叢 叢 張?zhí)N慧 胡 瑩 張嘉鋮

（山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，山東 濟(jì)南 250001）

心肌缺血是指各種原因致使冠狀動脈血流量減少，導(dǎo)致心肌細(xì)胞供血供氧不足，進(jìn)而使心肌代謝紊亂，無法維持正常心功能的一種病理狀態(tài)［1］。當(dāng)心肌缺血后，心肌細(xì)胞會受到不同程度的損傷，長時(shí)間的心肌缺血可能誘發(fā)較嚴(yán)重的心血管疾病，如心力衰竭、心肌梗死等，重者可導(dǎo)致死亡，嚴(yán)重危害著人類的生命健康。在中醫(yī)學(xué)上心肌缺血屬于“真心痛”“胸痹”等范疇，病機(jī)主要是氣血不暢導(dǎo)致心脈瘀阻不通，其中氣虛血瘀是常見的證型之一［2］。臨床治療心肌缺血西醫(yī)以藥物治療為主，主要包括抗心肌缺血藥、他汀類等調(diào)脂藥、抗血小板藥、抗凝藥等。中醫(yī)治療則立足于整體觀念，利用辨證論治、平衡陰陽等治療理念，對疾病進(jìn)行整體調(diào)節(jié)，具有有效改善預(yù)后等優(yōu)勢，中藥方劑對心肌缺血的治療效果也逐漸獲得了臨床肯定［3-4］。本研究通過對腹腔注射異丙腎上腺素（ISO）復(fù)制急性心肌缺血模型大鼠使用心疾寧方干預(yù)，旨在觀察心疾寧方對急性心肌梗死模型大鼠心功能、血流動力學(xué)及氧化應(yīng)激指標(biāo)的影響并探討其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 40只清潔級雄性SD大鼠，7～8周齡，平均體質(zhì)量（250±20）g，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司［SCXK-（京）2010-0015］，合格證號：110011191100312。室溫飼養(yǎng)，自由飲水進(jìn)食，符合《實(shí)驗(yàn)動物管理?xiàng)l例》要求。

1.2 藥物與試劑 心疾寧方組成：生地黃30 g，當(dāng)歸20 g，黃芪15 g，黃芩15 g，人參9 g，丹參15 g，麥冬9 g，甘草3 g。飲片均由本院藥房提供并煎煮，藥材加水煎煮2次，合并藥液。ISO注射液（上海禾豐制藥有限公司生產(chǎn)，批號20190402，規(guī)格2 mL∶1 mg/支）；鹽酸地爾硫片（天津田邊制藥有限公司，批號1807055，規(guī)格30 mg×50）；水合氯醛（分析純，天津市瑞金特化學(xué)品有限公司）；肝素鈉（天津生物化學(xué)制藥有限公司）；蘇木精-伊紅染色液（武漢華美生物工程有限公司）；乳酸脫氫酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）試劑盒均購買自南京建成生物工程研究所。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 BL-420E型心電圖儀（成都泰盟公司）；RM2235型病理切片機(jī)（德國萊卡公司）；TE2000-E倒置顯微鏡（尼康儀器有限公司）；高速低溫離心機(jī)（北京京立離心機(jī)有限公司）；OLYMPUSAU5400全自動生化分析儀（日本奧林巴斯有限公司）；ELx800酶標(biāo)儀（美國伯騰儀器有限公司）。

1.4 分組及給藥 大鼠分對照組10只、手術(shù)組30只，其中手術(shù)組又分模型組、西藥組、聯(lián)合組各10只。對照組和模型組給予0.9%氯化鈉注射液5 mg/kg灌胃；西藥組給予鹽酸地爾硫片5 mg/kg灌胃；聯(lián)合組給予西藥和心疾寧方灌胃，劑量為5 mg/kg。每天灌胃1次，連續(xù)14 d。

1.5 模型制備 自給藥第12日起，除空白組，其余各組大鼠均以5 mg/kg腹腔注射ISO，每天1次，連續(xù)3 d。最后1次腹腔注射結(jié)束，各組大鼠用10%水合氯醛行腹腔注射麻醉，仰位固定四肢，檢查心電圖，以心電圖ST段或T波明顯抬高表示造模成功。

1.6 標(biāo)本采集與檢測 1）心功能及血流動力學(xué)指標(biāo)測定。建模后，采用心導(dǎo)管測定左心室收縮壓（LVSP）、左心室舒張末壓（LVEDP），左房平均壓（mLAP），彩色多普勒超聲心動圖測定HR及血流動力學(xué)的平均二尖瓣壓力差（mMPG）、肺動脈平均壓（mPAP）等指標(biāo)。2）氧化應(yīng)激指標(biāo)測定。建模后，自頸總動脈取血，離心，取上層血清，采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定各組大鼠血清SOD、MDA、GSH-PX水平，嚴(yán)格按說明書操作。3）心肌酶學(xué)指標(biāo)測定。建模后，自頸總動脈取血，離心，取上層血清，采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定各組大鼠血清LDH、CK、CK-MB水平，嚴(yán)格按說明書操作。4）心肌組織病理切片。處死各組大鼠，取同一位置的心室肌組織，固定24 h后，常規(guī)脫水、透明，石蠟包埋，連續(xù)切片，切片間距5 mm，蘇木素-伊紅染色，樹膠封片，采用光學(xué)顯微鏡觀察心肌組織結(jié)構(gòu)變化。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以（）表示，組間或組內(nèi)數(shù)據(jù)比較采用t檢驗(yàn)；采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行計(jì)數(shù)資料的比較，以n（%）表示計(jì)數(shù)資料。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠心肌組織病理學(xué)比較 見圖1。對照組：未見明顯的組織改變，心肌纖維排列整齊，橫紋清晰，細(xì)胞胞漿著色均勻，心肌及內(nèi)膜細(xì)胞連續(xù)完整，胞核致密居中，間質(zhì)無水腫。模型組：心肌纖維腫脹，多處斷裂、壞死甚至融合成片，細(xì)胞胞漿著色不均勻，肌橫紋消失，細(xì)胞核腫脹變圓減少，細(xì)胞空泡變性，心肌細(xì)胞間質(zhì)水腫，有較多的炎性浸潤，心肌微血管瘀血，管腔擴(kuò)大，組織間隙明顯增寬，內(nèi)膜細(xì)胞排列紊亂。西藥組和聯(lián)合組：心肌纖維排列整齊，輕度腫脹，局灶性斷裂，偶見空泡變性，心肌及內(nèi)膜細(xì)胞排列尚完整，偶見炎性細(xì)胞浸潤，呈現(xiàn)非透壁性。

圖1 各組大鼠心肌組織病理學(xué)觀察（HE染色，200倍）

2.2 各組大鼠心功能指標(biāo)比較 見表1。與對照組比較，模型組LVSP明顯降低，HR、LVEDP均明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，西藥組和聯(lián)合組LVSP顯著升高，HR、LVEDP均顯著降低（P＜0.05）；聯(lián)合組各指標(biāo)均明顯優(yōu)于西藥組（P＜0.05）。

2.3 各組大鼠血流動力學(xué)指標(biāo)比較 見表2。與對照組比較，模型組mLAP、mMPG、mPAP均明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，西藥組和聯(lián)合組mLAP、mMPG、mPAP均顯著降低（P＜0.05）；與西藥組比較，聯(lián)合組mLAP、mMPG、mPAP均顯著偏低（P＜0.05）。

表1 各組大鼠心功能指標(biāo)比較（±s）

表1 各組大鼠心功能指標(biāo)比較（±s）

與空白對照組比較，?P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與西藥組比較，△P＜0.05。下同

組別對照組模型組西藥組聯(lián)合組n 10 10 10 10 HR（次/min）321.27±32.13 479.62±24.24*375.78±29.71#330.65±30.66#△LVSP（mmHg）140.74±5.12 92.31±3.26*113.89±4.45#130.58±4.74#△LVEDP（mmHg）8.22±1.25*16.83±2.66*11.68±1.54#9.11±1.47#△

表2 各組大鼠血流動力學(xué)指標(biāo)比較（kPa，±s）

表2 各組大鼠血流動力學(xué)指標(biāo)比較（kPa，±s）

組別對照組模型組西藥組聯(lián)合組n 10 10 10 10 mLAP 1.27±0.13 3.92±0.24*1.78±0.19#1.35±0.16#△mMPG 0.94±0.12 2.31±0.26*1.27±0.15#1.08±0.14#△mPAP 2.22±0.45 6.83±0.66*3.38±0.54#2.81±0.47#△

2.4 各組大鼠氧化應(yīng)激指標(biāo)比較 見表3。與對照組比較，模型組SOD、GSH-PX水平顯著降低，MDA水平顯著升高（P＜0.05）；與模型組比較，西藥組和聯(lián)合組SOD、GSH-PX水平均顯著升高，MDA水平顯著降低（P＜0.05）；聯(lián)合組各指標(biāo)均明顯優(yōu)于西藥組（P＜0.05）。

表3 各組大鼠氧化應(yīng)激指標(biāo)比較（±s）

表3 各組大鼠氧化應(yīng)激指標(biāo)比較（±s）

組別對照組模型組西藥組聯(lián)合組n 10 10 10 10 SOD（U/L）139.41±8.03 74.52±5.28*102.38±6.42#125.77±7.86#△MDA（nmol/L）6.14±0.87 21.64±1.36*9.82±1.23#7.27±1.02#△GSH-PX（μg/L）1.24±0.15 0.47±0.08 0.91±0.13#1.16±0.12#△

2.5 各組大鼠心肌酶學(xué)指標(biāo)比較 見表4。與對照組比較，模型組大鼠血清CK、CK-MB、LDH水平顯著升高（P＜0.05）；與模型組比較，西藥組和聯(lián)合組CK、CKMB、LDH水平均顯著降低（P＜0.05）；聯(lián)合組血清CK、CK-MB、LDH水平均顯著低于西藥組（P＜0.05）。

表4 各組大鼠心肌酶學(xué)指標(biāo)比較（U/mL，±s）

表4 各組大鼠心肌酶學(xué)指標(biāo)比較（U/mL，±s）

組別對照組模型組西藥組聯(lián)合組n 10 10 10 10 LDH 0.29±0.02 0.88±0.21*0.54±0.05#0.37±0.03#△CK-MB 0.28±0.03 1.03±0.16*0.76±0.08#0.51±0.04#△CK 0.76±0.04 2.22±0.15*1.37±0.08#1.03±0.07#△

3 討 論

ISO是人工合成β受體激動藥，能激動心肌細(xì)胞β1受體，使心肌收縮加強(qiáng)、心率加快、心肌耗氧量增加，從而引起冠狀動脈痙攣，導(dǎo)致心肌灌注不足，出現(xiàn)缺血缺氧甚至心肌梗死樣變化［5］。腹腔注射大劑量ISO建成的大鼠急性心肌缺血樣模型，其心電圖、心肌代謝及組織病理學(xué)變化均與人類自然發(fā)生的急性心肌缺血非常接近，且建模不需開胸，成功率高，缺血部位相對較恒定［6-7］。采用腹腔注射ISO法復(fù)制急性心肌缺血大鼠模型是評價(jià)心肌保護(hù)藥的常用模型之一［8］。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為心肌缺血屬“真心痛”“胸痹”等范疇，病機(jī)主要是氣血不暢導(dǎo)致心脈瘀阻不通，因此益氣行氣、活血祛瘀是治療的基本原則［9］。心疾寧方中生地黃清熱涼血、養(yǎng)陰生津，當(dāng)歸、丹參補(bǔ)血活血養(yǎng)血，黃芪、人參補(bǔ)益元?dú)?，黃芩清熱燥濕，麥冬益胃生津，佐甘草以補(bǔ)脾益氣、緩急止痛，達(dá)到補(bǔ)氣行氣、活血化瘀的功效?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明［10-13］，生地黃流浸膏能明顯增強(qiáng)心肌收縮力；當(dāng)歸醇提物有奎尼丁樣作用，且能抗血栓形成，阿魏酸及多種氨基酸可擴(kuò)張血管、減少細(xì)胞凋亡；人參皂苷Re預(yù)處理對急性心肌缺血大鼠的心肌細(xì)胞有保護(hù)作用；丹參可抗血小板聚集、降低血液黏度、改善凝血功能，其有效成分丹參酮ⅡA可減輕缺血再灌注誘導(dǎo)的大鼠心肌細(xì)胞凋亡；黃芪皂苷能抑制心肌細(xì)胞膜Na+-K+-ATP酶，加強(qiáng)心肌收縮力，降低心肌耗氧量，改善心射血功能，并穩(wěn)定細(xì)胞膜，減輕心肌細(xì)胞損傷；麥冬總皂苷可減輕鈣超載，對心肌細(xì)胞缺氧再灌注損傷具有保護(hù)作用；甘草酸具有激素樣作用，能減輕炎癥反應(yīng)。本研究中，與模型組比較，西藥組和聯(lián)合組LVSP顯著升高，HR、LVEDP、mLAP、mMPG、mPAP均顯著降低；聯(lián)合組各指標(biāo)均顯著優(yōu)于西藥組。結(jié)果表明心疾寧方能有效改善急性心肌缺血大鼠的心功能，改善血流動力學(xué)指標(biāo)。

研究表明［14-15］，氧化應(yīng)激反應(yīng)是心肌缺血的重要病理機(jī)制之一。當(dāng)心肌缺血時(shí)，會加快氧化應(yīng)激反應(yīng)，使氧自由基大量堆積，并能引發(fā)炎性反應(yīng)，加重心肌損傷［16-17］，因此有效減少氧自由基，減輕氧化應(yīng)激反應(yīng)是治療急性心肌缺血的重要手段。SOD、GSH-PX作為體內(nèi)重要的抗氧化酶，是氧自由基的自然天敵，能有效清除氧自由基，對抗甚至逆轉(zhuǎn)氧自由基對細(xì)胞的損害，修復(fù)自由基引起的細(xì)胞損傷。有研究表明，SOD能通過磷酸化AKT減弱缺血損傷導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡［18-19］。當(dāng)生物體內(nèi)產(chǎn)生大量的氧自由基時(shí)，會大量消耗SOD和GSH-PX。GSH-PX水平降低；而MDA是由細(xì)胞膜中脂質(zhì)被氧化后形成的，其水平高低直接反映了生物體內(nèi)氧自由基水平以及氧化應(yīng)激反應(yīng)的程度，因此MDA是評估氧化應(yīng)激的重要指標(biāo)［20］。在本研究中，西藥組和聯(lián)合組與模型組相比，SOD、GSH-PX水平均顯著升高、NDA水平均顯著降低；且聯(lián)合組各指標(biāo)均明顯優(yōu)于西藥組。結(jié)果表明心疾寧方能有效清除自由基，降低氧化應(yīng)激反應(yīng)，減輕心肌損傷。

心肌組織中含有多種特異性較高的酶，當(dāng)心肌缺血缺氧時(shí)，因無氧代謝所產(chǎn)生的大量代謝產(chǎn)物如乳酸、氧自由基等，以及心肌內(nèi)鈣超負(fù)荷等原因，使心肌細(xì)胞受損，導(dǎo)致心肌細(xì)胞膜通透性增加或破裂，心肌組織中的特異性酶將會不同程度地釋放入血，引起血清心肌酶升高。其中CK、CK-MB、LDH是診斷心肌損傷程度的標(biāo)志性指標(biāo)［21］。本研究中，與模型組比較，西藥組和聯(lián)合組CK、CK-MB、LDH水平均顯著降低，且聯(lián)合組顯著優(yōu)于西藥組。結(jié)果表明心疾寧方能有效降低血清心肌酶水平，減輕心肌損傷，保護(hù)心肌細(xì)胞。

綜上所述，心疾寧方可有效加強(qiáng)急性心肌缺血大鼠的心功能、改善血流動力學(xué)指標(biāo)、清除氧自由基、減輕氧化應(yīng)激反應(yīng)、降低血清心肌酶水平、保護(hù)心肌組織、減少缺血損傷。