杜 敏

（青海畜牧獸醫(yī)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，青海西寧 812100）

近幾年，隨著我國(guó)畜牧業(yè)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，肉用動(dòng)物養(yǎng)殖數(shù)量呈現(xiàn)逐年升高，尤其是肉雞的養(yǎng)殖，成為畜牧業(yè)主要的組成結(jié)構(gòu)之一，但在肉雞的養(yǎng)殖過程中不合理的使用抗生素，導(dǎo)致肉雞腸道內(nèi)微生物菌群失衡及免疫功能降低，同時(shí)造成雞肉中的藥物殘留，成為人們生活中食品公共衛(wèi)生問題（胡斌，2019；付麗，2015）。苜蓿是我國(guó)重要的優(yōu)質(zhì)牧草之一，苜蓿中富含皂苷、類黃酮、葉蛋白、多糖和膳食纖維等多種生物活性成分，且營(yíng)養(yǎng)豐富、消化率高，被稱為 “牧草之王”（孫娟娟，2019；李剛，2019）。苜蓿皂苷是苜蓿中重要的活性物質(zhì)之一，該物質(zhì)具調(diào)節(jié)脂類代謝、降低膽固醇、抗癌、抗氧化和提高機(jī)體免疫力等多種作用及功能 （陳培英，2015）。許多研究表明，苜蓿皂苷具有提高免疫力、抗氧化及促進(jìn)生長(zhǎng)作用，被廣泛應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖業(yè)中（陳燕繪，2014）。本試驗(yàn)在21日齡的白羽肉雞基礎(chǔ)日糧中添加不同水平的苜蓿皂苷提取物，研究其對(duì)白羽肉雞生長(zhǎng)性能、腸道微生物菌群結(jié)構(gòu)及免疫功能影響，為進(jìn)一步苜蓿皂苷提取物在臨床中推廣應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 苜蓿皂苷（純度≥65%）購(gòu)自寧夏凱源生物技術(shù)有限公司；大腸桿菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌鑒別培養(yǎng)基均購(gòu)自北京陸橋技術(shù)股份有限公司；禽流感H9抗原、新城疫抗原、AI、ND陽性血清均購(gòu)自中國(guó)藥品食品監(jiān)察所。

1.2 基礎(chǔ)日糧配比 參照NRC（2008）肉雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制基礎(chǔ)日糧，采用玉米-豆粕型基礎(chǔ)日糧飼喂，其日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與管理 采用單因素設(shè)計(jì)試驗(yàn)，試驗(yàn)選擇體重相近的21日齡白羽肉雞360只隨機(jī)分成4組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30只，1組為空白對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)2、3、4組在基礎(chǔ)日糧中分別添加0.5%、1.0%、1.5%的苜蓿皂苷，試驗(yàn)期為21 d。每個(gè)重復(fù)組單獨(dú)飼養(yǎng)，自由采食和飲水。按常規(guī)的飼養(yǎng)管理方式進(jìn)行飼養(yǎng)與管理、疫苗免疫及環(huán)境消毒。

表1 日糧組成與營(yíng)養(yǎng)水平

1.4 指標(biāo)測(cè)定及方法

1.4.1 生長(zhǎng)性能 記錄每個(gè)重復(fù)組在試驗(yàn)開始與結(jié)束的體重及試驗(yàn)期間的采食料量和耗料量，測(cè)定生長(zhǎng)性能指標(biāo)平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）和料重比（F/G）。

1.4.2 腸道微生物菌群 參照王顯峰 （2019）報(bào)道方法，試驗(yàn)結(jié)束前5 d，每個(gè)重復(fù)組采集新鮮糞便大約50 g，用鑒別培養(yǎng)基檢測(cè)糞便中乳酸桿菌、雙歧桿菌和大腸桿菌的數(shù)量，其中大腸桿菌在37℃下恒溫需氧培養(yǎng)12～24 h后計(jì)數(shù)，乳酸桿菌和雙歧桿菌37℃培養(yǎng)箱厭氧培養(yǎng)24～48 h后計(jì)數(shù)，記錄每克糞便中菌群總數(shù)，用對(duì)數(shù)（lg cfu/g）表示。

1.4.3 免疫指標(biāo) 試驗(yàn)結(jié)束，每個(gè)組隨機(jī)抽取10只試驗(yàn)肉雞翅下靜脈采血，37℃孵育30 min，離心分離血清，-20℃保存。參照仇薪鑫（2019）報(bào)道方法，用血凝抑制試驗(yàn)測(cè)定其試驗(yàn)肉雞新城疫、禽流感抗體效價(jià)水平。

1.5 數(shù)據(jù)分析 試驗(yàn)結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，采用Duncan’s法進(jìn)行差異顯著性分析，以P＜0.05表示差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 苜蓿皂苷對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響 由表2可知，在試驗(yàn)期間，試驗(yàn)2、3、4組的ADFI均高于1組，差異性不顯著 （P＞0.05）；試驗(yàn)3、4組的ADG較1組相比分別提高9.9%、14.2%，差異性顯著 （P＜0.05），試驗(yàn)2組高于1組，差異性不顯著（P＞ 0.05），試驗(yàn) 2、3、4 組之間相比，差異性不顯著 （P＞0.05）；試驗(yàn)3、4組的F/G較 1組相比分別降低17.1%、18.5%，差異性顯著 （P＜0.05），試驗(yàn)2組低于1組，差異性不顯著（P＞0.05），試驗(yàn) 2、3、4 組之間相比，差異性不顯著（P＞ 0.05）。

表2 苜蓿皂苷對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能測(cè)定結(jié)果

2.2 苜蓿皂苷對(duì)肉雞腸道微生物菌群結(jié)構(gòu)的影響由表3可知，試驗(yàn)期間，試驗(yàn)3、4組糞便中大腸桿菌的含量較1組相比分別降低21.6%、22.5%，差異性顯著 （P＜0.05），試驗(yàn)2組低于1組，差異性不顯著（P＞ 0.05），試驗(yàn) 2、3、4 組之間相比，差異性不顯著（P＞ 0.05）；試驗(yàn) 3、4組糞便中乳酸桿菌、雙歧桿菌的含量較1組相比分別提高28.5%、38.1%、25.1%、25.4%，差異性顯著 （P＜ 0.05），試驗(yàn) 2組高于 1 組，差異性不顯著（P＞ 0.05），試驗(yàn) 2、3、4 組之間相比，差異性不顯著（P＞0.05）。

表3 苜蓿皂苷對(duì)肉雞腸道微生物結(jié)構(gòu)測(cè)定結(jié)果lg cfu/g

2.3 苜蓿皂苷對(duì)肉雞免疫指標(biāo)的影響 由表4可知，試驗(yàn)3、4組試驗(yàn)肉雞血清中AI、ND抗體效價(jià)水平較1組相比分別提高25.7%、26.8%、30.1%、31.1%，差異性顯著 （P＜ 0.05），試驗(yàn) 2組高于 1 組，差異性不顯著（P＜ 0.05），試驗(yàn) 2、3、4組之間相比，差異性不顯著（P＞0.05）。

表4 苜蓿皂苷對(duì)肉雞免疫指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果log2

3 討論

苜蓿皂苷是由苜蓿中提取的生物活性物質(zhì)，該物質(zhì)具調(diào)節(jié)脂類代謝、提高機(jī)體免疫力、促進(jìn)生長(zhǎng)等多種作用及功能，被廣泛應(yīng)用（陳培英，2014）。本試驗(yàn)研究表明，試驗(yàn)2、3、4組的ADFI均高于1組（P＞0.05），試驗(yàn)3、4組的ADG較1組相比分別提高9.9%、14.2%（P＜0.05），試驗(yàn)3、4組的 F/G較 1組相比分別降低 17.1%、18.5%（P＜0.05），說明不同水平的苜蓿皂苷添加，可以有效提高白羽肉雞的平均日增重、降低料肉比。苜蓿皂苷為生物活性物質(zhì)，可以調(diào)節(jié)白羽肉雞腸道消化酶合成與分泌，促進(jìn)白羽肉雞對(duì)飼料中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化與吸收，提高其飼料中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)在體內(nèi)的利用率，因而提高平均日增重、降低料肉比，進(jìn)而提高其生長(zhǎng)性能。

相關(guān)研究表明，動(dòng)物腸道菌群主要包含多種致病菌和非致病菌群，大腸桿菌是存在動(dòng)物腸道中的正常菌群，當(dāng)外界條件改變時(shí)，腸道中大腸桿菌可以轉(zhuǎn)化為致病菌，破壞腸道菌群平衡，引起動(dòng)物的腹瀉、敗血癥等，嚴(yán)重者可導(dǎo)致死亡，因此腸道中菌群結(jié)構(gòu)的平衡，對(duì)動(dòng)物健康具有重要意義（王顯峰，2019）。本試驗(yàn)研究表明，試驗(yàn)3、4組糞便中乳酸桿菌、雙歧桿菌的含量較 1組相比分別提高 28.5%、38.1%、25.1%、25.4% （P＜0.05），試驗(yàn)3、4組糞便中大腸桿菌的含量較1組相比分別降低21.6%、22.5% （P＜0.05），說明不同水平的苜蓿皂苷添加，可以降低肉雞腸道內(nèi)大腸桿菌等有害微生物生長(zhǎng)，提高乳酸菌和雙歧桿菌等益生菌的生長(zhǎng)，改善腸道菌群結(jié)構(gòu)平衡，維持白羽肉雞腸道健康。苜蓿皂苷調(diào)節(jié)腸道菌群平衡的機(jī)理尚未明確，有待進(jìn)一步研究。

禽流感（AI）、新城疫（ND）等病毒性疾病是危害養(yǎng)雞業(yè)主要傳染性疾病之一，AI、ND可以感染不同日齡的雞，其感染率和死亡率均較高，可造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，本病目前無有效的藥物可以預(yù)防，主要通過疫苗進(jìn)行預(yù)防，AI、ND抗體水平的變化是反映機(jī)體體液免疫的狀態(tài)指標(biāo)之一（仇薪鑫，2019；蔡艷，2018）。 本試驗(yàn)結(jié)果顯示，試驗(yàn)3、4組試驗(yàn)肉雞血清中AI、ND抗體效價(jià)水平較1組相比分別提高 25.7%、26.8%、30.1%、31.1%（P＜0.05）。說明不同水平的苜蓿皂苷添加可以提高肉雞血清中AI、ND抗體效價(jià)水平，能有效的降低禽流感（AI）、新城疫病的發(fā)生?？赡苡捎谲俎Ｔ碥仗砑涌梢约せ钊怆u體內(nèi)的免疫系統(tǒng)，促進(jìn)體內(nèi)的抗體分泌，提高禽流感（AI）、新城疫（ND）抗體水平，因而提高其機(jī)體的免疫機(jī)能。

4 結(jié)論

日糧中添加不同水平的苜蓿皂苷可以提高白羽肉雞的生長(zhǎng)性能和免疫機(jī)能、改善其腸道菌群結(jié)構(gòu)，本試驗(yàn)條件下，以添加1.5%為適宜。