的中藥基原DNA分子鑒定，如隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA（RAPD）、DNA條形碼等，主要用于中藥基原的鑒定;2）基于生物效應(yīng)的中藥生物活性測(cè)定，主要用于中藥質(zhì)量的有效性和安全性評(píng)價(jià)[4]。近年來(lái)，隨著生物檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，現(xiàn)代生物評(píng)價(jià)方法也有了新的手段，相繼出現(xiàn)了熱活性指紋圖譜（Thermal Activity Fingerprint）、細(xì)胞指紋圖譜（Cell Fingerprint）、生物自顯影薄層色譜（Bioautography TLC）、高內(nèi)涵分析（High Content Analysis）、生物芯片（Biochip）等生物效應(yīng)表達(dá)譜檢測(cè)方法，能夠同時(shí)滿(mǎn)足對(duì)中藥的定性鑒別與定量評(píng)價(jià)，在中藥質(zhì)量一致性評(píng)價(jià)中具有優(yōu)勢(shì)。生物標(biāo)志物（Bio-marker）是標(biāo)記系統(tǒng)、器官、組織、細(xì)胞及亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)或功能的改變或可能發(fā)生改變的生物學(xué)或生物化學(xué)指標(biāo)[10]。用于中藥質(zhì)量控制的生物標(biāo)志物（Q-Bio-marker）是能夠反映中藥臨床功效或藥理作用的生物活性指標(biāo)，可以將生物效應(yīng)進(jìn)行量化，關(guān)聯(lián)中藥的有效性、安全性和一致性[11]，理論上可用于大多數(shù)中藥的質(zhì)量評(píng)價(jià)，特別適合用于化學(xué)成分及藥效作用機(jī)制不清楚且缺乏定量藥效評(píng)價(jià)指標(biāo)的中藥[12]，包括生物活性值或效價(jià)（Biopotency）、生物活性標(biāo)志物（Biomarker）、生物效應(yīng)表達(dá)譜（Biological Fingerprint）等。除此之外，中藥質(zhì)量生物評(píng)價(jià)方法還包括效應(yīng)成分指數(shù)（Effective Components Index，ECI）、效應(yīng)當(dāng)量（Efficacy Equivalent，EE）、道地指數(shù)（Dao-di Index，DDI）等綜合性指標(biāo)?；谏锘钚耘c效應(yīng)基準(zhǔn)的中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)技術(shù)特點(diǎn)與適用范圍。見(jiàn)表1。

1 中藥生物活性測(cè)定技術(shù)

生物活性測(cè)定與中藥臨床療效和安全性的關(guān)聯(lián)性較為緊密，是反映臨床功效的基本方法之一。其以藥物的生物效應(yīng)為基礎(chǔ)，以生物統(tǒng)計(jì)學(xué)為工具，結(jié)合中藥及其制劑的主治功能或不良反應(yīng)，通過(guò)比較對(duì)照品和供試品對(duì)生物體或離體器官與組織、生物標(biāo)記物等特定的生物效應(yīng)，從而評(píng)價(jià)和控制中藥整體的質(zhì)量和活性。測(cè)定技術(shù)包括生物效價(jià)測(cè)定法、生物活性限值和毒價(jià)測(cè)定[13]。其中，生物效價(jià)與生物活性限值的區(qū)別在于前者在一定劑量范圍內(nèi)的量效關(guān)系明顯，而后者往往在達(dá)到某一特定值（如給藥量）后，才表現(xiàn)出某效應(yīng)，如出現(xiàn)死亡、驚厥等，屬于半定量或定性范疇。

1.1 生物效價(jià)測(cè)定技術(shù) 生物效價(jià)可以較好地反映中藥產(chǎn)品的整體活性，并關(guān)聯(lián)中藥功效，適用于化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)不明確、常規(guī)理化方法難以評(píng)價(jià)其質(zhì)量或不能反映其臨床生物活性的中藥及其制劑[11]。通過(guò)選擇直接關(guān)聯(lián)功效的生物效價(jià)分析方法能很好彌補(bǔ)化學(xué)評(píng)價(jià)方法的不足，為中藥的整體質(zhì)量評(píng)價(jià)提供新的研究思路。曹喆等[14]以麻黃“發(fā)汗散寒”的功效為基礎(chǔ)，建立大鼠發(fā)汗藥理模型，以大鼠發(fā)汗量為檢測(cè)指標(biāo)，測(cè)定不同產(chǎn)地麻黃對(duì)大鼠足后跖發(fā)汗斑點(diǎn)數(shù)的影響，結(jié)果表明，不同產(chǎn)地麻黃發(fā)汗效價(jià)與麻黃堿、偽麻黃堿總量之間的相關(guān)性不顯著，提示麻黃中可能還含有更強(qiáng)的具有發(fā)汗作用的化學(xué)物質(zhì)或麻黃發(fā)汗作用是多種成分協(xié)同作用的結(jié)果，為麻黃質(zhì)量評(píng)價(jià)研究提供新的研究思路。將生物評(píng)價(jià)方法引入動(dòng)物類(lèi)中藥的質(zhì)量評(píng)控中，盡可能多地反映其功能主治，可彌補(bǔ)動(dòng)物類(lèi)中藥質(zhì)量控制缺陷的現(xiàn)狀[15]。例如，對(duì)于清熱解毒類(lèi)動(dòng)物藥，如麝香、水牛角等，可采用抗菌、抗炎及解熱作用評(píng)價(jià)其清熱解毒功效，在此基礎(chǔ)上建立了酶免疫法、微量熱法等生物評(píng)價(jià)方法，有效地提高了質(zhì)量控制水平。對(duì)于滋陰補(bǔ)血類(lèi)動(dòng)物藥，如阿膠、冬蟲(chóng)夏草等，可利用吞噬細(xì)胞等免疫學(xué)功能的改變、構(gòu)造生物衰老模型等來(lái)評(píng)價(jià)其免疫調(diào)節(jié)、增強(qiáng)造血及抗衰老的療效，直接反映其滋陰補(bǔ)血之功效，類(lèi)似的還有活血化瘀類(lèi)及壯陽(yáng)益腎類(lèi)動(dòng)物藥等。Zhang等[16]綜合分析了不同產(chǎn)地三七的化學(xué)標(biāo)志物（三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd）、生物效價(jià)（抗凝活性）和生態(tài)因素（經(jīng)度、緯度、海拔等）來(lái)評(píng)價(jià)三七的質(zhì)量，利用這些參數(shù)可以有效地區(qū)分來(lái)自不同產(chǎn)地的三七，由此建立了可靠的質(zhì)量評(píng)估體系。在中藥成方制劑方面，曹波等[17]利用基于體外抗血小板聚集的生物效價(jià)檢測(cè)方法，以小金丸臨床活血化瘀功效為出發(fā)點(diǎn)，評(píng)價(jià)其質(zhì)量的一致性，并篩選出地龍、五靈脂和木鱉子可能是小金丸組方中發(fā)揮活血作用的關(guān)鍵中藥。

1.2 生物活性限值測(cè)定技術(shù) 生物活性的存在是實(shí)現(xiàn)藥效作用的前提和基礎(chǔ)，未能建立生物效價(jià)測(cè)定的中藥可采用生物活性限值測(cè)定法，生物活性限值是一種定性或半定量的評(píng)價(jià)方法，可采用中藥成分或化學(xué)藥品作為方法可靠性驗(yàn)證用對(duì)照品[13]。高天紅等[18]建立紅花注射液的生物活性限值測(cè)定方法，以綜合評(píng)價(jià)其產(chǎn)品質(zhì)量。使用膠原-腎上腺素誘導(dǎo)小鼠急性腦血栓模型，以紅花注射液對(duì)小鼠的偏癱保護(hù)率作為指標(biāo)，考察紅花注射液的抗血栓生物活性。結(jié)果表明使用5.0 g生藥/kg的紅花注射液連續(xù)3 d腹腔注射給藥，對(duì)膠原-腎上腺素誘導(dǎo)小鼠急性腦血栓具有明顯的保護(hù)作用，同時(shí)建立的生物活性限值方法重復(fù)性、中間精密度、實(shí)驗(yàn)室間重現(xiàn)性良好，因此建議以5.0 g生藥/kg劑量作為紅花注射液生物活性工藝優(yōu)化和產(chǎn)品質(zhì)量控制的限值。Li等[19]構(gòu)建了一種生物測(cè)定方法評(píng)估何首烏的抗血小板聚集作用，并結(jié)合化學(xué)方法鑒定了抗血小板聚集標(biāo)志物，可將樣品質(zhì)量與中藥臨床療效相關(guān)的潛在化學(xué)標(biāo)志物相關(guān)聯(lián)。周雪等[20]以天麻超微粉對(duì)小鼠自發(fā)活動(dòng)的影響，以及其對(duì)小鼠戊巴比妥鈉誘導(dǎo)睡眠時(shí)間的影響為考察指標(biāo)，研究了天麻超微粉鎮(zhèn)靜催眠作用的生物活性限制測(cè)定方法，該法可作為天麻超微粉的生物活性質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，能有效配合傳統(tǒng)檢驗(yàn)方法對(duì)天麻微粉化制劑進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)控。

1.3 生物毒價(jià)測(cè)定技術(shù) 中藥毒性具有現(xiàn)代生物技術(shù)難以檢測(cè)的微小毒性、綜合毒性等特點(diǎn)，是中藥安全性評(píng)價(jià)的關(guān)鍵問(wèn)題之一。如何準(zhǔn)確、快速、高效地評(píng)價(jià)中藥的毒性，是中藥毒性研究的重要方向[21]?；瘜W(xué)毒性評(píng)價(jià)存在一定的問(wèn)題，如部分成分不能完全代表有毒中藥的整體毒性，成分之和簡(jiǎn)單相加缺乏依據(jù)等。而生物毒價(jià)可直接反映中藥產(chǎn)品的毒性，與生物效價(jià)檢測(cè)方法相似，是一種關(guān)聯(lián)臨床、客觀準(zhǔn)確、快速經(jīng)濟(jì)的評(píng)價(jià)方法，可用于中藥的安全性評(píng)價(jià)。以毒價(jià)作為統(tǒng)一的毒性標(biāo)示對(duì)藥材生產(chǎn)、加工、炮制等環(huán)節(jié)質(zhì)量進(jìn)行序貫控制，可輔助醫(yī)生在臨床上根據(jù)標(biāo)示毒價(jià)調(diào)整劑量，確保用藥安全[4]。例如中藥附子具有回陽(yáng)救逆、補(bǔ)火助陽(yáng)的功效，而附子所含的多種強(qiáng)心成分具有較強(qiáng)的心臟毒性，可從生物活性層面對(duì)附子進(jìn)行質(zhì)量控制。劉蕾等[22]利用生物活性限制測(cè)定方法，以附子抑制心肌細(xì)胞活力的效應(yīng)作為生物活性評(píng)價(jià)指標(biāo)，研究了不同來(lái)源附子水提物對(duì)大鼠心肌細(xì)胞H9c2毒性的影響，探討其毒性劑量限值及其檢測(cè)限。結(jié)果確定了15.6 μg/mL可作為限值劑量，在該限值濃度下對(duì)大鼠心肌H9c2細(xì)胞活力抑制率為20%～24%，可作為質(zhì)量合格的標(biāo)準(zhǔn)。趙志浩等[23]通過(guò)測(cè)定附子引起的大鼠室性早搏的最小中毒量，建立了附子毒性成分指數(shù)，作為附子炮制品減毒程度和質(zhì)量評(píng)價(jià)的重要參考指標(biāo)，評(píng)價(jià)了生附片、黑順片、白附片、蒸附片、炮天雄、刨附片的生物毒性，該方法具有快速、準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)易行的技術(shù)優(yōu)勢(shì)，還可用于不同商品等級(jí)的黑順片、附子配方顆粒、含附子的注射劑以及川烏、草烏等的質(zhì)量評(píng)價(jià)，為毒性中藥的質(zhì)量評(píng)控與臨床應(yīng)用提供了新的思路與方法。華樺等[21]利用Microtox技術(shù)測(cè)定金銀花醇提物、山銀花醇提物對(duì)發(fā)光菌發(fā)光強(qiáng)度抑制率，計(jì)算發(fā)光細(xì)菌半數(shù)抑制濃度（IC50），來(lái)評(píng)價(jià)金銀花、山銀花提取物的毒性，與小鼠急性毒性試驗(yàn)比較，該法快速、簡(jiǎn)單、靈敏度高，可為全面評(píng)價(jià)中藥安全性提供參考。

生物活性測(cè)定法能更為直接地表征中藥的生物活性，但也存在一定的局限性。鑒于生物效毒價(jià)檢測(cè)多為離體細(xì)胞、組織、器官的定量藥理反應(yīng)，且是基于某一特定藥理?xiàng)l件下的活性測(cè)定結(jié)果，尚不能完全反映中藥在疾病狀態(tài)下的治療作用[3]。采用生物限值法用于中藥生物活性質(zhì)量控制，需在實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)穩(wěn)定的情況下進(jìn)行評(píng)價(jià)，這也是其在生物活性方面對(duì)中藥進(jìn)行質(zhì)控的局限[22]。理論上，實(shí)驗(yàn)方法學(xué)考察的變異系數(shù)越小越好，但是生物效價(jià)檢測(cè)方法存在一定的因生物個(gè)體差異而引起的誤差，因此準(zhǔn)確度、專(zhuān)屬性和精密度等較低，與化學(xué)分析方法存在差距。標(biāo)準(zhǔn)品的選擇也是中藥生物活性測(cè)定法的重要問(wèn)題之一，理想的生物效應(yīng)評(píng)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)與供試品是同質(zhì)的，在一定劑量范圍內(nèi)，可視為供試品不同程度的濃縮物或稀釋物，最大限度地消除測(cè)定系統(tǒng)誤差，但由于中藥成分復(fù)雜，目前尚無(wú)用于生物效價(jià)研究的標(biāo)準(zhǔn)品。對(duì)此，有必要建立針對(duì)某一藥理活性的標(biāo)準(zhǔn)品以量化藥理活性[1]。

2 效應(yīng)成分指數(shù)評(píng)控技術(shù)

效應(yīng)成分指數(shù)（ECI）是一種綜合量化的評(píng)價(jià)指標(biāo)，融合了化學(xué)評(píng)價(jià)的精準(zhǔn)性與生物評(píng)價(jià)關(guān)聯(lián)藥效和安全性的優(yōu)勢(shì)，是一種關(guān)聯(lián)中藥臨床功效與活性的評(píng)價(jià)方法，克服了目前中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)片面、分散、脫離藥效等弊端，適用于藥效物質(zhì)及活性成分相對(duì)明確的中藥。對(duì)于有效性來(lái)說(shuō)，ECI越高，表明質(zhì)量和療效越好;針對(duì)安全性，毒性ECI越高，表明安全性風(fēng)險(xiǎn)越高。基于效應(yīng)當(dāng)量（EE），還可以對(duì)不同質(zhì)量的中藥進(jìn)行劑量調(diào)整，從而實(shí)現(xiàn)療效穩(wěn)定，解決質(zhì)量差異對(duì)臨床療效穩(wěn)定性的影響[12]。

由于不同來(lái)源的中藥化學(xué)組成存在一定的差異，這將導(dǎo)致它們?cè)谫|(zhì)量和功效方面存在顯著差異，而現(xiàn)有的質(zhì)量評(píng)價(jià)方法不與功效相關(guān)，不能反映不同化學(xué)成分對(duì)整體藥效的貢獻(xiàn)度。ECI評(píng)控方法可為臨床中藥實(shí)現(xiàn)辨質(zhì)用藥、優(yōu)質(zhì)優(yōu)價(jià)和科學(xué)監(jiān)管提供新的科學(xué)依據(jù)和技術(shù)支持。譚鵬等[24]構(gòu)建了一種基于生物效價(jià)權(quán)重系數(shù)加權(quán)的多組分化學(xué)定量分析的大黃質(zhì)量評(píng)控模式——致瀉效應(yīng)成分指數(shù)。采用UPLC同時(shí)測(cè)定大黃中12個(gè)化學(xué)成分的含量，利用ICR小鼠便秘模型測(cè)定12個(gè)化學(xué)成分的致瀉生物效價(jià)，以番瀉苷A的致瀉生物效價(jià)為基準(zhǔn)，得到各個(gè)化學(xué)成分的生物效價(jià)權(quán)重系數(shù)（ECE），進(jìn)而計(jì)算大黃致瀉效應(yīng)成分指數(shù)。該指數(shù)有望指導(dǎo)臨床中醫(yī)師更合理地使用不同來(lái)源的大黃：當(dāng)大黃用于治療便秘時(shí)，可選用ECI數(shù)值較高（15～20）的大黃;當(dāng)大黃用于治療其他疾病時(shí)，可選擇ECI數(shù)值較低（1～10）的大黃，從而避免ECI數(shù)值較高的大黃帶來(lái)的劇烈腹瀉不良反應(yīng)。因此，效應(yīng)成分指數(shù)方法有望成為傳統(tǒng)中藥質(zhì)量評(píng)控方法的有益補(bǔ)充。程斌等[25]運(yùn)用化痰效應(yīng)成分指數(shù)對(duì)浙貝母品質(zhì)進(jìn)行評(píng)價(jià)，實(shí)現(xiàn)了從量到效、量中含效，可全面評(píng)價(jià)浙貝母的內(nèi)在品質(zhì)，為其產(chǎn)地加工工藝、市場(chǎng)流通提供客觀、可量化的參考依據(jù)。Chen等[26]建立了中藥大果飛蛾藤的ECI，對(duì)大鼠血漿中的生物效價(jià)和成分進(jìn)行了分析，結(jié)果表明所建立的ECI可以有效地對(duì)大果飛蛾藤進(jìn)行質(zhì)量評(píng)估，同時(shí)結(jié)合一測(cè)多評(píng)法對(duì)多組分進(jìn)行定量分析，可提高已建立的ECI的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。在中藥制劑的生物評(píng)價(jià)方面，譚鵬等[27]將多指標(biāo)成分同時(shí)定量分析和生物效價(jià)分析方法結(jié)合，進(jìn)行大黃配方顆粒的質(zhì)量評(píng)價(jià)研究，在化學(xué)成分含量測(cè)定的同時(shí)進(jìn)行致瀉生物效價(jià)和體外抗血小板聚集研究，比較不同批次大黃配方顆粒的活血生物效價(jià)，結(jié)果表明10個(gè)批次間大黃配方顆粒的化學(xué)表征、致瀉、活血生物效價(jià)均存在一定的差異性，采用多組分化學(xué)表征和生物效價(jià)檢測(cè)聯(lián)用的模式可以客觀量化、更全面的反映不同批次大黃配方顆粒的整體質(zhì)量差異。張慧等[28]建立基于ECI的雙黃連制劑質(zhì)量控制方法，采用抗生素微生物檢定法檢測(cè)不同來(lái)源雙黃連制劑的抗菌效價(jià)，結(jié)合HPLC定量指紋圖譜與偏最小二乘-判別分析法（PLC-DA）進(jìn)行“量-效”相關(guān)性分析，篩選出野黃芩苷、綠原酸、黃芩苷、連翹脂苷A為雙黃連制劑的抗菌功效成分，藥效權(quán)重系數(shù)證實(shí)所測(cè)得的抗菌效價(jià)與功效成分指數(shù)呈正相關(guān)，可實(shí)現(xiàn)以ECI進(jìn)行雙黃連制劑的質(zhì)量評(píng)控。

ECI簡(jiǎn)單易行，能定量、定效地表征中藥質(zhì)量。然而，ECI的構(gòu)建也存在一些缺陷和不足。由于多種成分的協(xié)同或拮抗作用將影響中藥質(zhì)量的整體評(píng)價(jià)，如何確證藥材中與臨床功效相關(guān)聯(lián)的活性成分，如何表征這些活性成分之間的協(xié)同或拮抗作用將成為ECI法面臨的挑戰(zhàn)[24]。

3 生物效應(yīng)表達(dá)譜

生物效應(yīng)表達(dá)譜（Bio-response Profile）是指在特定的實(shí)驗(yàn)條件下，供試藥物作用于生物體系所表達(dá)出的一組特征生物學(xué)信息或圖譜，通常具有時(shí)間-效應(yīng)或劑量-效應(yīng)依賴(lài)關(guān)系[12]，包括生物熱活性指紋圖譜、基因表達(dá)譜、蛋白質(zhì)表達(dá)譜、代謝物表達(dá)譜、細(xì)胞表型特征譜、生物自顯影薄層色譜等。相對(duì)于經(jīng)典生物效價(jià)檢測(cè)，生物效應(yīng)表達(dá)譜能反映藥物作用于生物的更多指紋和（或）動(dòng)態(tài)信息[12]，具有指紋性或?qū)傩?，不僅可以鑒別中藥的真?zhèn)蝺?yōu)劣，還可用于中藥質(zhì)量波動(dòng)監(jiān)測(cè)。趙恒強(qiáng)等[29]利用基于DPPH-HPLC技術(shù)的抗氧化活性指紋圖譜對(duì)馬糞海膽進(jìn)行分析，并對(duì)具有較好抗氧化活性的馬糞海膽水提物中的成分進(jìn)行篩選，結(jié)合指紋圖譜與相似度分析對(duì)不同來(lái)源的馬糞海膽進(jìn)行鑒別，為海洋中藥的質(zhì)量控制和真?zhèn)舞b別研究提供了新方法。

中藥注射劑成分復(fù)雜，包含多種不同化學(xué)類(lèi)別的化合物，如類(lèi)黃酮、皂苷和多糖等。產(chǎn)品質(zhì)量問(wèn)題是引起中藥注射劑不良反應(yīng)的重要原因之一，因此對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制與安全性評(píng)價(jià)至關(guān)重要[30]。由于化學(xué)分析方法所提供的信息與體內(nèi)活性之間缺乏相關(guān)性，無(wú)法保證中藥注射劑的臨床安全性和有效性。將生物效應(yīng)表達(dá)譜引入中藥注射劑的質(zhì)量控制體系有助于提高其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。Feng等[31]利用化學(xué)指紋圖譜和生物測(cè)定法建立了紅花注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，包括基于細(xì)胞的生物學(xué)特征測(cè)定和酶促測(cè)定，根據(jù)靶細(xì)胞相關(guān)的變態(tài)反應(yīng)和紅花注射液的凝血酶抑制活性，可監(jiān)測(cè)RBL-2H3細(xì)胞系對(duì)不同紅花注射液的反應(yīng)，并獲得了相應(yīng)的基于細(xì)胞的生物學(xué)特征測(cè)定信息，同時(shí)鑒定了紅花注射液中的33種化合物，其中黃芩苷和山柰酚-3-O-蕓香糖苷被認(rèn)為是造成臨床不良反應(yīng)的物質(zhì)。此外，生物熱活性圖譜可以區(qū)別高溫處理樣品及污染變質(zhì)樣品，全面反映模型生物的熱生物學(xué)信息，提供專(zhuān)屬性較強(qiáng)的二維信息，因此可作為化學(xué)特征圖譜的有益補(bǔ)充[30]。從質(zhì)量均一性出發(fā)，以中藥注射劑的主要功效為著眼點(diǎn)，采用微量量熱法，以生物熱活性圖譜及熱動(dòng)力學(xué)參數(shù)等定性定量地表征中藥注射劑的功效差異[30]，由此建立了注射用雙黃連凍干粉、注射用益氣復(fù)脈凍干粉、清開(kāi)靈注射液、茵梔黃注射液等中藥注射劑的熱活性指紋圖譜[4]。該法可以靈敏準(zhǔn)確地區(qū)分不同批次產(chǎn)品、不同處理樣品及污染樣品的生物活性差異，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)中藥注射劑的質(zhì)量信息，為其質(zhì)量一致性和穩(wěn)定性評(píng)價(jià)提供新的方法。

4 基于生物活性與效應(yīng)基準(zhǔn)的中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)技術(shù)存在的問(wèn)題

基于生物活性與效應(yīng)基準(zhǔn)的中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)技術(shù)雖然取得了重要進(jìn)展，但其對(duì)臨床合理用藥和臨床療效提升的指導(dǎo)和支持作用一直難以體現(xiàn)[4]，具體存在以下問(wèn)題亟待解決。首先，復(fù)方中某些具有傳統(tǒng)藥理功效的成分由于含量較低，所占比例小，未達(dá)到起效濃度，可能顯示不出其生物評(píng)價(jià)效應(yīng)。中藥質(zhì)量生物評(píng)價(jià)方法不同于一般的藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)及化學(xué)評(píng)價(jià)，其與藥理藥效評(píng)價(jià)的區(qū)別在于前者的最終目的是對(duì)中藥及其制劑的質(zhì)量進(jìn)行評(píng)控，而后者僅僅在于篩選藥理成分及探討作用機(jī)制。中藥質(zhì)量生物評(píng)價(jià)須具備定量藥理學(xué)與藥檢分析的雙重屬性和要求，其方法學(xué)考察既包括試驗(yàn)設(shè)計(jì)、量化指標(biāo)、劑間距、分組、對(duì)照、可靠性檢驗(yàn)等定量藥理學(xué)的內(nèi)容，還包括線性范圍、精密度、重現(xiàn)性等藥物分析的內(nèi)容[4]。且在生物評(píng)價(jià)的過(guò)程中，不應(yīng)以化學(xué)評(píng)價(jià)中的方法學(xué)指標(biāo)為參照，其專(zhuān)屬性、準(zhǔn)確性及檢驗(yàn)誤差等不及理化鑒定，但由于其針對(duì)主要功效即可建立相關(guān)性好、操作性強(qiáng)的檢測(cè)方法，與中藥的安全性、有效性相關(guān)聯(lián)，加之采用生物鑒定設(shè)計(jì)和統(tǒng)計(jì)方法，因此具有較好的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性。

其次，生物評(píng)價(jià)方法的通用性較差，難以同時(shí)滿(mǎn)足數(shù)量眾多的中藥及其制劑的質(zhì)量評(píng)控。由于中藥成分復(fù)雜，如何有效地進(jìn)行生物效應(yīng)評(píng)價(jià)是一個(gè)需要不斷探索和完善的問(wèn)題[32]。同時(shí)，中藥質(zhì)量生物評(píng)價(jià)短時(shí)間內(nèi)難以在基層檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)和研究機(jī)構(gòu)全面普及，即存在一定的可及性和普適性難題，因此至今尚未建立中藥生物效應(yīng)評(píng)價(jià)法的標(biāo)準(zhǔn)體系。

5 結(jié)語(yǔ)

中藥現(xiàn)代化、國(guó)際化發(fā)展的關(guān)鍵在于中藥的安全性、有效性、質(zhì)量穩(wěn)定性與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完全控制[10]。基于化學(xué)基準(zhǔn)的中藥質(zhì)量控制模式由于脫離中藥多成分協(xié)同起效的整體性特點(diǎn)，不能準(zhǔn)確反映臨床療效、評(píng)價(jià)中藥及其制劑的質(zhì)量。中藥生物效應(yīng)法作為一種新的質(zhì)量控評(píng)手段，具有藥效相關(guān)、整體可控的優(yōu)勢(shì)，將成為中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化的重要發(fā)展方向。見(jiàn)圖2。

生物效價(jià)測(cè)定法可以很好地反映中藥的整體活性和臨床療效，在評(píng)價(jià)中藥質(zhì)量的安全性和有效性方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì);效應(yīng)成分指數(shù)整合了化學(xué)評(píng)價(jià)和生物評(píng)價(jià)的技術(shù)優(yōu)勢(shì)，具有多指標(biāo)整合量化集成的特點(diǎn);生物效應(yīng)表達(dá)譜具有專(zhuān)屬性和特異性，可促進(jìn)中藥質(zhì)量一致性評(píng)價(jià)。但生物評(píng)價(jià)仍尚處于探索階段，應(yīng)與理化分析技術(shù)結(jié)合使用、互為補(bǔ)充，以更科學(xué)、有效地進(jìn)行中藥質(zhì)量控制。針對(duì)不同功效的中藥，應(yīng)選擇能夠反映其臨床療效的生物活性測(cè)

定方法，進(jìn)行全面、深入地研究，制定關(guān)聯(lián)臨床、可量化的質(zhì)量評(píng)控體系，促使中藥產(chǎn)業(yè)高質(zhì)量發(fā)展。

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（2020-07-01收稿 責(zé)任編輯：王明）

基金項(xiàng)目：國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（2018YFC1706900）;中國(guó)藥科大學(xué)雙一流建設(shè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目（CPU2018GY11）作者簡(jiǎn)介：張萌（1997.02—），女，碩士研究生在讀，研究方向：中藥制劑，E-mail：zhangmengcpuer@163.com通信作者：封亮（1981.03—），男，博士，副教授，博士研究生導(dǎo)師，研究方向：方藥物質(zhì)基礎(chǔ)“組分結(jié)構(gòu)”理論、技術(shù)與應(yīng)用，E-mail：wenmoxiushi@163.com;賈曉斌（1966.09—），男，博士，教授，博士研究生導(dǎo)師，研究方向：方藥物質(zhì)基礎(chǔ)“組分結(jié)構(gòu)”理論、技術(shù)與應(yīng)用，E-mail：jiaxiaobin2015@163.com