徐曉萍，董耀，彭婷婷，梅嬋，周璐

（1.江蘇省生產(chǎn)力促進中心，南京 210000； 2.江蘇省理化測試中心，南京 210000）

替比培南酯化學名稱為（4R，5S，6S）-3-［1-（4，5-二氫-2-噻唑基）氮雜環(huán)丁烷-3-硫醇基］-6-（1R-羥基乙基）-4-甲基-7-氧代-1-氮雜雙環(huán)［3.2.0］庚-2-烯-2-羥酸特戊酰氧甲酯，是由美國輝瑞公司研發(fā)的一種廣譜類抗生素［1-3］，2009 年4 月由日本明治制果公司研制的替比培南酯顆粒劑正式上市銷 售［4-5］。替比培南酯顆粒是一種用于治療小兒中耳炎、細菌性肺炎引發(fā)的上呼吸道感染的碳青霉烯類抗生素藥物，抗菌活性突出，安全性高，增加了兒童抗生素藥物的品種［6-8］。目前，國內(nèi)有多家醫(yī)藥公司已取得該藥物的臨床批件。

在替比培南酯合成過程中，需經(jīng)辛酸銠關環(huán)得到新的化合物，在有機胺的作用下與二苯氧基磷酰氯反應，再在鈀碳催化下氫化脫去保護基，最后與新戊酸碘甲酯縮合得到最終產(chǎn)物替比培南酯［9-11］。因此替比培南酯顆粒劑中會殘留銠和鈀等重金屬元素，影響藥品質(zhì)量，危害人體健康。

目前，郭偉等建立了石墨爐原子吸收分光光度法測定鈀的方法，該方法的線性范圍為10～100 μg／L，但很難準確測定藥品中痕量鈀［12］。通過查新未見對于該藥品中銠測定方法的相關報道［13］。等離子體發(fā)射質(zhì)譜法測定金屬元素具有抗基體干擾能力強，線性動態(tài)范圍寬，有靈敏度高，檢出限低,可消除譜線干擾等優(yōu)點［14-15］。筆者采用微波消解法進行樣品前處理，建立等離子體發(fā)射質(zhì)譜法測定替比培南酯顆粒劑中銠、鈀含量的方法。該方法檢出限低，精密度與準確度高，可為該藥品的質(zhì)量控制提供技術支撐。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

電感耦合等離子體質(zhì)譜儀：M90 型，德國耶拿分析儀器股份公司；

分析天平：BSA224S-CW 型，感量為萬分之一，賽多利斯科學儀器（北京）有限公司；

微波消解儀：MARS6 型，美國CEM 公司；

超純水儀：MicroPure UV／UF 型，美國賽默飛世爾科技有限公司；

替比培南酯顆粒劑樣品：批號為876139，日本明治制果公司；

硝酸、鹽酸：電子級，蘇州晶銳化學股份有限公司；

銠元素標準溶液：編號為NCS 148136，100 μg／mL，國家鋼鐵材料測試中心；

鈀元素標準溶液：編號為GBW(E) 082120，100μg／mL，國家鋼鐵材料測試中心；

銦元素標準溶液：編號為NCS 140335，10 μg／mL，國家鋼鐵材料測試中心；

液氬：純度不小于99.99%，南京阿爾麥化工有限公司；

高純氦氣：純度不小于99.99%，南京阿爾麥化工有限公司；

實驗用水為超純水。

1.2 溶液配制

5%硝酸溶液：準確移取25 mL 硝酸于500 mL容量瓶中，用純水稀釋至標線，定容搖勻，備用。

銠、鈀混合標準儲備液：1μg／mL，分別準確移取1 mL 銠、鈀單元素標準溶液，于100 mL 容量瓶中，用5%硝酸溶液稀釋并定容至標線。

銠、鈀混合系列標準工作溶液：分別移取50，100，200，500，1 500 μL 的銠，鈀標準儲備液于50 mL 容量瓶中，用5%鹽酸溶液稀釋至標線，搖勻，得1，2，5，10，30 μg／L 的銠，鈀系列標準工作溶液。

銦內(nèi)標溶液：取500 μL 的銦標準溶液于500 mL 容量瓶中，用5%硝酸溶液稀釋并定容，得到10 μg／L 的銦內(nèi)標溶液。

1.3 樣品前處理

準確稱取0.2 g 試樣于微波消解罐中，緩慢加入7 mL 硝酸，靜置1 h 后，旋緊罐蓋，按照表1 微波消解工作條件進行消解，消解完畢后，冷卻，取出消解罐，緩慢打開罐蓋排氣，用少量水沖洗內(nèi)蓋，將消解罐放在控溫電熱板上，于140℃趕酸至剩余1 mL溶液，取下冷卻至室溫，將試樣消解液全部轉移至25 mL 容量瓶中，用水稀釋至標線，定容，混勻備用。同法進行空白試驗，配制樣品空白溶液。

表1 微波消解工作條件

1.4 儀器工作條件

霧化器：同心圓玻璃；等離子體氣流量（氬氣）：18.0 L／min ；載氣流量（氬氣）：1.50 L／min；輔助氣流量（氬氣）：1.05 L／min；混合氣流量（氬氣）：0.14 L／min；射頻發(fā)射功率：1 400 W；碰撞氣流量（氦氣）：115 mL／min；蠕動泵轉速：5 r／min；采樣深度：6.5 mm；樣品測定時間：60 s；穩(wěn)定時間：30 s；采用在線加入115In 內(nèi)標溶液法。

2 結果與討論

2.1 樣品前處理方法的選擇

分別采用微波消解、干灰化法及濕法消解3 種不同的前處理方法對試樣進行前處理。由試驗結果可知，干灰化法測定試樣中銠、鈀時，加標回收率低于80%，說明灰化過程易造成試樣中待測元素的損失。濕法消解及微波消解均可以得到消解至澄清的試樣溶液。但由于濕法消解酸消耗量大，耗時長且在補酸的過程中易帶入污染。而微波消解酸用量少，試劑空白低，速度快，因此選擇微波消解法進行樣品前處理。

2.2 消解液的選擇

微波消解常用試劑有硝酸、鹽酸、氫氟酸、雙氧水，硝酸是一種具有強氧化性的酸，能夠很好的將試樣中的有機物分解，本次實驗分別采用7 mL 硝酸溶液，5 mL 硝酸+2 mL 鹽酸溶液，6 mL 硝酸溶液+1 mL 雙氧水分別對樣品進行消解。試驗發(fā)現(xiàn)樣品經(jīng)5 mL 硝酸溶液+2 mL 鹽酸混酸消解后不能得到澄清的溶液，而7 mL 硝酸溶液和6 mL 硝酸溶液+1 mL 雙氧水的消解液均可將樣品消解完全?？紤]到減少試劑的用量，因此最終選擇7 mL 硝酸作為消解酸液。

2.3 儀器干擾的消除

等離子體發(fā)射光譜儀的干擾可以分為兩大類：質(zhì)譜干擾和非質(zhì)譜干擾。質(zhì)譜干擾主要來源于同量異位素重疊、難熔氧化物離子等。在儀器最優(yōu)工作條件下，選擇碰撞／反應池技術，來消除質(zhì)譜干擾。非質(zhì)譜干擾主要來源于樣品的基體效應或由高含量總溶解固體引起的物理效應，選用在線加入115In 作為內(nèi)標物，消除非質(zhì)譜干擾。

2.4 儀器工作條件的優(yōu)化

等離子體發(fā)射光譜儀儀器條件的優(yōu)化有利于提高儀器的靈敏度與精密度，采用5 μg／L 鈹、銦、鉍、鉛、釷及砷混合標準調(diào)諧溶液，將儀器調(diào)至碰 撞／反應模式，將溶液導入進儀器，通過對等離子體氣流量、射頻發(fā)射功率、碰撞氣流量等參數(shù)的自動優(yōu)化，使得儀器從低質(zhì)量數(shù)到高質(zhì)量數(shù)的測定達到最佳靈敏度。最終確定的最佳儀器條件，列于1.4。

2.5 線性方程及檢出限

按照1.4 儀器工作條件，分別測定銠、鈀混合標準工作溶液中各元素的離子信號強度，以元素的質(zhì)量濃度（X）為橫坐標，以離子信號強度與內(nèi)標離子信號強度比值（Y）為縱坐標繪制標準工作曲線。

按1.4 儀器條件重復測定空白溶液11 次，以3倍的標準偏差計算檢測限。Rh 和Pd 線性方程、線性相關系數(shù)、儀器檢出限及方法檢出限結果列于表2。

表2 線性方程及相關系數(shù)

由表2可知，Rh和Pd的線性范圍為0～30 μg／L，線性關系良好，可以滿足泰比培南酯顆粒劑中銠、鈀的檢測要求。

2.6 精密度試驗

分別稱取0.2 g 試樣（精確至0.000 1 g）6 份于微波消解罐中，按照1.3 步驟進行樣品前處理。消解后的試樣溶液按照1.4 儀器工作條件進行測定，測定結果見表3。

表3 精密度試驗結果

由表3 可知，試樣中銠、鈀測定結果的相對標準偏差分別為1.36%和1.98%。表明該方法的精密度和重現(xiàn)性較好，滿足泰比培南酯顆粒劑中銠、鈀的檢測要求。

2.7 加標回收試驗

稱取0.2 g 試樣于微波消解罐中，按照測定樣品含量確定低、中、高加標濃度進行元素加標，然后按照1.3 操作步驟進行樣品前處理。消解后的試樣溶液按照1.4 儀器工作條件進行測定，測定結果見表4。由表4 可知，試樣中Rh 與Pd 的加標回收率分別為96.8%～100.6%，說明該方法的準確度較高，適用于泰比培南酯顆粒劑中銠、鈀的測試。

表4 回收試驗結果

3 結語

建立了電感耦合等離子體質(zhì)譜法測定替比培南酯顆粒劑中銠、鈀的方法，采用微波消解進行樣品前處理。該方法具有操作快速，檢測方便，靈敏度、準確度高等優(yōu)點，可為藥品質(zhì)量、安全提供技術 支撐。