錢 峰

（江蘇省泰興市黃橋鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，江蘇泰興 225417）

仔豬腹瀉在獸醫(yī)臨床上屬常見病、多發(fā)病，是引起仔豬死亡的主要原因之一。

近十年來(lái)，本地區(qū)的仔豬腹瀉病普遍發(fā)生，且呈地方流行，廣大獸醫(yī)同仁一直與其作出艱苦卓絕的斗爭(zhēng)；然而隨著品種的不斷改良、飼養(yǎng)方式的日趨改進(jìn)、耐藥菌株的不斷增多等，該病的病死率一直居高不下且呈逐年上升的態(tài)勢(shì)，防控形勢(shì)愈來(lái)愈嚴(yán)峻。

本病的發(fā)病范圍不斷增廣、發(fā)病率不斷升高、病死率逐漸上升，已逐漸由條件性致病變成一種新的背景性常發(fā)病和多發(fā)病。隨著抗菌藥物的不斷應(yīng)用，細(xì)菌中的耐藥菌株數(shù)量也在不斷的增加，目前，耐藥性的問(wèn)題已非常嚴(yán)重，應(yīng)用常規(guī)藥物和常規(guī)方法防治豬大腸桿菌病的難度越來(lái)越大。

引起豬大腸桿菌病的大腸桿菌經(jīng)典的血清型主要是K88、K99和987P三種血清型。但由于大腸桿菌的腸毒素才是大腸桿菌引起人類和動(dòng)物腹瀉的最主要因素，腸毒素質(zhì)粒和耐藥性質(zhì)粒能經(jīng)結(jié)合配對(duì)傳遞給其他腸道細(xì)菌，使這些細(xì)菌成為能產(chǎn)腸毒素并具有耐藥性的致病菌，也就是說(shuō)，腸毒素質(zhì)粒和耐藥性質(zhì)能經(jīng)結(jié)合配對(duì)后，便可傳遞給其他菌毛血清型的大腸桿菌甚至傳遞給其他非大腸桿菌腸道細(xì)菌?？梢哉f(shuō)，如今的病原性大腸桿菌的血清型越來(lái)越復(fù)雜，不同地區(qū)有不同的血清型甚至不同豬場(chǎng)都有可能有不同血清型。因此，大腸桿菌病已經(jīng)成為危害養(yǎng)豬業(yè)的重要疾病之一。

1 臨床癥狀、病理變化及發(fā)病機(jī)理

1.1 臨床癥狀

病豬精神沉郁、消瘦，被毛粗亂，嚴(yán)重拉稀、喜飲水，尤其喜舔食糞便污水；糞便含有未消化的食糜，呈灰色漿狀、發(fā)粘帶有腥臭味。體溫正常，尸體外表蒼白、消瘦、脫水。腸胃粘膜充血，內(nèi)含多量液體、氣體。眼角有膿性分泌物。病初表現(xiàn)便秘，后腹瀉呈淡綠色，有惡臭味，一周后豬耳末端、頸部出現(xiàn)紫斑。

臨床上以排灰白色粥樣稀便為主要特征，發(fā)病率高而致死率低。病原尚不完全肯定。豬腸道菌群失調(diào)、大腸桿菌過(guò)量繁殖是本病的重要病因。江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)證實(shí)豬輪狀病毒是仔豬白痢的病因之一。氣候變化、飼養(yǎng)管理不當(dāng)是本病發(fā)生的誘因。近年來(lái)本病又有新的流行特點(diǎn)，首先發(fā)病日齡不斷增加，據(jù)各地反饋情況40～50kg的豬都有水腫病的發(fā)生；其次吃的越多、長(zhǎng)的越壯的豬發(fā)病率和死亡率越高。從病豬分離到的大腸桿菌有溶血性或非溶血性兩類，其 O 抗原型因不同地域和時(shí)期而有變化。但在同一地點(diǎn)的同一流行中，常限于 1～2 個(gè)型。多數(shù)病原菌株都有菌毛吸著因子并產(chǎn)生腸毒素，已知吸著因子（也稱粘著因子）有K88、K99、987P、F41 四種，且各具獨(dú)特的抗原性。腸毒素以熱敏腸毒素 LT 為主。這是大腸桿菌引起仔豬黃痢的兩個(gè)主要原因素。神精癥狀：盲目行走或轉(zhuǎn)圈，共濟(jì)失調(diào)，口吐白沫，叫聲嘶啞，進(jìn)而倒地抽搐，四肢呈游泳狀，逐漸發(fā)生后軀麻痹，臥地不起，在昏迷狀態(tài)中死亡。體溫在病初可能升高，很快降至常溫或偏低。水腫眼臉或結(jié)膜及其它部位水腫，病程數(shù)小時(shí)至 1～2潛伏期短，一般在 24h左右，長(zhǎng)的也僅有1～3d，個(gè)別病例到7日齡左右發(fā)病。窩內(nèi)發(fā)生第一頭病豬，一兩天內(nèi)同窩豬相繼發(fā)病。最初為突然腹瀉，排出稀薄如水樣糞便，黃至灰黃色，混有小氣泡并帶腥臭，隨后腹瀉愈加嚴(yán)重，數(shù)分鐘即瀉1次。病豬口渴、脫水，但無(wú)嘔吐現(xiàn)象，最后昏迷死亡。

1.2 病理變化

尸體脫水表現(xiàn)皮服干燥、皺縮，口腔粘膜蒼白。最顯著的病變?yōu)槟c道的急性卡他性炎癥，其中以十二指腸最為嚴(yán)重。全身多處主織水腫，特別是胃壁粘膜水腫是本病的特征。胃壁粘膜水腫多見于胃大彎和賁門部。水腫發(fā)生在胃的肌肉和粘膜層間，切面流出無(wú)色或混有血液而呈茶色的滲出液，或呈膠凍狀。水腫部分的厚度不一致，薄者僅能察見，厚者可達(dá)3cm左右，面積3.3cm2至9.9～13.2cm2。大腸腸系膜水腫，結(jié)腸腸系膜膠凍狀水腫亦很常見。此外，大腸壁、全身淋巴結(jié)、眼瞼和頭頸部皮下亦有不同程度的水腫。除了水腫的病變外，胃底和小腸粘膜、淋巴結(jié)等有不同程度的充血。心包、胸腔和腹腔有程度不等的積液。剖檢常有腸炎和敗血癥，有的無(wú)明顯病理變化。

共剖檢15kg左右病死豬2頭，病變基本一致，均見脾臟腫大，紫藍(lán)色，腸系膜淋巴結(jié)腫大，切面呈灰白色腦髓樣；大腸的后段黏膜上有棕褐色的大小不等的壞死性假膜覆蓋，撕開假膜，可見潰瘍；另有一只肝上可見散布的點(diǎn)狀壞死灶。其它臟器未見異常。

1.3 發(fā)病機(jī)理

現(xiàn)代的研究揭示了大腸桿菌致病的本質(zhì)是由于多種毒力因子引起的不同的病理過(guò)程。

（1）內(nèi)毒素：大腸桿菌內(nèi)毒素是大腸桿菌外膜中含有的脂多糖，當(dāng)菌體崩解時(shí)被釋放出來(lái)，其中的類脂A成份具有內(nèi)毒素的生物學(xué)功能，是一種毒力因子，在敗血癥中作用尢為明顯。

（2）外毒素：大腸桿菌外毒素分兩大類，第一類為不耐熱腸毒素（LT）和耐熱腸毒素（ST）。LT有抗原性，分子量大，60℃經(jīng)10min破壞，可激活腸毛細(xì)血管上皮細(xì)胞的腺苷環(huán)化酶。增加環(huán)腺苷酸（cAMP）產(chǎn)生，使腸粘膜細(xì)胞分泌亢進(jìn)，發(fā)生腹瀉和脫水；而ST可激活回腸上皮細(xì)胞刷絨毛上的顆粒性的鳥苷環(huán)化酶，增加cGMP產(chǎn)生，同樣引起分泌性腹瀉。

（3）細(xì)胞毒素：SLT有3型：SLT-ⅠSLT-Ⅱ及SLT-Ⅳ，目前研究發(fā)現(xiàn)SLT-Ⅱ使豬產(chǎn)生水腫病的臨床癥狀和病理變化。除此之外據(jù)有致病性的因子還有定植因子、直接侵襲性、大腸桿菌素。

臨床上對(duì)該病的治療通常使用抗生素，而常見病原菌耐藥菌的傳播又使很多抗生素在治療相關(guān)性疾病時(shí)效果不明顯，常引發(fā)人們過(guò)量用藥的錯(cuò)誤治療行為，致使細(xì)菌耐藥性增強(qiáng)或變異菌株的大量出現(xiàn)而加重了病原耐藥菌的傳播，對(duì)畜牧業(yè)生產(chǎn)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失以及嚴(yán)重威脅著人們的身體健康。因此研制中草藥有效組方防治該病并推廣應(yīng)用勢(shì)在必行。

2 具體研究?jī)?nèi)容和重點(diǎn)解決的關(guān)鍵問(wèn)題

中草藥制劑具有抗菌、抗病毒、抗毒素、免疫調(diào)節(jié)和提高生產(chǎn)性能等多方面作用之優(yōu)勢(shì)能與抗生素媲美，在畜牧業(yè)中作為抗生素的替代品，在營(yíng)養(yǎng)、保健、提高免疫力、抗應(yīng)激、抗氧化、和改善畜產(chǎn)品品質(zhì)等多方面的應(yīng)用已越來(lái)越受到人們的重視。目前最大程度地減少抗生素的耐藥性已成為保證抗生素能夠在人和動(dòng)物疾病防治方面長(zhǎng)期有效使用的首要問(wèn)題。

2.1 主要研究?jī)?nèi)容：

（1）研發(fā)實(shí)施防治仔豬腹瀉病的中藥制劑，焦山楂20g、焦六曲20g、牡蠣30g、半支蓮30g、垂盆草30g、雞骨草10g、黃芪50g、白芍30g、熟地30g、甘草15g、茵陳20g、薏苡仁15g、陳皮20g，篩選、確定了該病的中藥組方，利用該組方粉劑對(duì)小白鼠腹瀉模型進(jìn)行治療性試驗(yàn)。

（2）應(yīng)用豬致病性大腸桿菌四聯(lián)苗免疫蛋雞，制備成卵黃免疫球蛋白粉劑。用于仔豬腹瀉病的緊急治療。

（3）通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)，確定中藥粉與卵黃免疫球蛋白的最佳配比，制備了中草藥免疫球蛋白復(fù)合制劑與口服水劑。

（4）通過(guò)不同配比中藥粉與免疫球蛋白復(fù)合制劑體外抑菌試驗(yàn)，確定了免疫球蛋白中藥復(fù)合制劑的生產(chǎn)工藝與技術(shù)參數(shù)。

2.2 關(guān)鍵技術(shù)問(wèn)題：

（1）中藥提取工藝、特異性免疫球蛋白及其復(fù)合制劑產(chǎn)品配方與制備方法；

（2）中藥免疫球蛋白制備技術(shù)與生產(chǎn)工藝。

3 研究試驗(yàn)方法、技術(shù)路線以及工藝流程

3.1 研究試驗(yàn)方法

（1）篩選、確定治療仔豬腹瀉病的中藥組方，利用超聲波技術(shù)，提取板藍(lán)根等中藥中的有效成分，合并濾液，濃縮至原液濃度為1g/mL，采用間隙滅菌法，經(jīng)過(guò)真空冷凍干燥機(jī)，對(duì)中藥成分進(jìn)行粉碎、混合、攪拌、濃縮、提取，制備了仔豬腹瀉病中藥粉劑。樣品配比分別為1：1，1：0.8。

（2）應(yīng)用豬致病性大腸桿菌K88，K99，987P，F(xiàn)41疫苗免疫蛋雞，實(shí)現(xiàn)主動(dòng)免疫與被動(dòng)免疫相結(jié)合，3次免疫后，收集高免蛋，分離出卵黃，通過(guò)鹽析、沉淀、超濾等方法制備高純度的卵黃免疫球蛋白，采用平板式膜超濾技術(shù)與真空冷凍干燥工藝對(duì)卵黃中的免疫球蛋白進(jìn)行分離、純化，制備成免疫球蛋白粉劑。

（3）通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)，確定中藥粉與卵黃免疫球蛋白的最佳配比，制備中草藥免疫球蛋白復(fù)合制劑與口服水劑。

3.2 技術(shù)路線及工藝流程

4 制備技術(shù)的特色與創(chuàng)新之處

4.1 技術(shù)特色

首次利用超聲波技術(shù)結(jié)合水稀釋法提取豬抗大腸桿菌病特異性高免免疫球蛋白，并通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)確定了最佳配比，利用超聲波提取板藍(lán)根等中藥中的有效成分后與特異性高免免疫球蛋白組合，制成中藥免疫球蛋白不同制劑。

4.2 創(chuàng)新之處

（1）通過(guò)對(duì)生產(chǎn)條件和技術(shù)水平的進(jìn)一步優(yōu)化，確定了免疫球蛋白中藥復(fù)合制劑的生產(chǎn)工藝與技術(shù)參數(shù)，擴(kuò)大使用范圍，提高生產(chǎn)效益。

（2）通過(guò)與相關(guān)高校、科研院所、企業(yè)聯(lián)合研制兩種以上制劑工藝，研制工藝穩(wěn)定、質(zhì)量可控的新型制劑。是一種創(chuàng)新之舉。

（3）加深與養(yǎng)殖企業(yè)的交流與合作，擴(kuò)大企業(yè)應(yīng)用范圍，驗(yàn)證2種藥物制劑的臨床使用情況，為新藥申報(bào)提供詳實(shí)可靠的理論據(jù)。

（4）以鄉(xiāng)鎮(zhèn)獸醫(yī)站為依托，利用科普叢書、用戶手冊(cè)、學(xué)術(shù)論文、專利技術(shù)等向養(yǎng)殖戶傳遞科研動(dòng)態(tài)和相關(guān)信息，為產(chǎn)品推廣作準(zhǔn)備。

4.3 該復(fù)合制劑對(duì)仔豬腹瀉病的治愈率提高到95%以上；抗病能力顯著提高，促進(jìn)生長(zhǎng)3%以上。與傳統(tǒng)產(chǎn)品相比，達(dá)到節(jié)材20%以上，達(dá)到節(jié)能15%以上。（表1）

5 小結(jié)與討論

本技術(shù)方案打破了傳統(tǒng)的以痢治痢的治療方法，通過(guò)提高脾胃的運(yùn)化功能達(dá)到燥濕、健脾、保肝、潤(rùn)腸的功能，對(duì)腸粘膜有收斂和吸附作用，從而有效地保護(hù)消化道粘膜減少細(xì)菌毒素及食物異常發(fā)酵的產(chǎn)物，使炎癥得以緩解，達(dá)到清熱解毒、開胃消積、祛濕健脾、保肝止瀉的目的。充分體現(xiàn)了中醫(yī)藥的整體觀念和優(yōu)勢(shì)，使藥效和功能更為全面而標(biāo)本兼治，從而拓開了中醫(yī)藥辯癥施治的具體內(nèi)容和應(yīng)用范圍。

表1 本產(chǎn)品與國(guó)內(nèi)外同類產(chǎn)品的比較

仔豬消化道未發(fā)育成熟，消化機(jī)能不健全、消化腺不發(fā)達(dá)，體溫調(diào)節(jié)及應(yīng)急能力差；飼養(yǎng)管理粗放、圈舍骯臟潮濕導(dǎo)致仔豬消化機(jī)能紊亂是引發(fā)本病的主要原因。病豬喜舔食糞便污水，致使病原體在整個(gè)消化道形成惡性循環(huán)因此必須清理胃腸，增強(qiáng)胃腸蠕動(dòng)，改善消化道環(huán)境。

中藥在我國(guó)資源豐富，應(yīng)用歷史悠久，價(jià)格低廉，并具有抗菌、抗病毒、抗毒素、免疫調(diào)節(jié)和提高生產(chǎn)性能等多方面作用，且毒副作用小，在治療仔豬腹瀉方面，以其多方面作用之優(yōu)勢(shì)能與抗生素媲美，它一般不受大腸桿菌血清型的影響，不存在耐藥性問(wèn)題。在畜牧業(yè)生產(chǎn)中作為抗生素的替代品，在營(yíng)養(yǎng)、保健、提高免疫力、抗應(yīng)激、抗氧化和改善畜產(chǎn)品品質(zhì)等多方面的應(yīng)用已越來(lái)越受到人們的重視。而傳統(tǒng)的對(duì)仔豬進(jìn)行抓捕注射，不僅勞動(dòng)強(qiáng)度大，還易對(duì)病豬造成各種應(yīng)激反應(yīng)；中藥喂服投藥簡(jiǎn)便省工、安全實(shí)惠、療程短、療效高、保護(hù)率高、克服了打針灌藥的困難，易于在生產(chǎn)中推廣。