程琳 李睿智 程鵬 祝君梅 李昕 李東風(fēng) 于歡 王世煒 史夢柔陳斌 高萍

1天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所300020；2愛美客技術(shù)發(fā)展股份有限公司，北京100022

0 引 言

在溫度、催化劑等條件引發(fā)下，自交聯(lián)凝膠原液可通過單體聚合、高分子交聯(lián)等途徑在原位上自行相變?yōu)閺椥阅z狀。自交聯(lián)凝膠臨床上已被用于關(guān)節(jié)腔、腹腔、骨、神經(jīng)等外科手術(shù)，其可在腔隙中局部成型并附于創(chuàng)面，形成暫時的物理隔絕，預(yù)防局部組織粘連。同時還可抑制創(chuàng)口處的成纖維細(xì)胞聚集和新生血管形成，起到抑制瘢痕的效果[1]。常用的聚乳酸防粘連凝膠生物相容性良好，但其降解產(chǎn)物為酸性物質(zhì)，影響抗炎性能[2-3]。相比于固體防粘連材料需額外與組織縫合固定、手術(shù)創(chuàng)傷較大[4]，自交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠潤滑性較好，適用于關(guān)節(jié)囊和婦科手術(shù)中預(yù)防組織粘連[5-6]，但其易從創(chuàng)面周圍的縫隙流出[7]，且降解過快，影響防粘連效果[8]。醫(yī)用羧甲基葡糖胺聚糖凝膠具有給藥方便、創(chuàng)傷小、自黏附并緊密貼敷創(chuàng)面的優(yōu)勢，更利于創(chuàng)面與外界的物理隔絕，防粘連效果更佳[9]。

本研究采用的是市售的醫(yī)用羧甲基葡糖胺聚糖凝膠，其植入體內(nèi)成膠后固定性能好，降解期長，具有一定的抗炎性能和機(jī)械性能，有兼作醫(yī)用黏附劑的潛力，可通過局部填充占位和自身的抗粘連生物活性起到很好的抗粘連效果。已有研究者通過動物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，該產(chǎn)品可有效防止椎板切除術(shù)后瘢痕粘連形成，且對實(shí)驗(yàn)動物無毒副作用[10]。

因醫(yī)用羧甲基葡糖胺聚糖凝膠擬用于體內(nèi)，且需長期存留，故對其生物安全性有嚴(yán)格要求，加之其構(gòu)成較為復(fù)雜，生物相容性檢驗(yàn)顯得尤為重要。本研究旨在通過鼠傷寒沙門氏菌回復(fù)突變實(shí)驗(yàn)（Ames實(shí)驗(yàn)）、體外染色體畸變實(shí)驗(yàn)和體外基因突變實(shí)驗(yàn)對醫(yī)用羧甲基葡糖胺聚糖凝膠的遺傳毒性進(jìn)行較為全面的檢測，并檢測其急性全身毒性、熱原性和溶血性，以驗(yàn)證其生物安全性。

1 材料與方法

1.1 主要材料與儀器

醫(yī)用羧甲基葡糖胺聚糖凝膠（批號20141008，愛美客技術(shù)發(fā)展股份有限公司），小鼠淋巴瘤細(xì)胞L5178Y、中國倉鼠肺成纖維細(xì)胞（中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心），組氨酸缺陷型鼠傷寒沙門氏菌 TA97、TA98、TA100、TA102（天津市疾病預(yù)防控制中心），胎牛血清、RPMI-1640培養(yǎng)液（美國Gibco公司），1,8-二羥基蒽醌（美國Fluka公司），2-氨基芴、敵克松、6-巰基鳥嘌呤、7,12-二甲基苯蒽（美國Sigma公司），2，4-二硝基氯苯（天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所），注射用絲裂霉素（批號100110，浙江海正藥業(yè)股份有限公司），注射用環(huán)磷酰胺（批號10110621，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司），甲基磺酸乙酯（上海試劑一廠），氯化鈉注射液（批號9J93B，中國大冢制藥有限公司）。肝微粒體酶（S9）液由筆者采用苯巴比妥和β-萘黃酮聯(lián)合誘導(dǎo)大鼠獲得，其蛋白含量和活力經(jīng)測定均符合要求，實(shí)驗(yàn)時將S9液與6-磷酸葡萄糖、氧化性輔酶Ⅱ、KCl等輔助因子配制成S9混合液。

健康無特定病原體級雄性昆明種小鼠20只，5～6周齡，體質(zhì)量范圍19.6～22.5 g，購自中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生學(xué)環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所動物實(shí)驗(yàn)中心，許可證號為SCXK（軍）2009-003。健康普通級雄性日本大耳白兔5只，3月齡，體質(zhì)量范圍2.1～2.6 kg，購自北京隆安實(shí)驗(yàn)動物養(yǎng)殖中心，許可證號為SCX K（京）2011-0003。

HERAcellTM150i CO2培養(yǎng)箱（美國Thermo Fisher Scientific公司），SW-CJ-2F超凈工作臺（上海善志儀器設(shè)備有限公司），Microphot-FXA倒置顯微鏡（日本Nikon公司），T200電子天平（常熟市雙杰測試儀器廠），CL-32L高壓滅菌器（日本ALP公司），ZRY-2D智能熱原儀（天津市天大天發(fā)科技有限公司），T6紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）。

1.2 方法

1.2.1 凝膠浸提液的制備

醫(yī)用羧甲基葡糖胺聚糖凝膠按照專利配制[11]，羧甲基葡糖胺聚糖膠體液和戊二醛溶液分別裝載于雙聯(lián)注射裝置的A管和B管中，推針注射時，這兩種液體在共同針頭處自動混合反應(yīng)，快速形成凝膠。推針時A、B管均推棄初始的0.5 ml，余下的2.0 ml被推注于無菌容器中（共推注4.0 ml），靜置30 min待凝膠凝固后，按不同的浸提比例向凝固凝膠中加入不同的浸提介質(zhì)制備浸提液。其中Ames實(shí)驗(yàn)是按浸提比例0.2 g/ml分別加入氯化鈉注射液和二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO），于 37℃振蕩培養(yǎng)箱中浸提72 h；急性全身毒性實(shí)驗(yàn)和熱原實(shí)驗(yàn)均按浸提比例0.2 g/ml加入氯化鈉注射液，于37℃振蕩培養(yǎng)箱中浸提72 h；體外染色體畸變實(shí)驗(yàn)和體外基因突變實(shí)驗(yàn)均按浸提比例0.2 g/ml加入空白培養(yǎng)基，于37℃CO2培養(yǎng)箱中浸提72 h；溶血實(shí)驗(yàn)則按浸提比例0.5 g/ml加入氯化鈉注射液，于37℃水浴中浸提30 min。

1.2.2 遺傳毒性實(shí)驗(yàn)

結(jié)合圖9、圖10可以得到，方鉛礦具有較好浮選回收率的礦漿電位區(qū)間與元素硫存在的電位-pH區(qū)間大致重合，這是因?yàn)樵诖藚^(qū)間內(nèi)生成的元素硫具有良好的疏水性，從而提高了方鉛礦浮選回收率。當(dāng)?shù)V漿電位過低時，溶液具有強(qiáng)還原性，此時硫元素會被還原成親水性的兩性離子HS-，使礦物疏水性減弱，回收率降低。當(dāng)?shù)V漿電位過高時，溶液呈強(qiáng)氧化性，會生成PbO，形成親水鈍化層[8]，同樣會影響方鉛礦浮選，使回收率降低。

1.2.2.1 Ames實(shí)驗(yàn)

采用平板滲入法進(jìn)行Ames實(shí)驗(yàn)，在活化（＋S9）和非活化（-S9）條件下，TA97、TA98、TA100、TA102菌株均設(shè)凝膠鹽水浸提液組、凝膠DMSO浸提液組、鹽水對照組（氯化鈉注射液）、DMSO對照組和陽性對照組。陽性對照組設(shè)2個平行培養(yǎng)皿，其余每組設(shè)3個平行培養(yǎng)皿。其中活化條件下陽性對照為2-氨基芴（200μg/皿），非活化條件下陽性對照為敵克松（50 μg/皿，TA97、TA98、TA100）和 1，8-二羥基蒽醌（50 μg/皿，TA102）。將 0.1 ml受試菌液、0.1 ml浸提液或?qū)φ找号c2 ml溫頂層瓊脂液混合，快速倒入已鋪好底層瓊脂的平皿中，凝固后反轉(zhuǎn)平皿，于37℃條件下培養(yǎng)72 h，計(jì)數(shù)每皿回變菌落數(shù)。

1.2.2.2 體外染色體畸變實(shí)驗(yàn)

在活化（＋S9）和非活化（-S9）條件下，均設(shè)陰性對照組（空白培養(yǎng)基）、陽性對照組和3個劑量組（凝膠培養(yǎng)基浸提液組和1/2、1/4凝膠培養(yǎng)基浸提液組）?；罨瘲l件下陽性對照為環(huán)磷酰胺（終質(zhì)量濃度為20μg/ml），非活化條件下陽性對照為絲裂霉素（終質(zhì)量濃度為0.25μg/ml）。將中國倉鼠肺成纖維細(xì)胞傳代培養(yǎng)24 h后棄去培養(yǎng)液，活化各組加入浸提液或?qū)φ找鹤饔? h，非活化各組加入浸提液或?qū)φ找鹤饔?4和48 h?；罨鹘M作用結(jié)束后吸棄培養(yǎng)液，洗滌細(xì)胞，加入新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)至24 h，收獲細(xì)胞；非活化各組作用結(jié)束后收獲細(xì)胞。各組均于收獲細(xì)胞前4 h加入秋水仙素（終質(zhì)量濃度為10μg/ml）使細(xì)胞停止在中期分裂相。對收獲的細(xì)胞進(jìn)行離心、低滲、固定、制片和姬姆薩（Giemsa）染色，光學(xué)顯微鏡下各組選擇100個分散良好的中期分裂相進(jìn)行染色體畸變分析，統(tǒng)計(jì)畸變細(xì)胞數(shù)。

1.2.2.3 體外基因突變實(shí)驗(yàn)

在活化（＋S9）和非活化（-S9）條件下，均設(shè)陰性對照組（空白培養(yǎng)基）、陽性對照組和3個劑量組（凝膠培養(yǎng)基浸提液組和1/2、1/4凝膠培養(yǎng)基浸提液組）?；罨瘲l件下陽性對照為甲基磺酸乙酯（終質(zhì)量濃度為10μg/ml），非活化條件下陽性對照為7，12-二甲基苯蒽（終質(zhì)量濃度為25μg/ml）。將L5178Y細(xì)胞傳代培養(yǎng)24 h，消化、計(jì)數(shù)調(diào)整細(xì)胞濃度為5×105個/ml；活化各組加入浸提液或?qū)φ找河?0 ml離心管中37℃、70～80 r/min振蕩培養(yǎng)4 h，非活化各組同條件下振蕩培養(yǎng)24 h；離心，棄上清，重懸后調(diào)整細(xì)胞濃度為2×105個/ml；當(dāng)天取適量細(xì)胞懸液，梯度稀釋后接種于96孔板中（1.6個/孔），置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12 d，計(jì)數(shù)每塊平板有集落生長的孔數(shù)，計(jì)算第0天的平板接種效率（PE0）；將上述所得細(xì)胞懸液作2 d表達(dá)培養(yǎng)，結(jié)束后取適量表達(dá)后的細(xì)胞懸液，梯度稀釋并接種于96孔板中，培養(yǎng)12 d后計(jì)數(shù)每塊平板有集落生長的孔數(shù)，計(jì)算第2天的平板接種效率（PE2）及細(xì)胞相對存活率（relative survival,RS）。取適量2 d表達(dá)培養(yǎng)后的細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度后（1×104個/ml）加入三氟胸苷，混勻，接種于96孔板中（2 000個/孔），于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12 d，計(jì)數(shù)有突變集落生長的孔數(shù)，突變集落按大、小集落分別計(jì)數(shù)，再計(jì)算大集落突變頻率（large colony mutation frequency,L-MF）、小集落突變頻率（small colony mutation frequency,S-MF）、總突變頻率（total mutationfrequency,T-MF）和小集落突變百分率（percentage of small colony mutants,SCM）。

1.2.3 熱原實(shí)驗(yàn)

日本大耳白兔于普通級動物室中單籠飼養(yǎng)，室溫20～25℃，相對濕度40%～70%，光照節(jié)律為12 h光照/12 h黑暗，自由進(jìn)食飲水。采用自動熱原儀對通過體溫初篩的大耳白兔進(jìn)行肛溫測量，每隔0.5 h測量1次，一般測2次，兩次體溫之差≤0.2℃即符合要求，以這兩次體溫的均值作為該兔的正常體溫。在測定正常體溫后15 min內(nèi)，自兔耳緣靜脈緩緩注入38℃預(yù)熱的凝膠鹽水浸提液（10 ml/kg）。注射后每隔0.5 h用自動熱原儀測量兔體溫1次，共測6次，以6次體溫中的最高體溫減去正常體溫即為該兔體溫的升溫值。

1.2.4 急性全身毒性實(shí)驗(yàn)

1.2.5 溶血實(shí)驗(yàn)

采用直接接觸法檢測醫(yī)用羧甲基葡糖胺聚糖凝膠的溶血性能，設(shè)樣品組、陰性對照組和陽性對照組，每組3個50 ml錐形瓶；樣品組每瓶中放入醫(yī)用羧甲基葡糖胺聚糖凝膠5.0 g，再加入10 ml氯化鈉注射液；陰性對照組每瓶中加入10 ml氯化鈉注射液；陽性對照組每瓶中加入10 ml蒸餾水；將上述錐形瓶37℃水浴30 min；每瓶加入0.2 ml稀釋后的抗凝兔血，輕輕搖勻，繼續(xù)37℃水浴60 min；將各瓶中的液體分別轉(zhuǎn)入離心管中，800×g離心5 min，取上清，采用分光光度計(jì)在545 nm波長處測定上清的吸光度值，計(jì)算樣品的溶血率。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示，計(jì)數(shù)資料采用百分比表示，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，體外細(xì)胞基因突變實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)比較采用Z檢驗(yàn)，急性全身毒性實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)比較采用重復(fù)測量資料方差分析，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 Ames實(shí)驗(yàn)

Ames實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1，在活化和非活化條件下，陽性對照組4種菌株的回變菌落數(shù)均超出陰性對照組的3倍；凝膠鹽水浸提液組和凝膠DMSO浸提液組與相應(yīng)的陰性對照組比較，4種菌株的回變菌落數(shù)均未達(dá)到后者的2倍，表明醫(yī)用羧甲基葡糖胺聚糖凝膠對組氨酸缺陷型鼠傷寒沙門氏菌TA97、TA98、TA100和TA102無致突變性。

2.2 體外染色體畸變實(shí)驗(yàn)

由表2可知，非活化條件下陽性對照組細(xì)胞的染色體畸變率為17%（24 h）和19%（48 h），活化條件下陽性對照組細(xì)胞的染色體畸變率為16%（24 h），分別高于同條件下的陰性對照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）；在非活化條件和活化條件下，3個劑量組（凝膠培養(yǎng)基浸提液組和1/2、1/4凝膠培養(yǎng)基浸提液組）細(xì)胞的染色體畸變率均為0，各劑量組間無量效關(guān)系，表明醫(yī)用羧甲基葡糖胺聚糖凝膠無誘發(fā)中國倉鼠肺成纖維細(xì)胞染色體畸變的作用。

表1 醫(yī)用羧甲基葡糖胺聚糖凝膠對組氨酸缺陷型鼠傷寒沙門氏菌回變菌落數(shù)的影響（個/皿，Mean±SD）

2.3 體外細(xì)胞基因突變實(shí)驗(yàn)

由表3可知，在活化和非活化條件下，陰性對照組的PE0、PE2、T-MF和SCM均在規(guī)定范圍內(nèi)；陽性對照組的T-MF均達(dá)到陰性對照組的2倍以上；3個劑量組（凝膠培養(yǎng)基浸提液組和1/2、1/4凝膠培養(yǎng)基浸提液組）誘發(fā)的L-MF、S-MF和T-MF均呈劑量依賴性增長，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。

2.4 熱原實(shí)驗(yàn)

由表4可知，注射凝膠鹽水浸提液后，3只日本大耳白兔的體溫升溫值均＜0.6℃，體溫升溫值總和＜1.3℃，未見凝膠有熱原反應(yīng)。

2.5 急性全身毒性實(shí)驗(yàn)

急性全身毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，分別經(jīng)靜脈注射和腹腔注射凝膠鹽水浸提液和氯化鈉注射液（對照）后 4、24、48和 72 h，各組小鼠均無死亡，小鼠活動及精神狀態(tài)良好，大小便正常，肉眼未見任何毒性反應(yīng)癥狀；且由表5可知，隨著注射后時間的延長，樣品組（靜脈注射、腹腔注射）與對應(yīng)的對照組（靜脈注射、腹腔注射）小鼠體質(zhì)量均有所增長，但兩組間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。

表2 醫(yī)用羧甲基葡糖胺聚糖凝膠作用不同時間對體外中國倉鼠肺成纖維細(xì)胞染色體畸變率的影響

表4 耳緣靜脈注射羧甲基葡糖胺聚糖凝膠鹽水浸提液后不同時間3只日本大耳白兔的體溫變化

表5 注射后不同時間各組小鼠的體質(zhì)量變化（g，Mean±SD）

2.6 溶血實(shí)驗(yàn)

溶血實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，陰性對照組、陽性對照組和樣品組的平均吸光度值分別為0.002、0.834和0.003，計(jì)算得到醫(yī)用羧甲基葡糖胺聚糖凝膠的溶血率為0.1%，表明該凝膠無溶血作用。

3 討論與結(jié)論

羧甲基葡糖胺聚糖凝膠是一種新型醫(yī)用抗粘連材料，其配方新穎，成分較多，使用時反應(yīng)相對復(fù)雜，且預(yù)期要在體內(nèi)長期存留，尤其是用于神經(jīng)外科時，血腦屏障完整性受損，對檢品的生物安全性要求更為嚴(yán)苛。本研究依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)，同時考慮到醫(yī)用羧甲基葡糖胺聚糖凝膠產(chǎn)品的自身特點(diǎn)和預(yù)期臨床應(yīng)用，選擇了相應(yīng)的體內(nèi)外安全性實(shí)驗(yàn)對產(chǎn)品的生物相容性進(jìn)行了較為全面的檢測。

遺傳毒性研究的目的是檢測受試物是否能引起遺傳物質(zhì)損傷，從而導(dǎo)致細(xì)胞衰老、突變、癌變和遺傳性狀的改變，并評價其對人體的潛在致畸、致癌和致突變作用，是生物安全性評價的重要環(huán)節(jié)。經(jīng)多年發(fā)展，遺傳毒性研究已形成了多種實(shí)驗(yàn)體系，涉及的微核實(shí)驗(yàn)、Ames實(shí)驗(yàn)、DNA損傷實(shí)驗(yàn)、體外基因突變實(shí)驗(yàn)等各有優(yōu)劣。研究結(jié)果表明，受試物在一種遺傳毒性實(shí)驗(yàn)中可誘發(fā)某種基因突變,但在另一種遺傳毒性實(shí)驗(yàn)中未必會誘發(fā)基因突變，若該受試物在多種遺傳毒性實(shí)驗(yàn)中均能誘發(fā)基因突變,才表明其可能對人體有潛在的遺傳毒性作用。因此，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)，在安全性評價中需要將不同原理、覆蓋不同遺傳學(xué)終點(diǎn)的遺傳毒性實(shí)驗(yàn)組合使用，以提高遺傳毒性實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和效率。

本研究選擇Ames實(shí)驗(yàn)、體外染色體畸變實(shí)驗(yàn)和小鼠淋巴瘤細(xì)胞胸苷激酶基因突變實(shí)驗(yàn)綜合評價醫(yī)用羧甲基葡糖胺聚糖凝膠的遺傳毒性。其中Ames實(shí)驗(yàn)可檢測不同類型的基因突變，如TA97、TA98菌株檢測移碼突變，TA100、TA102菌株檢測堿基置換和移碼突變，該實(shí)驗(yàn)高效、經(jīng)濟(jì)且靈敏[12-13]；體外染色體畸變實(shí)驗(yàn)可檢測導(dǎo)致動物細(xì)胞染色體異常的種類，包括染色體結(jié)構(gòu)裂隙、斷裂、缺失、微小體及著絲粒環(huán)等諸多終點(diǎn)改變[14]；小鼠淋巴瘤細(xì)胞胸苷激酶基因突變實(shí)驗(yàn)不僅可檢測點(diǎn)突變等小的基因突變，還可檢測染色體水平胸苷激酶基因位點(diǎn)的缺失、移位等大的遺傳突變[15]。本研究中上述3項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在活化和非活化條件下，陰性對照組和陽性對照組的檢測結(jié)果均有明顯差異，符合實(shí)驗(yàn)成立條件；陰性對照組和凝膠浸提液組的檢測結(jié)果均無明顯差異，凝膠浸提液各劑量組的L-MF、S-MF和T-MF均未出現(xiàn)明顯升高，故可判定醫(yī)用羧甲基葡糖胺聚糖凝膠不具有遺傳毒性。

細(xì)菌內(nèi)毒素實(shí)驗(yàn)和熱原實(shí)驗(yàn)均能對醫(yī)療產(chǎn)品的熱原性進(jìn)行檢測。其中細(xì)菌內(nèi)毒素實(shí)驗(yàn)是針對脂多糖這一類熱原性物質(zhì)的特異性檢測，而熱原實(shí)驗(yàn)的檢測譜廣，能檢測出包括細(xì)菌內(nèi)毒素在內(nèi)的多種生物和化學(xué)成分的熱原物質(zhì)[16]，更適用于本研究中構(gòu)成較為復(fù)雜的醫(yī)用羧甲基葡糖胺聚糖凝膠產(chǎn)品的熱原性檢測。

急性全身毒性實(shí)驗(yàn)是認(rèn)識和研究藥物對機(jī)體毒性反應(yīng)的第一步。本研究采用了腹腔注射和靜脈注射兩種給藥方式，全面研究了醫(yī)用羧甲基葡糖胺聚糖凝膠的水溶性和脂溶性浸提物對全身毒性的影響，為進(jìn)一步設(shè)計(jì)相關(guān)毒性實(shí)驗(yàn)提供了依據(jù)。

受試物產(chǎn)生溶血的原因包括受試物材料表面機(jī)械損傷和材料可溶性殘余低分子化學(xué)作用兩方面。針對醫(yī)用羧甲基葡糖胺聚糖凝膠構(gòu)成較復(fù)雜的特點(diǎn)，本研究評價了凝膠材料殘余單體及低分子物質(zhì)在體外環(huán)境下的急性溶血機(jī)能。結(jié)果顯示，陰、陽性對照均符合要求，樣品組溶血率僅為0.1%（溶血率＜5%即合格），可認(rèn)為醫(yī)用羧甲基葡糖胺聚糖凝膠無體外溶血作用。

本研究將羧甲基葡糖胺聚糖膠體液和戊二醛溶液混合，短時間內(nèi)凝集后，再進(jìn)行浸提，評價其生物安全性。該自交聯(lián)凝膠的3項(xiàng)遺傳毒性實(shí)驗(yàn)、急性全身毒性實(shí)驗(yàn)、熱原實(shí)驗(yàn)和溶血實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果均符合醫(yī)用生物材料的要求，這為該材料的預(yù)期臨床使用提供了依據(jù)，為排除可能的危害提供了科學(xué)依據(jù)，也為其他成分和反應(yīng)較復(fù)雜的生物材料的安全性評價提供了思路。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突