張巍

（哈藥集團三精制藥有限公司，黑龍江 哈爾濱150069）

1 使用試劑和儀器

儀器為島津20A 高效液相色譜儀。

試劑磷酸為分析純，甲醇色譜純。

對照品為黃芩苷（批號：110715-201821，中國藥品生物制品檢定所，含量95.4%）。

清熱解毒口服液（自制）。

2 測定方法和結果

2.1 色譜條件（高效液相）

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18（250×4.6mm，5μm）為色譜柱。

流動相：甲醇- 水- 磷酸（50：50：0.3）。

276nm 為測定波長。

流速為0.8 mL/min。

進樣量為10μL。

2.2 對照品溶液的配制

取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加70%甲醇適量溶解后，用70%甲醇稀釋制成每ml 約含20μg 的溶液，即得對照品溶液。

2.3 供試品溶液的配制

精密量取本品2ml，放置100ml 容量瓶中，加70%甲醇適量，超聲20 分鐘，放冷，用70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，放置，用0.45 微米濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.4 線性關系考察試驗

對照品溶液的配制：稱取約10mg 黃芩苷對照品，置50ml容量瓶，加70%甲醇適量溶解后，用70%甲醇稀釋至刻度。然后置適當?shù)娜萘科恐?，精密量取不同體積對照品溶液，用70%甲醇稀釋制成不同濃度的對照品溶液，采用上述色譜條件，注入液相色譜儀，分別精密量取10μL，并記錄色譜圖。進行線性回歸，并計算R，縱坐標是峰面積（A）為，橫坐標是濃度（C），表1為測定結果。

表1 線性試驗結果

結果表明，黃芩苷在4.0259μg/mL～80.5176μg/mL 范圍內(nèi)有很好的線性關系。

2.5 精密度試驗

取黃芩苷對照品溶液（線性下濃度為20.1294μg/mL）10μL注入液相色譜儀，考察色譜圖峰面積，重復進樣6 次測定，表2為結果。

表2 測定結果（精密度試驗）

結論，相對標準偏差小于2%（測定6 次峰面積），有很好的精密度。

2.6 重現(xiàn)性試驗

采用上述方法，測定一批樣品，在不同實驗室由不同分析人員、不同色譜柱、使用不同儀器，表3 為結果。

表3 測定結果（重現(xiàn)性）

結果表明，RSD 小于2%，本方法重現(xiàn)性較好。

2.7 回收率試驗

對照品貯備液的配制：精密稱定約36mg 黃芩苷對照品，置25ml 容量瓶中，加70%甲醇溶解并稀釋至25ml 容量瓶中。供試品溶液低、中、高濃度：置已精密加入1.0ml 樣品的100ml 容量瓶中，精密量取1.6ml、2.0ml、2.4ml 對照品貯備液各3 份，加70%甲醇適量，超聲20 分鐘，放冷，用70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，放置，用0.45 微米濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；對照品溶液：稱取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加70%甲醇適量溶解并稀釋制成每ml 約含20μg 的溶液，即得；采用上述色譜條件，注入液相色譜儀，峰面積記錄，分別精密量取各10μl 對照品溶液與供試品溶液，計算回收率以色譜圖峰面積按外標法，表4 為測定結果。

表4 測定結果（回收率試驗）

結果表明，各濃度下的平均回收率均在98%～102%之間，回收率的RSD 小于2%，黃芩苷的回收率在98.97%～100.86%之間，該方法測定結果誤差在允許的范圍內(nèi)，比較準確。

2.8 結論

作為本品的含量測定方法經(jīng)驗證表明該方法可以，方法學驗證結果具有良好的精密度、準確度和線性關系。

3 討論

3.1 研究流動相

研究過的流動相有①甲醇- 水- 磷酸（50：50：0.3）[1]；②甲醇- 水- 冰醋酸（50：50：1）[2]；③甲醇- 水- 冰醋酸（46：54：1）[3]；結果發(fā)現(xiàn)以①作為流動相效果最佳。

3.2 試驗比較了不同的甲醇- 水- 磷酸系統(tǒng)，發(fā)現(xiàn)甲醇-水- 磷酸（50：50：0.3）分離效果最好，保留時間適宜。以70%甲醇、乙醇、70%乙醇為溶劑，考察了出峰面積，結果相同條件下70%甲醇最大、乙醇較大、70%乙醇出峰面積最小。是由于黃芩苷在乙醇中的溶解度較差?？梢栽鰪婞S芩苷分離效果通過適當增加水和磷酸的比例后，溶劑改為70%甲醇可以有效地測定黃芩苷含量，該方法可以作為清熱解毒口服液的含量測定方法。