呂棟，滕志剛，周云飛，陳芙蓉

開(kāi)封市中心醫(yī)院1泌尿外科，2病理科，河南 開(kāi)封4750000

腎細(xì)胞癌又稱腎癌，是中國(guó)常見(jiàn)的泌尿生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，男性患者比例多于女性，且發(fā)病率隨著年齡的增長(zhǎng)而升高。腎癌的發(fā)病隱匿且緩慢，約1/3的患者一經(jīng)確診就已處于腎癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移期[1]。在臨床治療中，由于腎癌細(xì)胞對(duì)化療藥物不敏感，因此，手術(shù)治療是目前臨床最有效的治療方案。有研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)生腎癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的術(shù)后患者的預(yù)后差，5年生存率低，僅約9%[2-3]。隨著基因工程技術(shù)的不斷發(fā)展，腫瘤基因靶向治療成為臨床研究領(lǐng)域的焦點(diǎn)。趨化因子受體7（CXC chemokine re-ceptor 7，CXCR7）是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的CXC型趨化因子配體12（C-X-C motif chemokine ligand 12，CXCL12）的新受體，在多種腫瘤的細(xì)胞系中呈高表達(dá)[4]，參與介導(dǎo)細(xì)胞的增殖、凋亡及侵襲等[5-6]。但是，關(guān)于CXCR7在腎癌發(fā)生、發(fā)展中作用的研究少有報(bào)道。本研究旨在探討CXCR7對(duì)人腎癌細(xì)胞增殖、侵襲及凋亡的影響，為腎癌的個(gè)體化治療尋求靶點(diǎn)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

腎癌組織樣本來(lái)源于醫(yī)院腫瘤科，健康腎組織樣本來(lái)源于腎移植科的組織活檢樣本。人腎癌細(xì)胞系A(chǔ)498、786-O、ACHN均購(gòu)自美國(guó)模式培養(yǎng)物集存庫(kù)（American type culture collection，ATCC），RPMI-1640培養(yǎng)基、噻唑藍(lán)（methylthiazolyl tetrazolium，MTT）、二 甲 基 亞 砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）、雙抗（青霉素和鏈霉素）、嘌呤霉素等均購(gòu)于上海生工生物股份有限公司，胎牛血清、膜聯(lián)蛋白V（Annexin V）-異硫氰酸熒光素（fluorescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC）試劑盒均購(gòu)自杭州四季青生物工程材料有限公司，CXCR7、B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2（B cell lymphoma/leukemia-2，Bcl-2）、Bax、cleaved-caspase-3、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）2、MMP9、β-actin等一抗蛋白及蛋白抑制劑，HRP羊抗兔免疫球蛋白G（Immunoglobulin G，IgG）和HRP羊抗鼠IgG二抗蛋白均購(gòu)自美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司；細(xì)胞裂解液、電化學(xué)發(fā)光（electrochemiluminescence，ECL）試劑均購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司，CXCR7陰性對(duì)照病毒（CXCR7-NC）、CXCR7靶向shRNA均購(gòu)自上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司，其他試劑及耗材均購(gòu)自上海生工生物股份有限公司。二氧化碳（carbon dioxide，CO2）培養(yǎng)箱購(gòu)自日本SANYO公司，DNM-9606酶標(biāo)分析儀購(gòu)自北京朗普新技術(shù)有限公司，濕轉(zhuǎn)儀購(gòu)自美國(guó)AB公司，F(xiàn)ACSCalibur流式細(xì)胞儀購(gòu)自美國(guó)BD公司，凝膠成像系統(tǒng)購(gòu)自以色列DNR公司，電泳儀購(gòu)自美國(guó)BIO-RAD公司，其他儀器購(gòu)自德國(guó)Eppendorf公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 人腎癌細(xì)胞系A(chǔ)498、786-O、ACHN均培養(yǎng)于含10%（v/v）胎牛血清和雙抗（100 mg/L青霉素、100 mg/L鏈霉素）的RPMI-1640培養(yǎng)基，CO2濃度為5%，培養(yǎng)于37℃恒溫、恒濕的細(xì)胞培養(yǎng)箱中。細(xì)胞復(fù)蘇后培養(yǎng)三代后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 CXCR 7蛋白表達(dá)分析 收集處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的腎癌細(xì)胞1×106個(gè)，提取總蛋白，采用酶標(biāo)儀于490 nm波長(zhǎng)條件下進(jìn)行蛋白定量。采用12%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulphate-polyacryl amide gel electrophoresis，SDS-PAGE）分離蛋白，采用濕轉(zhuǎn)法將蛋白轉(zhuǎn)至硝酸纖維素膜上，于4℃條件下依次加入封閉液孵育2 h，CXCR7一抗孵育過(guò)夜（稀釋比例均為1∶1000），二抗孵育2 h（稀釋比例均為1∶5000）。以βactin為內(nèi)參蛋白，采用ECL試劑顯色，通過(guò)凝膠成像系統(tǒng)分析蛋白條帶。篩選CXCR7蛋白高表達(dá)的細(xì)胞系用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 慢病毒轉(zhuǎn)染 取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的CXCR7高表達(dá)的細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×105/ml，每孔2 ml接種于6孔板，37℃、5%CO2條件下，待細(xì)胞生長(zhǎng)覆蓋度達(dá)到50%時(shí)進(jìn)行慢病毒感染，按照試劑操作說(shuō)明書步驟進(jìn)行慢病毒轉(zhuǎn)染操作，sh-NC組加入20 μl CXCR7陰性對(duì)照病毒（滴度為2×108TU/ml）、sh-CXCR7組加入6 μl CXCR7干擾病毒（滴度為9×108TU/ml）以及 2 μl的 polybrene（5 μg/μl），轉(zhuǎn)染過(guò)夜后（約16 h）每天更換新鮮培養(yǎng)基。培養(yǎng)5 d后向培養(yǎng)基中加入終濃度為2 μg/ml的嘌呤霉素進(jìn)行耐藥細(xì)胞株的篩選；對(duì)照組加入20 μl培養(yǎng)基，Western blot鑒定病毒轉(zhuǎn)染效果，將轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.4 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線測(cè)定 取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的sh-NC組、sh-CXCR7組和對(duì)照組細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×105/ml，每孔200 μl接種于96孔板，37 ℃、5%CO2條件下連續(xù)培養(yǎng)，接種當(dāng)天按0天計(jì)算，每24小時(shí)檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，設(shè)置5個(gè)復(fù)孔。按WST-8試劑盒說(shuō)明，于待測(cè)孔加入10 μlCCK8試劑，繼續(xù)培養(yǎng)3 h，采用酶標(biāo)儀于450 nm波長(zhǎng)下測(cè)定光密度（optical density，OD）值，以WST比色值為縱坐標(biāo)，繪制細(xì)胞96 h的生長(zhǎng)曲線。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.5 侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力 取5μg纖連蛋白，采用移液器將其均勻涂抹于Transwell小室內(nèi)的PVPF聚碳酸濾膜外表面，采用同樣的操作方式涂抹5 μg的matrigel于膜內(nèi)側(cè)表面。調(diào)整細(xì)胞濃度，每室分別接種2×105個(gè)sh-NC組、sh-CXCR7組和對(duì)照組細(xì)胞，設(shè)置3個(gè)復(fù)孔；37℃、5%CO2溫箱中培養(yǎng)4 h。磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）清洗3次，并去除小室內(nèi)側(cè)matrigel基質(zhì)膠和細(xì)胞，用多聚甲醛進(jìn)行固定；400倍顯微視野下隨機(jī)選取10個(gè)視野，于倒置顯微鏡下采用雙盲計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)膜下表面的細(xì)胞數(shù)目平均值。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.6 劃痕遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力 將劃痕實(shí)驗(yàn)插件置于24孔板，取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的目的轉(zhuǎn)染細(xì)胞及對(duì)照細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞個(gè)數(shù)為5×105個(gè)，37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)過(guò)夜（約16 h）。小心移去劃痕實(shí)驗(yàn)插件，用完全培養(yǎng)基潤(rùn)洗3次，加入10 μmol/L絲裂霉素，繼續(xù)培養(yǎng)2 h，更換新鮮完全培養(yǎng)基，顯微鏡下拍照，時(shí)間點(diǎn)為0時(shí)，繼續(xù)培養(yǎng)24 h后拍照分析細(xì)胞的遷移情況。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡 取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為2.5×105/ml，以每孔2.5 ml接種于6孔板，37℃、5%CO2條件下過(guò)夜培養(yǎng)，次日用無(wú)血清培養(yǎng)基誘導(dǎo)24 h。離心收集細(xì)胞于流式上樣管，按照Annexin V-FITC試劑盒說(shuō)明書向每管中依次加入150 μl Annexin V-FITC結(jié)合液，使用3 μl Annexin V-FITC和2 μl碘化丙啶（propidium iodide，PI）染液重懸細(xì)胞，室溫暗室孵育15 min。加PBS至500 μl混勻過(guò)300目篩子，30 min內(nèi)上機(jī)檢測(cè)，Cell Quest軟件檢測(cè)并分析細(xì)胞凋亡情況。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.8 Western blot法檢測(cè)蛋白表達(dá)情況 取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為2.5×105/ml，每孔2.5 ml接種于6孔板，37℃、5%CO2條件下過(guò)夜培養(yǎng)，次日用無(wú)血清培養(yǎng)基誘導(dǎo)24 h。將細(xì)胞收集于1.5 ml離心管，Western blot法提取細(xì)胞蛋白，分析沉默CXCR7蛋白的表達(dá)對(duì)細(xì)胞Bcl-2、Bax、cleavedcaspase-3、VEGF、MMP2、MMP9蛋白表達(dá)的影響，以β-actin為內(nèi)參，應(yīng)用Image J圖像分析軟件對(duì)目的條帶的表達(dá)量進(jìn)行定量分析。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 22.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)或單因素方差分析（one-way ANOVA），當(dāng)組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義時(shí)，進(jìn)一步采用SNK-q法進(jìn)行兩兩比較；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CXCR 7蛋白在腎癌中的表達(dá)情況

CXCR7蛋白在腎癌組織中的表達(dá)水平為（2.27±0.33），高于健康腎組織的（0.92±0.07），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（圖1）。Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，CXCR7蛋白在A498、786-O、ACHN細(xì)胞中均有表達(dá)，在786-O細(xì)胞中的表達(dá)水平相對(duì)較高（圖2），選擇其用于后續(xù)研究CXCR7蛋白對(duì)腎癌細(xì)胞的影響。

圖1 CXCR 7蛋白在腎癌和健康腎組織中的表達(dá)情況

圖2 CXCR 7蛋白在786-O、 A498、ACHN細(xì)胞中的表達(dá)情況

2.2 慢病毒轉(zhuǎn)染對(duì)786-O腎癌細(xì)胞中CXCR 7蛋白表達(dá)的影響

sh-CXCR7組786-O細(xì)胞中CXCR7蛋白的表達(dá)水平為（0.47±0.07），對(duì)照組786-O細(xì)胞中CXCR7蛋白的表達(dá)水平為（2.25±0.17），sh-NC組786-O細(xì)胞中CXCR7蛋白的表達(dá)水平為（2.19±0.15）。sh-CXCR7組786-O細(xì)胞中CXCR7蛋白的表達(dá)水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；sh-NC組與對(duì)照組786-O細(xì)胞中CXCR7蛋白的表達(dá)水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（圖3）

圖3 慢病毒轉(zhuǎn)染對(duì)786-O腎癌細(xì)胞中CXCR 7蛋白表達(dá)的影響

2.3 CXCR 7沉默對(duì)腎癌細(xì)胞增殖的影響

WST-8法分析結(jié)果顯示，慢病毒轉(zhuǎn)染沉默786-O細(xì)胞中CXCR7蛋白的表達(dá)后，sh-CXCR7組786-O細(xì)胞3～5 d時(shí)的增殖能力均低于對(duì)照組和sh-NC組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；sh-NC組786-O細(xì)胞不同時(shí)間的增殖能力與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。對(duì)照組、sh-NC組、sh-CXCR7組3～5 d時(shí)的增殖能力比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表1）

表1 不同組別786-O腎癌細(xì)胞不同時(shí)間增殖能力的比較（±s）

表1 不同組別786-O腎癌細(xì)胞不同時(shí)間增殖能力的比較（±s）

注：a與對(duì)照組比較，P＜0.05；b與sh-NC組比較，P＜0.05

組別對(duì)照組sh-NC組sh-CXCR7組F值P值0.47±0.09 0.47±0.07 0.48±0.07 0.028＞0.05 1.17±0.12 1.16±0.09 1.03±0.10 2.815＞0.05 1.52±0.19 1.50±0.17 1.13±0.12a b 9.112＜0.01 2.71±0.22 2.69±0.23 1.82±0.17a b 29.750＜0.01 2.83±0.25 2.81±0.21 1.93±0.22a b 25.561＜0.01 1 d 2 d 3 d 4 d 5 d

2.4 CXCR 7沉默對(duì)腎癌細(xì)胞凋亡的影響

流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示，經(jīng)過(guò)無(wú)血清培養(yǎng)基誘導(dǎo)后，sh-CXCR7組786-O細(xì)胞的凋亡率為（31.57±0.22）%，對(duì)照組786-O細(xì)胞的凋亡率為（0.25±0.03）%，sh-NC組786-O細(xì)胞的凋亡率為（0.27±0.02）%，3組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=317.533，P＜0.01）。Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，sh-CXCR7組786-O細(xì)胞中Bcl-2的表達(dá)水平低于對(duì)照組和sh-NC組，Bax、cleaved-caspase-3的表達(dá)水平均高于對(duì)照組和sh-NC組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；3組 786-O 細(xì)胞中 Bcl-2、Bax、cleaved-caspase-3表達(dá)水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）（表2）。

2.5 CXCR 7沉默對(duì)腎癌細(xì)胞侵襲、遷移能力的影響

Transwell小室和劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，對(duì)照組、sh-NC組、sh-CXCR7組的侵襲細(xì)胞數(shù)量和劃痕細(xì)胞覆蓋率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。sh-CXCR7組786-O細(xì)胞的侵襲細(xì)胞數(shù)量均少于對(duì)照組和sh-NC組，劃痕細(xì)胞覆蓋率均低于對(duì)照組和sh-NC組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。sh-NC組786-O細(xì)胞的侵襲細(xì)胞數(shù)量、劃痕細(xì)胞覆蓋率與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（表3）。Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，sh-CXCR7組786-O細(xì)胞中MMP2、MMP9、VEGF的表達(dá)水平均低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。sh-NC組與對(duì)照組786-O細(xì)胞中MMP2、MMP9、VEGF的表達(dá)水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（表4）。

表2 不同組別786-O腎癌細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平的比較（± s）

表2 不同組別786-O腎癌細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平的比較（± s）

注：a與對(duì)照組比P＜0.05；b與sh-NC組比較，P＜0.05

cleaved-caspase-3 0.21±0.02 0.24±0.02 1.15±0.16a b 162.178＜0.01 Bcl-2 0.97±0.19 0.92±0.15 0.47±0.09a b 17.054＜0.01 Bax 0.32±0.04 0.34±0.03 1.63±0.12a b 552.386＜0.01組別對(duì)照組sh-NC組sh-CXCR7組F值P值

表3 不同組別腎癌細(xì)胞侵襲細(xì)胞數(shù)量和細(xì)胞覆蓋率的比較（±s）

表3 不同組別腎癌細(xì)胞侵襲細(xì)胞數(shù)量和細(xì)胞覆蓋率的比較（±s）

注：a與對(duì)照組比較，P＜0.05；b與sh-NC組比較，P＜0.05

組別對(duì)照組sh-NC組sh-CXCR7組F值P值侵襲細(xì)胞數(shù)量（個(gè)）87.63±8.67 85.29±7.73 44.32±3.23a b 61.226＜0.01細(xì)胞覆蓋率（%）62.35±3.42 61.89±3.27 35.81±4.33a b 84.152＜0.01

表4 不同組別腎癌細(xì)胞中侵襲和遷移相關(guān)蛋白表達(dá)水平的比較（±s）

表4 不同組別腎癌細(xì)胞中侵襲和遷移相關(guān)蛋白表達(dá)水平的比較（±s）

注：a與對(duì)照組比較，P＜0.05；b與sh-NC組比較，P＜0.05

組別對(duì)照組sh-NC組sh-CXCR7組F值P值MMP2 2.17±0.32 2.15±0.33 0.43±0.12a b 66.309＜0.01 MMP9 2.13±0.16 2.10±0.12 0.31±0.09a b 338.742＜0.01 VEGF 0.93±0.17 0.90±0.13 0.27±0.04a b 48.133＜0.01

3 討論

研究表明，趨化因子CXCR7在免疫細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞及多種腫瘤中呈高表達(dá)[7]，這可能會(huì)促進(jìn)局部組織的血管新生，在腫瘤的增殖和轉(zhuǎn)移過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用[8]。有研究發(fā)現(xiàn)，CXCR7蛋白在肺組織中呈高表達(dá)，且主要存在于腫瘤內(nèi)部的新生血管和腫瘤組織，而在正常的血管組織中未見(jiàn)其表達(dá)水平特異性升高[9]，表明CXCR7蛋白的表達(dá)情況可能與腫瘤細(xì)胞的增殖能力有關(guān)。關(guān)于CXCR7蛋白表達(dá)所激活的信號(hào)通路，研究結(jié)果存在一定差異。在關(guān)于前列腺癌的研究中，CXCR7蛋白可能介導(dǎo)蛋白激酶B（protein kinase B，PKB，也稱AKT）信號(hào)通路參與細(xì)胞調(diào)節(jié)[10]；在關(guān)于肝癌的研究中，CXCR7蛋白更有可能是通過(guò)激活細(xì)胞的促分裂原活化的蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信號(hào)通路參與細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)[11]；在關(guān)于結(jié)腸癌的研究中，CXCR7蛋白可能通過(guò)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）信號(hào)通路傳遞細(xì)胞調(diào)節(jié)信號(hào)[12]。有研究發(fā)現(xiàn)，CXCR7蛋白可能通過(guò)抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，從而促進(jìn)腫瘤血管新生，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移能力[13-15]。

本研究發(fā)現(xiàn)，腎癌組織中CXCR7蛋白的表達(dá)水平高于健康腎組織（P＜0.05），考慮到腫瘤細(xì)胞存在異質(zhì)性，本研究對(duì)常見(jiàn)的腎癌細(xì)胞系A(chǔ)498、786-O、ACHN中CXCR7蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行進(jìn)一步研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CXCR7蛋白在3種細(xì)胞系中均有表達(dá)，其中，在786-O細(xì)胞中的表達(dá)水平較高，因此，本研究選擇786-O細(xì)胞作為研究對(duì)象，通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染構(gòu)建CXCR7細(xì)胞系，研究CXCR7蛋白對(duì)786-O細(xì)胞增殖、侵襲、遷移的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與未經(jīng)慢病毒轉(zhuǎn)染的對(duì)照組相比，經(jīng)慢病毒轉(zhuǎn)染的sh-NC組786-O細(xì)胞中蛋白的表達(dá)水平以及細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移能力比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；WST-8細(xì)胞生長(zhǎng)能力檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組、sh-NC組比較，sh-CXCR7組細(xì)胞的增殖能力降低（P＜0.05）；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組、sh-NG組比較，下調(diào)786-O細(xì)胞中CXCR7蛋白的表達(dá)后，sh-CXCR7組細(xì)胞的凋亡率升高（P＜0.05）；Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，下調(diào)786-O細(xì)胞中CXCR7蛋白的表達(dá)后，sh-CXCR7組細(xì)胞中Bcl-2、MMP2、MMP9和VEGF蛋白的表達(dá)水平均有所降低，而促凋亡蛋白Bax和cleaved-caspase-3的表達(dá)水平有所升高，表明CXCR7蛋白可能是通過(guò)抑制促凋亡蛋白的表達(dá)，抑制細(xì)胞凋亡，從而調(diào)控細(xì)胞的凋亡信號(hào)通路；同時(shí)CXCR7蛋白能夠促進(jìn)VEGF蛋白的表達(dá)，有利于新生血管的形成，增加腫瘤組織的營(yíng)養(yǎng)供給，促進(jìn)細(xì)胞的遷移[16]。

綜上所述，在腎癌組織中，CXCR7蛋白主要通過(guò)上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)，下調(diào)促凋亡蛋白Bax和cleaved-caspase-3的表達(dá)，從而抑制腫瘤細(xì)胞凋亡；同時(shí)上調(diào)腎癌組織中VEGF、MMP2、MMP9的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤內(nèi)部血管形成，從而增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移能力。