俞淼，王艷平

北京市第一中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100026

結(jié)直腸癌是中國(guó)較常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一[1]，發(fā)病率和病死率呈逐年上升趨勢(shì)。由于結(jié)直腸癌常伴隨腹膜轉(zhuǎn)移，術(shù)后5年生存率不足20%～25%[2]。研究結(jié)直腸癌的發(fā)病機(jī)制對(duì)其深化治療具有重要意義。目前關(guān)于結(jié)直腸癌的發(fā)病機(jī)制闡述并不完全，有研究報(bào)道細(xì)胞凋亡調(diào)控失常是其中重要的分子學(xué)機(jī)制[3]。caspase 3是細(xì)胞凋亡通路中關(guān)鍵酶之一，可抑制細(xì)胞過(guò)度增殖分化，介導(dǎo)其凋亡[4]，關(guān)于caspase 3表達(dá)與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展和預(yù)后的關(guān)系目前仍有爭(zhēng)議[5-6]。酪氨酸激酶2（tyrosine kinase 2，TYK2）是多細(xì)胞表達(dá)的非受體型酪氨酸激酶家族中的一員，參與酪氨酸激酶途徑中多種細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)，其表達(dá)異常可導(dǎo)致正常細(xì)胞因子信號(hào)途徑功能紊亂，介導(dǎo)腫瘤的發(fā)生發(fā)展[7-8]。TYK2與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系鮮有研究報(bào)道，本研究探討caspase 3、TYK2與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展和預(yù)后的關(guān)系，旨在為結(jié)直腸癌的臨床診治提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2016年1月至2018年10月北京市第一中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院收治的結(jié)直腸癌患者的病歷資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合結(jié)直腸癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]，并經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)為結(jié)直腸癌；②年齡≤79歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有其他部位的惡性腫瘤疾??；②具有放化療史、免疫治療史；③結(jié)直腸癌術(shù)后復(fù)發(fā)；④長(zhǎng)期使用糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑；⑤資料缺失，無(wú)法納入統(tǒng)計(jì)分析。根據(jù)納入、排除標(biāo)準(zhǔn)，共納入86例結(jié)直腸癌患者，取其組織標(biāo)本作為結(jié)直腸癌組，選取其中術(shù)后符合要求患者的43例癌旁組織作為對(duì)照組。結(jié)直腸癌組中，男性48例，女性38例；年齡43～78歲，平均（58.3±6.9）歲；體重指數(shù)（22.1±2.3）kg/m2；結(jié)腸癌57例，直腸癌29例；浸潤(rùn)達(dá)肌層41例，未達(dá)肌層45例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移45例；TNM分期：Ⅰ期20例，Ⅱ期37例，Ⅲ期20例，Ⅳ期9例；分化程度：高分化22例，中分化23例，低分化41例。對(duì)照組中，男性26例，女性17例；年齡48～75歲，平均（58.6±5.2）歲；體重指數(shù)（22.4±2.0）kg/m2；結(jié)腸癌30例，直腸癌13例。兩組患者臨床特征比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 免疫組化染色 采用免疫組化PV兩步法：石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，蒸餾水沖洗，磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）浸泡5 min，微波微火抗原修復(fù)3 min，共2次，自然冷卻至室溫，3%過(guò)氧化氫甲醇封閉內(nèi)源性過(guò)氧化酶活性，10 min，PBS沖洗，滴加一抗，4℃冰箱過(guò)夜，PBS沖洗，滴加通用型二抗（PV-6000），37℃溫箱孵育40 min，PBS沖洗，二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，自來(lái)水充分沖洗，蘇木精復(fù)染，酒精脫水，二甲苯透明，樹膠封片，每批染色均設(shè)陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照。

1.2.2 免疫組化結(jié)果判定 caspase 3蛋白陽(yáng)性染色表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)/細(xì)胞膜、TYK2蛋白陽(yáng)性染色表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)。①根據(jù)染色程度評(píng)分：未染色為0分，淡黃色染色為1分，棕黃色染色為2分，褐色、黑色染色為3分。②根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比評(píng)分：≤10%為1分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。染色程度與陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比評(píng)分的乘積＜3分為陰性，≥3分為陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 caspase3、TYK2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率的比較

結(jié)直腸癌組組織中caspase 3蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于對(duì)照組組織，TYK2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于對(duì)照組組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（表1）

表1 兩組組織中caspase 3、TYK2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率的比較[n（%）]

2.2 不同臨床特征的結(jié)直腸癌患者的結(jié)直腸癌組織中caspase3、TYK2蛋白陽(yáng)性表達(dá)情況的比較

不同年齡、性別、TNM分期、分化程度、浸潤(rùn)深度及是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌患者的結(jié)直腸癌組織中caspase 3蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。不同年齡、性別的結(jié)直腸癌患者的結(jié)直腸癌組織中TYK2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期、低分化、浸潤(rùn)深度達(dá)到肌層、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌患者的結(jié)直腸癌組織中TYK2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別高于TNM分期為Ⅰ+Ⅱ期、高+中分化、浸潤(rùn)未達(dá)肌層、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.017、4.015、4.015、4.592，P＜0.05）。（表2）

3 討論

結(jié)直腸癌是威脅中國(guó)人生命健康的常見惡性腫瘤之一，發(fā)病率和病死率較高且呈上升趨勢(shì)。結(jié)直腸癌的生存率較低，早期診斷和治療在結(jié)直腸癌的臨床治療中占有重要地位。確定某些腫瘤相關(guān)因子在結(jié)直腸癌組織中的異常表達(dá)水平對(duì)結(jié)直腸癌的診斷、術(shù)后化療和預(yù)后評(píng)估等均可提供特異性強(qiáng)和靈敏度較高的指導(dǎo)依據(jù)，是結(jié)直腸癌病理學(xué)研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)。

caspase 3是執(zhí)行細(xì)胞凋亡的半胱氨酸蛋白酶家族中的一員，caspase 3作為凋亡信號(hào)通路中最后的執(zhí)行者，大多數(shù)細(xì)胞凋亡途徑均通過(guò)其引發(fā)凋亡指令，其表達(dá)異?？赡芘c多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切[10]。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)肝癌患者的肝癌組織中caspase 3的表達(dá)水平顯著高于癌旁組織，且升高程度與肝癌組織的分化程度密切相關(guān)，高分化者caspase 3表達(dá)水平顯著高于低分化者[11]。還有學(xué)者同樣發(fā)現(xiàn)caspase 3在食管癌患者的食管癌組織中高表達(dá)（相較于癌旁組織）并提出caspase 3的高表達(dá)可作為食管癌發(fā)生和發(fā)展的重要預(yù)后評(píng)估指標(biāo)[12]。但caspase 3表達(dá)水平與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)性的報(bào)道國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)中所得結(jié)論并不一致。有學(xué)者報(bào)道腺瘤中caspase 3的表達(dá)水平顯著高于結(jié)直腸癌組織[13]。但也有學(xué)者報(bào)道結(jié)直腸癌組織中的caspase 3水平顯著高于正常黏膜組織，且以右側(cè)結(jié)腸為代表，其組織中caspase 3的表達(dá)水平還與腫瘤的復(fù)發(fā)有關(guān)[14]。本研究發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌組織中caspase 3蛋白陽(yáng)性表達(dá)率低于癌旁組織，提示caspase 3可介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡，在結(jié)直腸癌早期發(fā)展階段發(fā)揮重要作用。本研究顯示caspase 3在結(jié)直腸癌中陽(yáng)性表達(dá)與患者的年齡、性別、分化程度、臨床分期、浸潤(rùn)深度無(wú)關(guān)，說(shuō)明caspase 3不能作為結(jié)直腸癌進(jìn)展和預(yù)后的評(píng)估指標(biāo)。但也有文獻(xiàn)報(bào)道caspase 3與結(jié)直腸癌的分化程度呈正相關(guān)，結(jié)直腸癌組織分化程度越高，caspase 3表達(dá)水平越高，凋亡活性越強(qiáng)[15]。出現(xiàn)結(jié)果的不一致性可能與樣本量的大小，納入患者的種族、性別、年齡等差異或研究方法不同等有關(guān)。后期需擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步研究caspase 3與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系以明確結(jié)直腸癌的發(fā)展機(jī)制。

表2 不同臨床特征的結(jié)直腸癌患者的結(jié)直腸癌組織中caspase 3、TYK2蛋白陽(yáng)性表達(dá)情況（n=86）

TYK2以信號(hào)傳感器的角色通過(guò)將細(xì)胞外的信號(hào)傳遞到細(xì)胞內(nèi)，參與非受體型酪氨酸激酶家族中調(diào)節(jié)細(xì)胞因子信號(hào)途徑的功能。有學(xué)者報(bào)道敲除TYK2的小鼠雖然有活力且能生育，但其抗擊感染因素和致癌因素的能力降低，缺乏腫瘤監(jiān)視[16]。推測(cè)TYK2介導(dǎo)機(jī)體的炎性反應(yīng)和免疫功能調(diào)節(jié)。大量文獻(xiàn)報(bào)道TYK2具有明顯的腫瘤促進(jìn)作用，TYK2在宮頸癌組織中的表達(dá)水平顯著高于癌旁組織；且在乳腺癌組織中表達(dá)上調(diào)并與乳腺癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[17-20]。本研究結(jié)果顯示，TYK2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于癌旁組織，提示TYK2表達(dá)上調(diào)可能與結(jié)腸癌的發(fā)生有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期、低分化、浸潤(rùn)深度達(dá)到肌層、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌患者的結(jié)直腸癌組織中TYK2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別高于TNM分期為Ⅰ+Ⅱ期、高+中分化、浸潤(rùn)未達(dá)肌層、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。提示TYK2表達(dá)水平可作為結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展和預(yù)后的一個(gè)潛在生物學(xué)指標(biāo)，其表達(dá)水平與結(jié)直腸癌的分化程度密切相關(guān)，TYK2在分化差的結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)顯著高于分化高的結(jié)直腸癌組織。

綜上所述，結(jié)直腸癌組織中TYK2蛋白表達(dá)上調(diào)、caspase 3蛋白表達(dá)下調(diào)，TYK2蛋白與結(jié)直腸癌的發(fā)展有一定的關(guān)系。本研究在既往文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，不僅確定TYK2、caspase 3蛋白表達(dá)水平與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性，還確定二者與結(jié)直腸癌預(yù)后的關(guān)系，深化結(jié)直腸癌的發(fā)病機(jī)制研究，對(duì)結(jié)直腸癌的診治具有重要的指導(dǎo)意義。