徐 珀

深圳市第二人民醫(yī)院急診科，廣東 深圳 518000

前列腺癌是男性常見的惡性腫瘤之一，每年全世界有100萬人左右被確診此?。?］。以前我國前列腺癌死亡率和發(fā)病率都較低，但是隨著人口老年化，前列腺癌的發(fā)病率漸漸呈上升趨勢。治療方案有前列腺切除術(shù)等大多數(shù)前列腺癌治療方案的療效是顯著的［2-3］，但激素非依賴性前列腺癌的療效不太樂觀［4］。

劉暢等［5］采用免疫組織化學(xué)染色法檢測前列腺癌中SKP2、kindlin-2蛋白的表達情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)前列腺癌組織中SKP2、kindlin-2蛋白的表達率顯著升高，該蛋白的表達與前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。周亮等［6］研究miR-372在前列腺癌中的表達及對前列腺癌細(xì)胞遷移的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-372在前列腺癌組織中表達下調(diào)，抑制癌細(xì)胞遷移，可作為前列腺癌的抑癌因子。張興華等［7］研究CaMKⅡδ在前列腺癌組織的表達及意義結(jié)果發(fā)現(xiàn)CaMKⅡδ在人前列腺癌組織中表達過度，該基因的表達表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、前列腺癌的外侵顯著相關(guān)。定位于染色體19p13.1的人類ELL（Eleven-nineteen lysine-rich leukemia gene）基因在調(diào)節(jié)生長發(fā)育和腫瘤形成起到重要作用，但是ELL基因與定位于染色體11q23上的白血病基因發(fā)生易位［4］，在多種白血病患者中得到了證實。但是，對于ELL基因在前列腺癌中的表達情況，稀有報道。為了了解ELL2在前列腺癌組織中表達水平及其對前列腺癌細(xì)胞株C4-2增殖的影響，我們采用qRT-PCR及對ELL基因表達的上調(diào)或沉默，旨在揭示分析ELL基因在前列腺癌組織細(xì)胞中的表達，以及ELL基因在前列腺癌發(fā)生發(fā)展的作用。

1 一般資料

1.1 臨床資料

上海芯超前列腺癌芯片HProA150CS01中含有前列腺癌50例：癌100點/癌旁50點。Gleason分級6-10，臨床分期2期～4期。前列腺癌患者均為未接受抗腫瘤治療，且排除其他器官的惡性腫瘤?；颊吣挲g（70.96±6.10）歲。前列腺癌病理分級標(biāo)準(zhǔn)參考Gleason評分系統(tǒng)中相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，腫瘤臨床分期參考《中國泌尿外科疾病診斷治療指南》。手術(shù)后取得供試的材料標(biāo)本,液氮中速凍10～15 min后，-70℃保存。經(jīng)病理學(xué)證實所有標(biāo)本均是前列腺癌。100例患者中Gleason評分評分＜7分者6例，=7分者48例,Gleason評分＞7分者46例；腫瘤臨床分期:Ⅱ期15例，Ⅲ期61例，Ⅳ期18例。

1.2 ELL抗體行免疫組化檢測

經(jīng)過石蠟切片脫蠟至水，將這些組織制成約3 mm，0.01MKPBS清洗5min×3后，加入配好的0.3%的過氧化氫甲醇溶液。室溫下孵育10min，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性，PBS沖洗3次/3 min，采用濃度為10%牛奶蛋白封閉，室溫孵育5 min，加入ELL2蛋白抗體（ELL2抗體購買自Abcam公司），室溫孵育2 h，PBS沖洗3次/5 min，滴加生物素化抗兔二抗，37℃孵育30 min，再用PBS沖洗3次/5min，加入NBT/BCIP色劑顯色，5min后復(fù)染，自來水沖洗，藍化，切片經(jīng)梯度酒精脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固，晾干后觀察。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)處理采用SPSS 21.0軟件，計數(shù)資料以例數(shù)和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗;P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Gleason評分與ELL2基因蛋白表達情況分析

Gleason評分＜7分的組織中ELL2基因蛋白陽性表達率為83.33%；Gleason評分=7分的組織中中ELL2基因蛋白陽性表達率為75.00%；Gleason評分＞7分的組織中ELL2基因蛋白陽性表達率為13.04%，Gleason評分＞7分的組織中的ELL2基因的陽性表達率顯著小于其它兩種組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=39.580，P＜0.001）。

表1 Gleason評分與ELL2基因蛋白表達情況

2.2 TNM分期與ELL2基因蛋白表達情況分析

TNM分期為Ⅱ的ELL2基因蛋白陽性表達率為86.67%；TNM分期為Ⅲ中ELL2基因蛋白陽性表達率為73.77%；TNM分期為Ⅳ的組織中ELL2基因蛋白陽性表達率為11.11%，TNM分期為Ⅳ的組織中的ELL2基因的陽性表達率顯著小于其它兩種組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=27.668，P＜0.001）。

表2 Gleason評分與ELL2基因蛋白表達情況

3 討論

前列腺癌發(fā)病率僅次于的肺癌，是男性第二的腫瘤。前列腺癌死亡率在男性腫瘤中排名前列［8］。目前用于前列腺癌的生物標(biāo)志物為總PSA（tPSA）和游離PSA（fPSA）［9］。

真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄延伸的調(diào)控是基因正常表達的重要條件。ELL家族是RNA聚合酶II（RNAPⅡ）轉(zhuǎn)錄因子,調(diào)控RNAPⅡ的功能的關(guān)鍵因子［10］。ELL2是ELL蛋白家族中的一員。本研究發(fā)現(xiàn)前列腺癌組織中，Gleason評分＞7分的組織中的ELL2基因的陽性表達率顯著小于其它兩種組織且TNM分期為Ⅳ的組織中的ELL2基因的陽性表達率顯著小于其它兩種組織。所以ELL2表達的下調(diào)可能是誘發(fā)前列腺癌的病因之一；ELL2可否作前列腺癌腫瘤標(biāo)志物，評估惡性程度、提高早期診斷率，有待于進一步研究。楊鐵軍［11］報道前列腺癌的惡性程度越高，其組織ELL2表達水平越低。他推測ELL2基因可能是前列腺癌的抑癌基因，且ELL2可以作為反映前列腺癌惡性程度指標(biāo)。

Zhou J等［12］報道ELL直接調(diào)控血小板反應(yīng)蛋白1水平的高低，抑制血管生成；前列腺癌中ELL基因抑制腫瘤生長與；也有報道ELL2與EAF2結(jié)合，成為超級延伸復(fù)合體（SEC）的一部分。ELL2是ELL蛋白家族中的一員，該家族調(diào)控轉(zhuǎn)錄的功能類似。通過調(diào)節(jié)基因的表達，抑制細(xì)胞凋亡進程。本研也究探討ELL2對前列腺癌細(xì)胞凋亡與增殖的影響，發(fā)現(xiàn)ELL2基因的表達加速前列腺癌細(xì)胞C4-2凋亡，抑制前列腺癌細(xì)胞C4-2增殖。