張金花 劉洪奕

摘 要 目的：改進復(fù)方玉芩膠囊中橙皮苷的薄層層析鑒別方法。方法：對橙皮苷鑒別中供試品溶液的制備、展開劑及展開條件進行了改進。結(jié)果：改進后的方法能清晰地檢測到樣品中的橙皮苷特征斑點，分離度好，無干擾。結(jié)論：改進的薄層層析鑒別方法操作簡便、安全、專屬性強，符合質(zhì)量控制要求，可用于復(fù)方玉芩膠囊的薄層層析鑒別。

關(guān)鍵詞 復(fù)方玉芩膠囊 橙皮苷 薄層層析

中圖分類號：R286； R927.11 文獻標志碼：A 文章編號：1006-1533（2020）15-0094-03

Study on TLC identification of hesperidin in Fufangyuqin capsule

ZHANG Jinhua*， LIU Hongyi**

（Department of Pharmacy， Ruijin Hospital affiliated to School of Medicine， Shanghai Jiao Tong University， Shanghai 200001， China）

ABSTRACT Objective： To improve a method for the identification of hesperidin in Fufangyuqin capsule by thin layer chromatography. Methods： The preparation of test solution and the developing agent and conditions were improved. Results： The characteristic spots of hesperidin in the sample could be clearly detected by the improved method with good resolution and no interference. Conclusion： This method is simple and safe， has strong specificity， can meet the quality control requirements and be used as a new method for the thin-layer identification of hesperidin in Fufangyuqin capsule.

KEY WORDS Fufangyuqin capsule； hesperidin； thin-layer chromatography

復(fù)方玉芩膠囊由柴胡、青皮（麩炒）、三七、蒼術(shù)（麩炒）、明帆、女貞子（制）、敗醬草、淡豆豉以上八味藥材組成，主要用于疏肝消脂，清熱化積，行氣活血以及用于非酒精性脂肪肝患者的肝內(nèi)脂肪浸潤、血脂升高等。其中橙皮苷為青皮的主要成分之一，現(xiàn)行復(fù)方玉芩膠囊質(zhì)量標準中（《中國藥典》2015年版四部通則0502）橙皮苷的薄層鑒別中的展開劑使用了有毒化學(xué)品甲苯，對檢測人員的身體以及環(huán)境會造成危害，需要改進。為了有效準確地對復(fù)方玉芩膠囊進行質(zhì)量控制的同時減少對檢測人員的傷害以及環(huán)境的污染，本研究對復(fù)方玉芩膠囊中橙皮苷鑒別的展開劑進行了改進，不使用甲苯，最后得到斑點清晰，分離度好的薄層色譜圖，且對陰性樣品無干擾，為有效控制該制劑的質(zhì)量提供了依據(jù)[1-4]。

1 材料和方法

1.1 儀器與試藥

5510E-MTH超聲波清洗儀（必能倍有限公司）；N-1001S-WD旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（貝朗醫(yī)療有限公司）；BSA3202S-CW電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）；雙槽展開缸（上海信宜儀器廠有限公司）；硅膠G薄層板（福山生化試劑廠）；ZF-2型三用紫外儀（上海市安亭電子儀器廠）。

橙皮苷對照品（批號110721-201115，純度95.30%，中國藥品生物制品檢定所）；其他試劑均為分析純，水為純化水。

復(fù)方玉芩膠囊（批號20150102、20160402、20170501，規(guī)格為0.3 g/粒，上海方心制藥科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 供試品溶液的制備

取本品（批號20150102）的內(nèi)容物1 g，加甲醇20 ml溶解。將原方法加熱回流20 min改為超聲提取20min，然后濾過，濾液濃縮至2 ml，作為供試品溶液。

1.2.2 對照品溶液的制備

另取橙皮苷對照品，加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液。

1.2.3 薄層層析

按照《中國藥典》2015年版四部通則0502薄層色譜法操作[5]，改進的方法將展開劑改為醋酸乙酯-甲醇-水（10∶2∶1.5）。

2 結(jié)果

2.1 兩種方法薄層層析結(jié)果比較

兩種方法在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，供試品均能顯示相同顏色的熒光斑點（圖1）。

2.2 方法學(xué)考察

2.2.1 專屬性考察

供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯示相同顏色的熒光斑點，而陰性樣品在與對照品色譜相應(yīng)的位置上不顯示相同顏色的熒光斑點，說明該方法專屬性好，且對陰性樣品無干擾（圖2）。

2.2.2 耐用性考察

1）不同濕度考察 取點樣后的薄層板，分別放置于濕度32%和72%的展開缸中展開，結(jié)果顯示，改進后的方法能使供試品在不同相對濕度環(huán)境下有較好的分離度，說明該方法對濕度的改變有較好的適應(yīng)性（圖3）。

2）不同溫度考察 將點樣后的薄層板分別放置于冰箱（0～4 ℃）和室溫（25 ℃）下展開，結(jié)果顯示，改進后的方法能使供試品在不同溫度下有較好的分離度，說明該方法對溫度的改變有較好的適用性（圖4）。

3）不同點樣量考察 分別取相同批號供試品5、10、15 ml點樣，置于展開缸中展開，結(jié)果顯示，改進后的方法能使不同點樣量的供試品有較好的分離度，說明該方法適用于點樣量的變化（圖5）。

2.2.3 重復(fù)性考察

取三批不同批次復(fù)方玉芩膠囊，制備供試品溶液，進行薄層層析。結(jié)果顯示，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，均顯示橙皮苷的特征斑點，且對陰性樣品無干擾。表明此方法的重復(fù)性良好（圖6）。

上述結(jié)果表明，改進的新方法能夠用于復(fù)方玉芩膠囊中橙皮苷薄層色譜的鑒別，分離度好，斑點清晰，且經(jīng)過了方法學(xué)驗證。

3 討論

本制劑為醫(yī)院復(fù)方制劑，通過多次試驗篩選出了供試品溶液制備方法和薄層色譜展開條件；原標準供試品溶液的制備需要甲醇加熱回流，得到的供試品溶液點樣薄層層析后得到的圖譜分離度較差，斑點不清晰；而本研究建立的方法通過超聲提取制備供試品溶液，比加熱回流簡單方便，易于操作。

本研究考察了五種展開劑，分別為氯仿-丙酮-甲醇（5∶1∶1）、醋酸乙酯-甲醇-水（10∶2∶1.5）、醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10∶6∶2∶1）、氯仿-甲醇-水（7∶2∶1）、環(huán)己烷-醋酸乙酯-冰醋酸（4∶1∶0.1）[6-8]，發(fā)現(xiàn)其中以醋酸乙酯-甲醇-水（10∶2∶1.5）為展開劑時展開效果最好，分離度好且斑點清晰。相比于原標準方法中的展開劑，改進后的展開劑無甲苯，減少了對操作人員的傷害及對環(huán)境無污染，展開條件簡單，易于操作[9-10]，有一定的實用性，可為復(fù)方玉芩膠囊的質(zhì)量控制提供參考。

參考文獻

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