周濃，莫日?qǐng)?jiān)，黃秋艷，李承勇,3*

1(廣東海洋大學(xué) 食品科技學(xué)院，廣東 湛江，524088)2(廣東海洋大學(xué) 深圳研究院，廣東 深圳，518100) 3(廣東海洋大學(xué) 化學(xué)與環(huán)境學(xué)院，廣東 湛江，524088)

番石榴(PsidiumguajavaLinn.)，俗稱(chēng)芭樂(lè)、雞屎果，原產(chǎn)于南美洲，在中國(guó)華南各地均有栽培，是一種營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較高的熱帶水果[1-3]。番石榴的VC含量明顯高于其他水果，可達(dá)1 000 mg/100g[4]。番石榴還具備藥用效果，可以起到止血、止痢、止癢、清肝等功效[5-6]。番石榴含有的活性成分主要有多酚、黃酮、鞣質(zhì)類(lèi)、萜類(lèi)、甾體類(lèi)等，其活性物質(zhì)具有降血糖、抗氧化、抑菌及預(yù)防慢性病等作用[7-8]。ALMULAIKY等[9]對(duì)2種品種的番石榴進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)2種番石榴均顯示抗氧化活性。FLORES等[10]對(duì)7種番石榴多酚化合物進(jìn)行抗氧化活性研究，結(jié)果表明不同品種番石榴的抗氧化活性有很大差異。

植物多酚具備抗氧性，抗炎性和抗菌性等生物特性。比如茶多酚可以促進(jìn)動(dòng)物的順利生產(chǎn)，還能通過(guò)調(diào)節(jié)動(dòng)物的腸道狀況提高其免疫能力，在獸醫(yī)學(xué)方面有應(yīng)用前景[11]。蘋(píng)果多酚作為天然安全活性物質(zhì)，不僅可以保護(hù)肝細(xì)胞，還對(duì)小鼠的糖尿病有明顯的改善作用[12]。植物多酚的提取有多種方法，其中溶劑萃取法是最為原始的方法，但是因?yàn)楹臅r(shí)長(zhǎng)，且得率不穩(wěn)定，所用的有機(jī)溶劑易污染環(huán)境，已逐漸被新方法所淘汰。微波提取相對(duì)于溶劑萃取提取率高，無(wú)環(huán)境污染，且設(shè)備便宜，被廣泛應(yīng)用，但是使用時(shí)要注意安全問(wèn)題。超臨界流體萃取是新型的現(xiàn)代高效環(huán)保的提取方法，但是成本昂貴，不適宜用于工業(yè)化生產(chǎn)植物多酚[13]。相比之下，超聲波輔助提取因?yàn)椴僮鞣奖?，提取時(shí)間短且得率高穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，得到廣泛應(yīng)用。本文采用超聲波輔助技術(shù)提取番石榴多酚，通過(guò)試驗(yàn)優(yōu)化其提取的最佳工藝及條件，選用AB-8大孔樹(shù)脂純化，將純化后的番石榴多酚進(jìn)行抑菌活性研究，為番石榴多酚的綜合開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

番石榴，湖光農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)；沒(méi)食子酸、福林酚試劑、Na2CO3、無(wú)水乙醇(均為分析純)，廣州左克生物科技發(fā)展有限公司；營(yíng)養(yǎng)瓊脂、馬鈴薯葡萄瓊脂(PDA)，北京陸橋技術(shù)股份有限公司；AB-8大孔樹(shù)脂，廊坊圣泉化工有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

超聲波清洗器(KQ-500E)，昆山市超聲儀器有限公司；真空冷凍干燥機(jī)(LGJ-12)，廣州吉迪儀器有限公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(RE-3000B)，鞏義市宏華儀器設(shè)備工貿(mào)有限公司；循環(huán)水真空泵(SHZ-Ⅲ)，上海亞榮生化儀器廠；紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(U3900H)，天美科技有限公司；立式壓力蒸汽滅菌器(LDZX-50KBS)，上海申安醫(yī)療器械廠。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

按照文獻(xiàn)[14]報(bào)道的，稱(chēng)取沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品0.025 g，加入蒸餾水溶解，用500 mL容量瓶定容得質(zhì)量濃度為0.05 mg/mL沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。準(zhǔn)確吸取0、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8 mL沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液分別置于50 mL棕色容量瓶中，加入4 mL福林酚試劑，搖勻，加入4 mL的10% Na2CO3溶液，充分混勻后定容，室溫靜置反應(yīng)1 h，于760 nm波長(zhǎng)處測(cè)吸光度，不加沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液為空白對(duì)照組。以吸光度值(y)為縱坐標(biāo)，反應(yīng)體系中沒(méi)食子酸的質(zhì)量濃度(x)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，為y=0.120 4x-0.002 3，R2=0.998 5。

1.4 番石榴多酚含量的測(cè)定

選取新鮮番石榴切塊打漿并進(jìn)行真空冷凍干燥。干燥后，將其粉碎并過(guò)60目篩獲得所需的番石榴粉。準(zhǔn)確稱(chēng)取番石榴粉1 g于100 mL帶塞錐形瓶中，在一定提取條件下，用一定濃度的乙醇浸提番石榴多酚，提取液過(guò)濾，5 000 r/min離心7 min，吸上清液用一定濃度的乙醇定容到100 mL，再吸取1 mL定容后的溶液按照沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法測(cè)定番石榴多酚含量。根據(jù)公式(1)計(jì)算番石榴多酚得率：

(1)

式中：C1，被測(cè)溶液中多酚的質(zhì)量濃度，mg/mL；V1，被測(cè)溶液的體積，mL；N，稀釋的倍數(shù)；M，番石榴粉質(zhì)量，g。

1.5 番石榴多酚提取單因素試驗(yàn)

1.5.1 料液比的選擇

準(zhǔn)確稱(chēng)取1 g番石榴粉于帶塞100 mL錐形瓶中，按料液比1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35、1∶40 (g∶mL)加入50%(體積分?jǐn)?shù))乙醇溶液，在50 ℃超聲提取40 min。考察料液比對(duì)番石榴多酚得率的影響。

1.5.2 超聲提取溫度的選擇

準(zhǔn)確稱(chēng)取1 g番石榴粉于100 mL帶塞錐形瓶中，按料液比1∶20 (g∶mL)加入50%乙醇溶液，分別在30、40、50、60、70 ℃下超聲提取40 min?？疾斐曁崛囟葘?duì)番石榴多酚得率的影響。

1.5.3 超聲提取時(shí)間的選擇

準(zhǔn)確稱(chēng)取1 g番石榴粉于100 mL帶塞錐形瓶中，按料液比1∶20 (g∶mL)加入50%乙醇溶液，在50 ℃下分別超聲提取30、40、50、60、70 min?？疾斐曁崛r(shí)間對(duì)番石榴多酚得率的影響。

1.5.4 乙醇體積分?jǐn)?shù)的選擇

準(zhǔn)確稱(chēng)取1 g番石榴粉于100 mL帶塞錐形瓶中，按料液比1∶20 (g∶mL)分別加入30%、40%、50%、60%、70%、80%乙醇，在50 ℃下超聲提取40 min?？疾煲掖俭w積分?jǐn)?shù)對(duì)番石榴多酚得率的影響。

1.6 番石榴多酚提取響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)

在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選取乙醇體積分?jǐn)?shù)、超聲溫度、料液比和超聲提取時(shí)間為試驗(yàn)因素，設(shè)計(jì)4因素3水平試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 響應(yīng)面因素水平表Table 1 Response surface factor level table

1.7 番石榴多酚分離純化

采樣AB-8大孔樹(shù)脂濕法裝柱(柱子規(guī)格20 mm×600 mm，柱體積100 mL)，將番石榴多酚粗品配成1.2 mg/mL的上樣液過(guò)柱子進(jìn)行純化。純化條件：樣液pH為4，樣液流速1 mL/min，蒸餾水除雜，80%乙醇洗脫，洗脫流速2 mL/min，直至流出液體不含有多酚類(lèi)化合物[15]。將純化后收集的溶液濃縮干燥成粉末，測(cè)定番石榴多酚含量，根據(jù)公式(2)計(jì)算番石榴多酚純度：

(2)

式中：C2，為純化后收集液多酚的濃度，μg/mL；V2，為純化后收集液多酚的體積，mL；W多酚物干重，g。

1.8 番石榴多酚抑菌活性的測(cè)定

按照文獻(xiàn)[16]報(bào)道的，在無(wú)菌工作臺(tái)中從斜面培養(yǎng)基上挑取1環(huán)已活化好的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、黑曲霉以及假絲酵母菌體，分別接入30 mL生理鹽水中，充分搖勻，使各菌懸液的菌細(xì)胞數(shù)達(dá)到106～107CFU/mL備用，且菌懸液當(dāng)天使用。

將純化后的番石榴多酚用60%乙醇配制成質(zhì)量濃度為6 mg/mL溶液，利用二倍稀釋法配成6、3、1.5、0.75、0.375 mg/mL共5個(gè)濃度梯度的番石榴多酚溶液。將直徑為6 mm的無(wú)菌圓形濾紙片分別浸泡在不同濃度的多酚溶液，以及滅菌后的生理鹽水和60%乙醇溶液中120 min以上。

在無(wú)菌環(huán)境下，往培養(yǎng)皿中倒入10 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)基凝固成平板后，取1 mL菌懸液加入到平板中(細(xì)菌加入到營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，酵母和霉菌加入到PDA固體培養(yǎng)基)，用涂布棒使菌液均勻分布，不同菌種做好標(biāo)記。用無(wú)菌鑷子取出浸泡后圓形濾紙片，貼于平板中，把分別浸泡于不同濃度番石榴多酚溶液，生理鹽水和乙醇溶液的濾紙片做好標(biāo)記。將標(biāo)記好的平板在一定溫度下培養(yǎng)一段時(shí)間(金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌于37 ℃下培養(yǎng)24 h，黑曲霉和假絲酵母在28 ℃下培養(yǎng)48 h)，觀察菌體的生長(zhǎng)狀況，測(cè)量并記錄抑菌圈的直徑大小，每個(gè)樣品平行實(shí)驗(yàn)3次。根據(jù)抑菌圈的大小判斷抑菌活性的好壞，無(wú)抑菌圈的多酚濃度為其最低抑菌濃度(minimum inhitory concentration，MIC)，生理鹽水為空白組，60%乙醇溶液為對(duì)照組。

1.9 數(shù)據(jù)處理

單因素試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用OrigingPro 8進(jìn)行處理，帶標(biāo)準(zhǔn)偏差作圖。響應(yīng)面試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Design Expert 10中Box-Behnken組合法進(jìn)行處理分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 番石榴多酚提取單因素試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1.1 料液比對(duì)番石榴多酚提取率的影響

由圖1可知，隨著料液比的增大，多酚得率先上升后下降。可能是增大料液比，番石榴粉與溶劑的接觸面增大，多酚得率增加。當(dāng)料液比為1∶30(g∶mL)時(shí)多酚得率最高，然后隨著料液比的增大多酚得率下降?？赡苁钱?dāng)料液比為1∶30(g∶mL)時(shí)多酚物質(zhì)已經(jīng)基本被提取出來(lái)，再增加溶劑會(huì)讓番石榴多酚中其他雜質(zhì)被釋放出來(lái)，且料液比過(guò)大會(huì)浪費(fèi)溶劑。因此選用料液比為1∶25、1∶30、1∶35 (mg∶mL)做響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)。

a-水作溶劑;b-乙醇作溶劑圖1 料液比對(duì)多酚得率的影響Fig.1 Effect of feed-to-liquid ratio on polyphenol yield

2.1.2 提取時(shí)間對(duì)番石榴多酚提取率的影響

由圖2可知，隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，番石榴多酚得率上升。當(dāng)提取時(shí)間為60 min時(shí)，番石榴多酚得率達(dá)到最大值，然后隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，番石榴多酚得率下降。可能是開(kāi)始隨著提取時(shí)間延長(zhǎng)，番石榴多酚逐漸從組織中被釋放出來(lái)，但隨著提取時(shí)間的不斷延長(zhǎng)，多酚物質(zhì)已經(jīng)基本被提取出來(lái)，且在提取過(guò)程中多酚與空氣接觸，被氧化破壞，多糖等其他物質(zhì)也會(huì)被提取出來(lái)，導(dǎo)致多酚得率降低。因此選擇提取時(shí)間為50、60、70 min做響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)。

a-水作溶劑;b-乙醇作溶劑圖2 提取時(shí)間對(duì)多酚得率的影響Fig.2 Effect of extraction time on multi-part yield

2.1.3 提取溫度對(duì)番石榴多酚提取率的影響

由圖3可知，隨著提取溫度的升高，番石榴多酚得率升高。當(dāng)溫度提取為50 ℃時(shí)番石榴多酚得率達(dá)到最大值，然后隨著提取溫度的繼續(xù)上升，番石榴多酚得率下降?？赡苁请S著提取溫度的升高可促使多酚與蛋白質(zhì)等物質(zhì)結(jié)合穩(wěn)定性下降，從細(xì)胞中釋放出來(lái)，但是溫度過(guò)高也會(huì)導(dǎo)致多酚被氧化或者降解[17]。因此選擇提取溫度為40、50、60 ℃做響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)。

a-水作溶劑;b-乙醇作溶劑圖3 提取溫度對(duì)多酚得率的影響Fig.3 Effect of extraction temperature on polyphenol yield

2.1.4 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)番石榴多酚提取率的影響

由圖4可知，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增加，番石榴多酚得率上升。乙醇體積分?jǐn)?shù)為50%時(shí)番石榴多酚提取率最高，然后隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的繼續(xù)增加，多酚得率下降。推測(cè)是體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇與番石榴組織內(nèi)多酚極性相近，有利于番石榴多酚被提取出細(xì)胞外，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)繼續(xù)增加，溶劑極性增大，葉綠素等雜質(zhì)更容易被釋放，導(dǎo)致多酚得率降低[18]。因此選擇乙醇體積分?jǐn)?shù)為40%、50%、60%做響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)。

圖4 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)多酚得率的影響Fig.4 Effect of ethanol concentration on polyphenol yield

綜合以上分析可知，在單因素試驗(yàn)中，水與乙醇分別作為提取溶劑，其他提取條件相同，乙醇作為提取溶劑實(shí)驗(yàn)組多酚得率最大值均高于水提取溶劑實(shí)驗(yàn)組，因此選擇乙醇作提取溶劑進(jìn)行響應(yīng)面試驗(yàn)。

2.2 番石榴多酚提取響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.2.1 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果與分析

對(duì)表2數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，得到番石榴多酚得率(Y)對(duì)自變量乙醇體積分?jǐn)?shù)(A)，料液比(B)，提取時(shí)間(C)，提取溫度(D)四個(gè)因素的二次多項(xiàng)回歸方程為：

表2 響應(yīng)面結(jié)果Table 2 the results of response surface

Y=-74.450 8+0.855 9A+1.409 0B+0.733 0C+0.740 6D+0.001 2AB-0.002 1AC+0.000 6AD-0.003 4BC-0.002 3CD+0.001 5BD-0.007 8A2-0.018 2B2-0.005 0C2-0.007 8D2

根據(jù)方差分析表3中F值和P值可以判斷各因素對(duì)番石榴多酚得率的影響：料液比(B)>提取溫度(D)>乙醇濃度(A)>提取時(shí)間(C)。各因素中A、B、D對(duì)番石榴多酚得率影響達(dá)到極顯著水平，自變量C以及交互項(xiàng)AB、AD、BD、CD對(duì)番石榴多酚得率影響不顯著，交互項(xiàng)AC、BC對(duì)番石榴多酚得率影響顯著，二次項(xiàng)A2、B2、C2、D2均對(duì)多酚得率影響極顯著。

表3 響應(yīng)面回歸模型方差分析表Table 3 Response surface regression model variance analysis table

2.2.2 響應(yīng)面試驗(yàn)各因素交互作用分析

各因素對(duì)番石榴多酚得率影響的響應(yīng)面曲線圖和等高線圖如圖5所示。由圖5-a和圖5-b可知，響應(yīng)面圖中乙醇體積分?jǐn)?shù)和料液比曲線比較陡且存在最高點(diǎn)，此外，其等高線呈橢圓形，這說(shuō)明乙醇體積分?jǐn)?shù)和料液比對(duì)多酚得率都有較大的影響，兩者之間的交互作用對(duì)多酚得率的影響較大。圖5-c和圖5-d為乙醇體積分?jǐn)?shù)和提取時(shí)間交互作用對(duì)番石榴多酚得率影響的響應(yīng)面曲線圖和等高線圖。隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)和提取時(shí)間的增加，乙醇體積分?jǐn)?shù)和提取時(shí)間曲線比較陡且存在最高點(diǎn)，等高線為橢圓形，說(shuō)明乙醇體積分?jǐn)?shù)和提取時(shí)間對(duì)多酚得率都有較大的影響，兩者之間的交互作用對(duì)多酚得率的影響較大。如圖5-e和圖5-f所示，響應(yīng)面圖中乙醇體積分?jǐn)?shù)和提取溫度曲線存在頂點(diǎn)，但等高線為圓形，這說(shuō)明乙醇體積分?jǐn)?shù)和提取時(shí)間的交互作用對(duì)多酚得率的影響不大。料液比和提取時(shí)間對(duì)番石榴多酚得率影響的響應(yīng)面曲線和等高線如圖5-g和圖5-h所示，曲線比較陡且存在最高點(diǎn)，等高線呈橢圓形，說(shuō)明料液比和提取時(shí)間對(duì)多酚得率都有較大的影響，兩者之間的交互作用對(duì)多酚得率的影響較大。圖5-i和圖5-j為料液比和提取溫度對(duì)番石榴多酚得率影響的響應(yīng)面曲線圖和等高線圖，由圖可知，曲線比較陡且存在最高點(diǎn)，等高線呈橢圓形，說(shuō)明料液比和提取溫度對(duì)多酚得率都有較大的影響，兩者之間的交互作用對(duì)多酚得率的影響較大。由圖5-k和圖5-l可知，響應(yīng)面中提取時(shí)間和提取溫度曲線比較陡，存在最高點(diǎn)，并且等高線呈橢圓形，這說(shuō)明提取時(shí)間和提取溫度對(duì)多酚得率都有較大的影響，兩者之間的交互作用對(duì)多酚得率的影響較大。

圖5 各因素交互作用對(duì)番石榴多酚得率的等高線和響應(yīng)面Fig.5 Contour line and response surface of guava polyphenol yield by interaction of various factors

利用Design Expert 10.0 預(yù)測(cè)得到番石榴多酚提取的最佳工藝條件為：乙醇體積分?jǐn)?shù)為50.98%，料液比為1∶31.59，提取時(shí)間為60.05 min，提取溫度為50.73 ℃。在此工藝條件下，番石榴多酚得率為10.40 mg/g。

2.3 最佳提取工藝及驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

通過(guò)整理分析得出的番石榴多酚最佳工藝條件將最佳提取工藝條件確定為乙醇體積分?jǐn)?shù)51%，料液比1∶32，提取時(shí)間60 min，提取溫度51 ℃。對(duì)最佳提取工藝條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次，得到番石榴多酚平均得率為10.31 mg/g，與模型預(yù)測(cè)值誤差為0.865%，說(shuō)明該模型較準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)番石榴多酚實(shí)際得率。

2.4 大孔樹(shù)脂純化結(jié)果與分析

番石榴多酚粗品純度為1.2%，經(jīng)AB-8大孔樹(shù)脂純化后番石榴多酚純度達(dá)到33.2%，嘗試將番石榴多酚液體過(guò)XAD-16大孔樹(shù)脂純化[19]，嘗試結(jié)合金屬離子沉淀法[20]以及利用聚酰胺樹(shù)脂進(jìn)行二次純化[21]，均不能提高番石榴多酚純度，原因可能是番石榴多酚進(jìn)行一次純化后被提取出來(lái)，進(jìn)行二次純化暴露時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，難免與空氣中氧氣接觸，番石榴多酚被氧化降解。

2.5 抑菌活性測(cè)定結(jié)果

番石榴多酚表現(xiàn)出抑菌效果可能因?yàn)槎喾右种凭w體內(nèi)某些酶的合成，影響其代謝，也可能是多酚物質(zhì)與蛋白質(zhì)結(jié)合，或者與其他微生物生長(zhǎng)必須物質(zhì)結(jié)合，導(dǎo)致微生物死亡等[22]。由表4可知，番石榴多酚對(duì)枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌以及大腸桿菌有抑菌作用，且高濃度多酚溶液抑菌效果更強(qiáng)。番石榴多酚對(duì)金黃色葡萄球菌抑菌效果最好，在同濃度多酚溶液中抑菌圈最大，其次是枯草芽孢桿菌，對(duì)大腸桿菌的抑制效果相對(duì)于前2種較弱?？莶菅挎邨U菌以及金黃色葡萄球菌的MIC為1.5 mg/mL，對(duì)應(yīng)抑菌圈分別為(7.54±0.06) mm，(7.87±0.05) mm。大腸桿菌MIC為3 mg/mL，對(duì)應(yīng)抑菌圈大小為(7.68±0.04) mm。然而，6 mg/mL的番石榴多酚對(duì)黑曲霉和假絲酵母沒(méi)有抑菌作用，可能的原因是6 mg/mL的濃度未達(dá)到它們的最低抑菌濃度，當(dāng)實(shí)驗(yàn)濃度超過(guò)它們的最低抑菌濃度時(shí)，也會(huì)有一定的抑菌作用。孔陽(yáng)等[23]的研究顯示，當(dāng)石榴皮粗提物的質(zhì)量濃度為20 mg/mL時(shí)，黑曲霉和假絲酵母的抑菌圈分別為6.0 mm 和16.0 mm。

表4 番石榴多酚抑菌活性測(cè)定結(jié)果 單位：mm

通常情況下，番石榴多酚對(duì)革蘭氏陽(yáng)性(G+)菌的抑制作用比對(duì)革蘭氏陰性(G-)菌的抑制作用強(qiáng)。鄺高波[24]的研究發(fā)現(xiàn)番石榴多酚對(duì)G+菌的抑制作用明顯高于對(duì)G-的抑制作用。梁清蓉[25]研究發(fā)現(xiàn)番石榴葉酚類(lèi)對(duì)G+菌的抑制作用明顯比G-菌的抑制作用強(qiáng)。本研究的結(jié)果與以上兩個(gè)研究小組的結(jié)果相似，番石榴多酚對(duì)2株G+菌的MIC為1.5 mg/mL，對(duì)1株G-菌的MIC為3 mg/mL，說(shuō)明番石榴多酚對(duì)G+菌的抑菌作用優(yōu)于G-菌。這歸因于番石榴多酚能特異性地凝固細(xì)菌蛋白、破壞細(xì)菌細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，與細(xì)菌遺傳物質(zhì)DNA結(jié)合，從而抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)[26-27]。

3 結(jié)論

通過(guò)單因素和響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)探索番石榴多酚提取工藝，得到其最佳提取工藝條件：乙醇體積分?jǐn)?shù)為51%，料液比為1∶32(g∶mL)，提取時(shí)間為60 min，提取溫度為51 ℃。在此工藝條件下，番石榴多酚得率為10.31 mg/g。利用AB-8大孔樹(shù)脂對(duì)番石榴多酚粗品進(jìn)行分離純化，番石榴多酚純度由1.2%提高到33.2%，提高了27.7倍。通過(guò)番石榴多酚抑菌活性測(cè)定分析，發(fā)現(xiàn)番石榴多酚對(duì)大腸桿菌，枯草芽孢桿菌及金黃色葡萄球菌具有抑制作用，它們的MIC分別為3、1.5、1.5 mg/mL，但是對(duì)假絲酵母和黑曲霉無(wú)抑菌作用。研究表明，番石榴多酚具有抑菌作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，下一步將研究番石榴多酚對(duì)食品的保鮮應(yīng)用。本文可為番石榴的開(kāi)發(fā)利用拓展范圍，以及提高番石榴的綜合利用率，增加番石榴的綜合利用價(jià)值，同時(shí)為研發(fā)天然多酚的抑菌藥物提供理論基礎(chǔ)。