谷仿麗 黃仁術(shù) 何曉梅

摘要?[目的]探究霍山石斛多糖對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠的抗炎作用。[方法]應(yīng)用葡聚糖硫酸鈉建立潰瘍性結(jié)腸炎模型，灌胃給予模型小鼠不同劑量的霍山石斛多糖，觀察霍山石斛多糖對模型小鼠DAI、血清細(xì)胞因子IL-1、TNF-α水平及結(jié)腸病理組織學(xué)的影響，分析霍山石斛對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠的抗炎作用。[結(jié)果]與模型組相比，霍山石斛多糖高、中劑量組顯著降低DAI、血清細(xì)胞因子IL-1、 TNF-α水平（?P?<0.05），改善結(jié)腸病理組織學(xué)。[結(jié)論]霍山石斛多糖通過抗炎治療潰瘍性結(jié)腸炎小鼠。

關(guān)鍵詞?霍山石斛多糖;潰瘍性結(jié)腸炎;小鼠;抗炎

中圖分類號?R285?文獻(xiàn)標(biāo)識碼?A

文章編號?0517-6611（2020）14-0176-02

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2020.14.049

Abstract?[Objective]To study the anti-inflammatory effect of?Dendrobium huoshanense?polysaccharide on ulcerative colitis mice.[Method]The ulcerative colitis model was established by dextran sodium sulfate，and different doses of?Dendrobium huoshanense?polysaccharide were given to the model mice by gavage.The effects of?Dendrobium huoshanense?polysaccharide on Dai，IL-1，TNF-α levels in serum and histopathology of colon were observed，and the anti-inflammatory effects of?Dendrobium huoshanense?on ulcerative colitis mice were analyzed.[Result]Compared with the model group，the levels of Dai，IL-1 and TNF-α in the high and medium dose group were significantly reduced （?P?<0.05），and the histopathology of colon was improved.[Conclusion]Dendrobium huoshanense?polysaccharide has anti-inflammatory effect on ulcerative colitis mice.

Key words?Dendrobium huoshanense?polysaccharide;Ulcerative colitis;Mice;Anti-inflammatory

潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）發(fā)病機(jī)制尚不清楚，多認(rèn)為是腸道感染、自身免疫、遺傳、精神心理等相互作用的結(jié)果[1]。潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病時炎癥因子水平升高，導(dǎo)致結(jié)腸黏膜損傷，甚至糜爛[2];患者表現(xiàn)為腹瀉、腹痛、黏液膿便血、體重減輕等。目前主要通過抗炎促進(jìn)結(jié)腸組織恢復(fù)、增加腸道黏膜免疫力治療潰瘍性結(jié)腸炎[3]。

霍山石斛被譽(yù)為“中華九大仙草之首”，具有益胃生津、滋陰清熱、潤肺止咳、明目強(qiáng)身等功效[4]。現(xiàn)代研究表明，霍山石斛主要含有多糖類物質(zhì)、石斛堿、多種游離氨基酸及豐富的微量元素等成分[5]，具有抗炎、增強(qiáng)免疫、調(diào)節(jié)胃腸道、降血糖、肝保護(hù)等作用[6-7]。因此，筆者研究霍山石斛多糖對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠的抗炎作用。

1?材料與方法

1.1?材料

1.1.1?實(shí)驗(yàn)動物。昆明種健康小鼠，體重（22+2）g，購自安徽醫(yī)科大學(xué)動物研究所動物實(shí)驗(yàn)中心。

1.1.2?儀器設(shè)備。

電子分析天平（鄭州萬博儀器設(shè)備有限公司）;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（R52A，上海亞榮）;Synergy H1 多功能酶標(biāo)儀 （美國佰騰儀器有限公司）。

1.1.3?藥品和試劑。霍山石斛采自皖西學(xué)院石斛種植園;葡聚糖硫酸鈉由美國sigma公司生產(chǎn);柳氮磺砒啶腸溶片由上海信宜天平制藥有限公司生產(chǎn);糞便隱血定性檢測試劑盒（鄰聯(lián)甲苯胺法）由北京雷根生物技術(shù)有限公司生產(chǎn);IL-1、 TNF-α檢測試劑盒由南京建成生物工程研究所生產(chǎn);乙醇、硫酸、蒽酮等均為分析純。

1.2?方法

1.2.1?霍山石斛多糖的制備。

取新鮮的大別山產(chǎn)霍山石斛，除去雜質(zhì)，清水洗凈，50 ℃烘干，粉碎過40目篩，藥粉繼續(xù)烘干至恒重。以料液比1∶30，80 ℃水提3次，每次2 h。合并提取液，減壓濃縮至相對密度1.12。濃縮液中加入95%乙醇，邊加邊攪拌，加至濃縮液的2倍，保鮮膜密封，放置于4?℃冰箱24 h，3 000 r/min離心10 min，取沉淀物去蛋白，纖維柱法分離得霍山石斛多糖，采用蒽酮-硫酸法[8]測定多糖含量。

1.2.2?潰瘍性結(jié)腸炎模型復(fù)制。

取體重相近的健康小鼠60只，雌雄性各半，隨機(jī)分為空白組（10只）和模型組（50只）。正常組小鼠正常攝食、飲水，模型組小鼠自由飲用配制的5%葡聚糖硫酸鈉（dextran sulfate sodium，DDS）水溶液5 d，建成潰瘍性結(jié)腸炎模型[9]。

1.2.3?動物分組與給藥。

將潰瘍性結(jié)腸炎模型小鼠隨機(jī)分為霍山石斛多糖高劑量（200 mg/kg）、中劑量（100 mg/kg）、低劑量（50 mg/kg）組，柳氮磺砒啶（sulfasalazine，SASP）組，模型組。于試驗(yàn)第6天，分別灌胃給予霍山石斛多糖高、中、低劑量組霍山石斛多糖200、100、50 mg/kg，SASP組300 mg/kg，正常組蒸餾水，一天1次，連續(xù)灌胃14 d。

1.2.4?指標(biāo)采集與檢測。

試驗(yàn)期間，分別在造模第5天、給藥7 d、14 d末，檢測試驗(yàn)小鼠體重、大便性狀及便血，并根據(jù)表1評分計(jì)算DAI=（體質(zhì)量下降百分率+大便性狀+便血）/3[10]。給藥第14天各小組實(shí)驗(yàn)鼠末次給藥1 h后，摘眼球取血后即刻頸椎脫臼處死小鼠，解剖，取距肛門8 cm處部分結(jié)腸，用生理鹽水沖洗，除去多余脂肪及附著糞便，觀察結(jié)腸黏膜病變情況，隨后浸泡在10%甲醛溶液中固定，乙醇脫水，石蠟包埋、切片，蘇木精-伊紅染色，顯微鏡下觀察每個結(jié)腸組織狀況。血液離心后取血清，ELISA法檢測白介素-1（Interleukin-1beta，IL-1）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-alph，TNF-α）水平。

1.3?數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析?所有數(shù)據(jù)采用SPSS 23進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間比較?采用t檢驗(yàn)，P?<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2?結(jié)果與分析

2.1?霍山石斛多糖對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠DAI的影響

模型組小鼠自由飲用葡聚糖硫酸鈉水溶液5 d后，出現(xiàn)了明顯的潰瘍性結(jié)腸炎癥狀，黏液膿血便、身體時而蜷曲狀、體重下降、精神不佳;持續(xù)灌胃給藥14 d 后，各給藥組與模型組比較，癥狀明顯改善，體重增長，大便性狀趨于正常。從圖1可看出，小鼠造模5 d，DAI評分顯著升高（?P?<0.01）;給藥7 d，霍山石斛多糖高、中劑量組DAI顯著降低（?P?<0.05），低劑量組有降低趨勢，但不明顯（?P?>0.05）;給藥14 d，霍山石斛高、中、低劑量組均顯著降低DAI評分，與SASP組相當(dāng);表明霍山石斛多糖具有改善潰瘍性結(jié)腸炎小鼠一般癥狀的作用。

2.2?霍山石斛多糖對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠細(xì)胞因子IL-1、TNF-α水平的影響

從表2可以看出，與正常組比較，模型組血清IL-1、TNF-α水平顯著升高（?P

2.3?結(jié)腸黏膜大體觀察及組織病理學(xué)觀察

從圖2可以看出，正常組結(jié)腸黏膜完整，肉眼觀察未見水腫及潰瘍。模型組結(jié)腸黏膜損傷最嚴(yán)重，潰瘍數(shù)目多且范圍廣，組織水腫明顯，有炎癥細(xì)胞浸潤，部分腺體被毀壞。各治療組與模型組相比結(jié)腸黏膜光滑平整，能看到愈合的潰瘍組織，無炎癥細(xì)胞浸潤，無明顯潰瘍及水腫，其中SASP組和霍山石斛高劑量組與正常組最為接近。

3?小結(jié)

有研究表明，遺傳、環(huán)境、精神等因素會激發(fā)機(jī)體的免疫系統(tǒng)，促使免疫細(xì)胞釋放IL-1、TNF-α等炎性細(xì)胞因子，損傷腸黏膜，引起結(jié)腸黏膜滲漏、水腫，甚至潰瘍，引發(fā)黏液膿血便、體重減輕等[11]。該研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，霍山石斛多糖可顯著降低炎性細(xì)胞因子IL-1、TNF-α水平，減輕結(jié)腸黏膜損傷，促進(jìn)潰瘍愈合，降低了DAI評分，表明霍山石斛多糖具有通過抗炎治療潰瘍性結(jié)腸炎作用。

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