韓 婷，胡 雨，許鳳清，金傳山*

(1.安徽中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院，安徽 合肥 230031；2.安徽中醫(yī)藥大學 藥學院，安徽 合肥 230012)

白芍始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，為毛茛科植物芍藥(PaeoniaelactifloraPall) 的干燥根，具有平肝止痛、養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、斂陰止汗的功效[1]。白芍主產(chǎn)于我國四川、貴州、安徽、山東、浙江等省[2]，據(jù)《中國中藥區(qū)劃》一書記載，主產(chǎn)于亳州沿渦河兩岸潮沙土一帶的芍藥稱“亳白芍”。 藥材中富含以芍藥苷、氧化芍藥苷、苯甲酰芍藥苷、芍藥苷等為主的蒎烷型單萜及其苷類化合物，其內(nèi)在質(zhì)量的優(yōu)劣亦是以該類成分含量的多寡為評價依據(jù)[3-8]。白芍傳統(tǒng)以質(zhì)堅實、粗肥勻、粉性足者為佳[9-10]?！胺坌浴弊鳛榘咨滞庥^性狀，未見相關(guān)研究。研究白芍淀粉含量與質(zhì)量之間的相關(guān)性，將在一定程度上揭示白芍“粉性”描述的科學內(nèi)涵。本文建立了高氯酸水解-蒽酮法測定亳白芍淀粉的含量，并對7月-11月時間段內(nèi)采收的亳白芍中淀粉含量進行測定。

1 儀器與材料

UV759CRT紫外可見分光光度計(上海佑科儀器儀表有限公司)；Centrifuge 5810R離心機；MiLLi-QAdvantage 超純水機(美國 MiLLipore 公司)；HL-200A型打粉機(上海塞耐機械有限公司)；淀粉對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號140602-200313)；蒽酮試劑(實驗室現(xiàn)配)，乙醇，高氯酸分析純，水為超純水。

白芍藥材于2015年7月-11月采于安徽亳州市譙城區(qū)十九里鎮(zhèn)，經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學彭華勝教授鑒定為毛茛科植物芍藥P.lactifloraPall.的干燥根。標本存放于安徽中醫(yī)藥大學炮制研究室，標本號為BS2015YP-1～ BS2015YP-10。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液制備

取淀粉對照品適量，精密稱定。置于50 mL 燒杯中，加入2.5 mL水和32.5 mL 50 % 高氯酸溶液，攪拌至完全溶解，轉(zhuǎn)移至容量瓶中，加水定容至50 mL。精密吸取上述溶液1 mL，加水定容至50 mL，得到濃度為41.84 μg/mL的淀粉對照品溶液。

2.2 供試品溶液制備[11]

取亳白芍藥材粉末0.1 g，精密稱定。置于50 mL 離心管中，加入80%乙醇潤濕藥材粉末，加5 mL水，搖勻；續(xù)加80% 乙醇(25 mL)，震蕩混勻后，靜置5 min，3 000 rpm 離心5 min，傾出上清液。殘渣加30 mL 80% 乙醇溶液重復上述操作1次。沉淀中加入17.5 mL的水-50% HClO4(1∶6，v/v)，震蕩10 min，靜置，以3 000 rpm離心10 min，上清液轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中；殘渣用17.5 mL 50% HClO4溶液按上述操作提取1次。合并兩次提取液，加水定容、過濾，棄去5 mL 初濾液。精密吸取2 mL 濾液轉(zhuǎn)移至100 mL 容量瓶中，加水定容，得到供試品溶液。

2.3 最大吸收波長的確定

精密吸取淀粉標準溶液及隨機供試品溶液2 mL，分別置于10 mL具塞試管中，加入6 mL 蒽酮-硫酸溶液，搖勻，冰水中冷卻3 min，沸水浴5 min，取出，冷卻至室溫。用2 mL 蒸餾水同法制得空白液，記錄紫外-可見分光光度儀400～800 nm波長范圍內(nèi)吸收曲線。結(jié)果表明，對照品及供試品溶液在455 nm處均有最大吸收。

2.4 方法學考察

2.4.1 線性關(guān)系考察 精密吸取0.4 、0.6 、0.8 、1.0 、1.2、 1.4、1.6 mL 淀粉標準溶液，置于10 mL 潔凈具塞試管中，加水調(diào)整各試管溶液均為 2.0 mL，按“2.3”項下方法，在455 nm 波長處測定吸光度。以淀粉質(zhì)量(μg)為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，回歸得線性方程：y=0.007 8x-0.010 4，r= 0.999 5。結(jié)果表明，淀粉在16.736～66.964 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.4.2 精密度試驗 精密吸取淀粉對照品溶液2.0 mL，置于10 mL 潔凈具塞試管中，按“2.3”項下方法，在455 nm 波長處測定吸光度，平行5次，RSD=1.49%(n=5)。結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.4.3 重復性試驗 取亳白芍粉末適量，精密稱取，按照“2.2”項制備供試品溶液，平行5份。分別取制備的樣品溶液2.0 mL，測定沸水浴顯色后溶液的吸光度，計算其淀粉含量。測得亳白芍淀粉平均含量為43.35%，RSD=1.79%。結(jié)果表明供試品重現(xiàn)性良好。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗 取沸水浴顯色后的同一樣品溶液，分別在0、20 、40、60 、80 、100 min后測定吸光度，記錄吸光度值，計算其淀粉含量，其RSD=1.67%。結(jié)果表明樣品常溫放置，100 min內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.5 加樣回收率試驗 稱取已知淀粉含量的同一樣品6份，分別添加適量淀粉對照品，按“2.2”項下制備進行處理并進行含量測定，計算加樣回收率，結(jié)果見表1。加樣回收率在99.10%～102.14%之間，平均回收率為100.33%，符合含量測定的要求。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果

2.5 樣品測定

按照上述方法，測定樣品溶液的吸光度。計算公式：淀粉(%)={M淀粉/[8M樣品(1-W水分)]}%，其中M淀粉是由亳白芍樣品溶液的吸光度經(jīng)過線性公式計算出來的質(zhì)量，單位是μg；M樣品為稱樣量，單位是g；W水分為樣品含水量。分別測定不同采收期亳白芍樣品中淀粉的質(zhì)量分數(shù)，結(jié)果見表2和圖1。結(jié)果表明亳白芍藥材的采收期不同，其淀粉含量相差較大。亳白芍中淀粉的含量在7月下旬至11月上旬之間呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，在9月中旬至10月上旬淀粉含量較高且穩(wěn)定。

表2 不同采收期亳白芍樣品淀粉含量測定結(jié)果 (n=3)

圖1 淀粉含量與采收期關(guān)系

3 討論

研究采用高氯酸水解-蒽酮法對白芍傳統(tǒng)的采收時間內(nèi)，各采收時間點的亳白芍藥材中淀粉的含量進行測定，結(jié)果表明亳白芍淀粉的含量在7月下旬至11月上旬之間呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，在9月中旬至10月上旬淀粉含量較高且穩(wěn)定，與白芍傳統(tǒng)的采收季節(jié)多為農(nóng)歷的8月中旬至9月中旬相一致[12]。對亳白芍不同采收期芍藥苷與白芍總苷的含量變化考察時亦發(fā)現(xiàn)該時間段內(nèi)亳白芍的有效成分的含量處于相對穩(wěn)定的狀態(tài)[13-14]。

傳統(tǒng)上白芍以“粉性足、質(zhì)堅體沉”為優(yōu)。借鑒《76種藥材商品規(guī)格標準》，本試驗結(jié)合藥材的外觀性狀，得出淀粉含量高低與白芍藥材的表面粗糙程度，即藥材的表面越糙，其粉性小，淀粉含量也低，反之亦然。由此可見白芍藥材表面粗糙程度與淀粉含量的高低直接相關(guān)。因此，淀粉含量可以作為白芍“辨狀論質(zhì)”或分級的內(nèi)控指標之一。至于“粉性足”與其藥材質(zhì)量間的科學內(nèi)涵有待更為深入的探討。