★ 吳大力 蔣鵬飛 彭俊 彭清華,4***（1.湖南中醫(yī)藥大學 長沙 410208；2.廣西中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院 南寧 530023；3.中醫(yī)藥防治眼耳鼻咽喉疾病湖南省重點實驗室 長沙410208；4.湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院 長沙 410007）

隨著激光在眼科檢查及治療的廣泛應用，由激光所致的醫(yī)源性視網(wǎng)膜光損傷也越來越多，許多眼科疾病的發(fā)生與視網(wǎng)膜長期光照的積累效應有關［1-3］，如老年性黃斑變性。蠐螬在眼科應用較早，《晉書》中有此藥治療目疾的記載：“吳中書郎戰(zhàn)沖，母王氏失明，婢取蠐螬蒸熟與食，王以為美，沖還知之，抱母慟哭，母目即開”。本實驗探討了蠐螬提取物對光損傷所致視網(wǎng)膜變性保護作用及最佳劑量。

1 材料

1.1 實驗動物 選用30只健康實驗性兔，均為雄性，體重 1.8～2.3 Kg。

1.2 主要實驗藥品、試劑及儀器 MoticB5光學顯微鏡，蠐螬提取物、Harris蘇木素（湖南中醫(yī)藥大學病理實驗室，批號：71020784）、ECL發(fā)光試劑盒（武漢賽維爾生物科技有限公司，批號：G2014）。

2 實驗方法

2.1 分組方法 采用隨機數(shù)字表法將30只實驗性兔平均分為空白組、模型組、蠐螬低劑量組、蠐螬中劑量組、蠐螬高劑量組。

2.2 造模方法 采用自制光化學損傷裝置對實驗動物進行累計36 h光照［3］，實驗動物不散瞳及麻醉，光照后送回暗環(huán)境中飼養(yǎng)。正常對照組不施行光照試驗。

2.3 給藥方法 A、B組每日以蒸餾水5 mL/Kg灌胃；C組按照成人日用量5倍劑量灌胃，為0.45 g/Kg，配成5 mL蠐螬提取物混懸液；D組按照成人日用量10倍劑量灌胃；E組按照成人日用量20倍劑量灌胃。每日灌胃1次，連續(xù)給藥2周。

2.4 標本的制備 實驗結(jié)束后，處死實驗動物，摘除眼球，剝離激光斑部位視網(wǎng)膜，切片烘干備用。

2.5 指標測定 光鏡下觀察各組大鼠視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)及厚度改變。

2.6 圖像分析 用MoticB5光學顯微鏡10×40倍鏡進行組織切片照相，用圖形分析系統(tǒng)測量視網(wǎng)膜外核層連續(xù)5個視野的厚度。

2.7 統(tǒng)計學分析 統(tǒng)計學分析采用SPSS21.0進行正態(tài)性和方差齊性檢驗，及單因素方差分析（one way ANOVA）。P＜0.05表示差異具有顯著性。

3 結(jié)果

3.1 HE染色光鏡下病理形態(tài)學觀察 A組：實驗性兔視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)層次分明。B組：視網(wǎng)膜層次結(jié)構(gòu)模糊，分界不清，出現(xiàn)不規(guī)則淡染。C組：視網(wǎng)膜外核層胞核排列較疏松。D組：視網(wǎng)膜外核層增厚，視網(wǎng)膜外核層胞核排列較整齊密集。E組：視網(wǎng)膜外核層胞核排列較整齊，厚度有增加。見圖1。

圖1 各組實驗性兔視網(wǎng)膜組織HE染色結(jié)果

3.2 各組間視網(wǎng)膜厚度比較 與空白組比較，其余各組視網(wǎng)膜厚度均不同程度變薄，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；蠐螬低劑量組與模型組視網(wǎng)膜厚度比較，差異無顯著性意義（P＞0.05），說明蠐螬低劑量組視網(wǎng)膜厚度無明顯提高；蠐螬中、高劑量組與模型組相比，差異具有顯著性意義（P＜0.05），說明蠐螬中、高劑量組視網(wǎng)膜厚度有明顯增厚；蠐螬中劑量組與蠐螬低劑量組比較，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

各組間視網(wǎng)膜厚度比較（ ，n=6） μm

4 討論

眼底激光作為高能量的單色光，其對視網(wǎng)膜的灼傷屬于眼外傷范疇，多導致視衣氣陰受損，氣虛血瘀。目珠脈道幽深細微，經(jīng)絡分布周密，氣血縱橫貫目，若激光灼傷目珠，氣陰受損，脈絡瘀滯，使神光發(fā)越受阻，視功能減退。目得陰血而能視，氣脫者目不明，神光賴其真氣真血真精之滋養(yǎng)，方能明視萬物。益氣則神光有所滋養(yǎng)，同時，氣旺以促血行；活血化瘀則目珠脈道通暢，氣血可以縱橫貫目，神光方能有所發(fā)越。故治療常以益氣活血化瘀為主，輔以養(yǎng)陰利水。蠐螬在《神農(nóng)本草經(jīng)》中最早有記載：“主惡血血瘀痹氣，破折血在脅下堅滿痛，月閉，目中淫膚、青翳白膜”。

由于持續(xù)的光照，活性脂肪酸代謝和高氧消耗，視網(wǎng)膜光感受器細胞發(fā)生慢性氧化應激［4-5］，導致細胞內(nèi)循環(huán)和降解減少，誘導炎癥［6-7］。炎癥是破壞細胞和組織內(nèi)平衡的細胞反應，炎性受體通過識別或感知不同的病原體和損傷相關的分子模式來啟動復雜的細胞級聯(lián)反應，長期炎癥在視網(wǎng)膜光損傷中扮演重要角色［8-10］。炎癥反應誘導了視網(wǎng)膜細胞的凋亡，在持續(xù)的細胞凋亡中，視網(wǎng)膜厚度會逐漸變薄。

本實驗發(fā)現(xiàn)模型組視網(wǎng)膜外核層厚度變薄，蠐螬中、高劑量治療組與模型組相比，視網(wǎng)膜外核層厚度有所增加。表明視網(wǎng)膜光損傷后厚度會變薄，而蠐螬中、高劑量治療組可以使視網(wǎng)膜厚度增加，提示蠐螬可對視網(wǎng)膜的損傷起到保護作用。