許 偉 ， 賀 文 ， 王 力 ， 馬 杰 ， 董小強(qiáng)

(1.甘肅省慶陽市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 ， 甘肅 慶陽 745000 ； 2.甘肅省慶城縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 ， 甘肅 慶城 745100)

隨著本市肉羊產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，養(yǎng)殖數(shù)量逐年增加，由于羊只調(diào)引頻繁，口蹄疫、小反芻獸疫等重大動(dòng)物疫病傳染風(fēng)險(xiǎn)不斷增大；羊傳染性胸膜肺炎、羊痘、羊梭菌病和布魯氏菌病等人獸共患病呈地方性散發(fā)，嚴(yán)重影響本市肉羊養(yǎng)殖的健康發(fā)展，因此，做好免疫工作是當(dāng)前本市羊只疫病防控的迫切需要，目前，羊只強(qiáng)制免疫的疫苗有口蹄疫、小反芻獸疫、布病S2株，因病設(shè)防的疫苗有山羊支原體肺炎、羊痘、羊三聯(lián)四防，如果單種疫苗每種間隔7 d免疫注射，不僅免疫工作時(shí)間跨度長，而且增加了基層防疫人員免疫注射工作量和工作強(qiáng)度。為提高免疫工作效率，強(qiáng)化免疫效果，探索不同疫苗組合的免疫方法對(duì)其抗體產(chǎn)生的影響，試驗(yàn)將口蹄疫、小反芻獸疫，山羊支原體肺炎、羊痘4種疫苗每2種或3種進(jìn)行不同組合，每組同時(shí)分點(diǎn)注射進(jìn)行免疫效果檢測。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 在慶城縣葛崾峴鄉(xiāng)一家規(guī)模羊場選取3月齡以上未注射過任何疫苗的健康羊230只作為試驗(yàn)羊，試驗(yàn)羊只臨床檢查健康，無臨床疾病表現(xiàn)，試驗(yàn)羊按照規(guī)范進(jìn)行飼養(yǎng)管理，精飼料為配合飼料，粗飼料為青干草，免疫前對(duì)試驗(yàn)羊進(jìn)行基礎(chǔ)抗體滴度測定，布魯菌病抗體陰性，口蹄疫、小反芻獸疫、羊傳染性胸膜肺炎、羊痘感染抗體陰性，免疫抗體滴度低于1∶16的選擇為試驗(yàn)對(duì)象。

1.2 試驗(yàn)疫苗 使用疫苗名稱、生產(chǎn)廠家、批號(hào)見表1。

表1 試驗(yàn)疫苗及免疫方法

1.3 試驗(yàn)分組 將選取的230只試驗(yàn)羊，隨機(jī)分為9組。A1～A5組為試驗(yàn)組，每組30只(見表2)。B1～B4組為對(duì)照組，每組20只(見表3)。各組免疫后過敏和死亡情況見表2和表3。

表3 對(duì)照組分組免疫注射情況 (只)

表2 試驗(yàn)組分組免疫注射情況 (只)

1.4 免疫方法 2種和3種疫苗組合同時(shí)分點(diǎn)免疫方法，A1組和A4組分別注射于羊頸部兩側(cè)肌肉，A2組和A3組分別注射于羊頸部一側(cè)肌肉和尾根內(nèi)側(cè)皮下，A5組分別注射于羊頸部兩側(cè)肌肉及尾根內(nèi)側(cè)皮下,B1～B3組頸部肌肉注射，B4組尾根內(nèi)側(cè)皮下注射。注射時(shí)嚴(yán)格消毒，規(guī)范操作，免疫劑量嚴(yán)格按照說明書要求注射(見表1)。

1.5 樣品采集 免疫21 d后，分別對(duì)試驗(yàn)組A1～A5組和對(duì)照組B1～B4組共230只試驗(yàn)羊前腔靜脈采血230份，每份5 mL，無菌分離血清后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室免疫抗體檢測。

1.6 檢測試劑 口蹄疫O型、A型液相阻斷ELISA檢測試劑盒，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)，O型批號(hào):20190305101-3、A型批號(hào):20190314103-2。小反芻獸疫阻斷ELISA抗體檢測試劑盒，中國動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心生產(chǎn)，批號(hào):2019001。山羊傳染性胸膜肺炎M0正向間接血凝診斷試劑盒，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)，批號(hào):20180515。羊痘間接ELISA抗體檢測試劑盒，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)，批號(hào):20181121119。

2 結(jié)果

免疫結(jié)果檢測結(jié)果見表4、表5。

表5 對(duì)照組免疫抗體檢測結(jié)果匯總

表4 試驗(yàn)組免疫抗體檢測結(jié)果

口蹄疫免疫抗體檢測：嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，口蹄疫O型-A型液相阻斷ELISA試驗(yàn)抗體效價(jià)≥27為免疫合格。試驗(yàn)組A1組A型口蹄疫合格24份、O型口蹄疫合格29份，合格率分別為80.0%、96.67%；A2組A型口蹄疫合格27份、O型口蹄疫合格30份，合格率分別為90.0%、100%；A5組A型口蹄疫合格28份、O型口蹄疫合格30份，合格率分別為93.3%、100%。對(duì)照組B1組A型口蹄疫合格18份、O型口蹄疫合格19份，合格率分別為90.0%、95.0%。

小反芻獸疫免疫抗體檢測：嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，小反芻獸疫阻斷ELISA阻斷率(PB)>50， 判定為陽性。試驗(yàn)組A1組合格30份，合格率100%;A3組合格26份，合格率86.67%，A4組合格27份，合格率90.0%;A5組合格28份，合格率93.3%。對(duì)照組B2組合格19份，合格率95.0%。

山羊支原體肺炎免疫抗體檢測：嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，正向間接血凝實(shí)驗(yàn)抗體效價(jià)≥23為免疫合格。試驗(yàn)組A4組合格30份，合格率100%。對(duì)照組B4組，合格20份，合格率100%。

羊痘免疫抗體檢測：嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，羊痘免疫間接ELISA抗體檢測OD450值≥0.25為抗體陽性。試驗(yàn)組A2組合格29份，合格率96.4%；A3組合格23份，合格率76.7%；A5組合格30份，合格率100%。對(duì)照組B3組合格18份，合格率90.0%。

3 討論

3.1 對(duì)各組羊只免疫后副反應(yīng)觀察和抗體水平檢測。結(jié)果表明：口蹄疫和小反芻獸疫；口蹄疫和羊痘；小反芻獸疫和羊痘；小反芻獸疫和山羊支原體肺炎；口蹄疫、小反芻獸疫和羊痘疫苗組合分點(diǎn)同時(shí)注射副反應(yīng)率、副反應(yīng)臨床癥狀、免疫產(chǎn)生的抗體水平與單苗注射相比，差異不顯著，不同疫苗產(chǎn)生的抗體之間相互干擾、拮抗作用不明顯，抗體合格率在70%以上，均能達(dá)到國家規(guī)定的免疫抗體合格標(biāo)準(zhǔn)，因此該免疫接種方法在實(shí)際工作中可推廣應(yīng)用。

3.2 免疫試驗(yàn)過程中試驗(yàn)組A4組小反芻獸疫和山羊支原體肺炎，A5組口蹄疫、小反芻獸疫和羊痘，在免疫過程中個(gè)別羊只出現(xiàn)副反應(yīng)并死亡，經(jīng)臨床觀察分析，有可能是疫苗的劑量過大、個(gè)體差異所致，我們?cè)诮窈蟮墓ぷ髦?，還需進(jìn)一步做好小范圍的免疫試驗(yàn)，以確保2種和3種疫苗分點(diǎn)同時(shí)注射免疫的安全可靠性。