牟紅梅 于強(qiáng) 李慶余 姜福東 王義菊 張述華 李元軍*

（1山東省煙臺(tái)市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，煙臺(tái)265500；2煙臺(tái)市芝罘區(qū)黃務(wù)街道辦事處，煙臺(tái)264004）

近年來由于病毒病嚴(yán)重，導(dǎo)致萊陽茌梨樹勢(shì)衰弱，果實(shí)品質(zhì)下降。利用組織培養(yǎng)可在短時(shí)間內(nèi)獲得大量再生植株，再通過脫毒技術(shù)可獲得萊陽茌梨脫毒苗木。

1 材料與方法

1.1 材料消毒

春季取萊陽茌梨當(dāng)年生幼嫩枝條，迅速帶回實(shí)驗(yàn)室，去掉葉片，放入三角瓶?jī)?nèi)，加入洗潔精洗滌，在流動(dòng)的自來水下沖洗2 h，剪取3～4 cm帶芽莖段，75%酒精消毒40 s，HgCl2消毒設(shè)3個(gè)處理，每處理10瓶，每瓶接種4個(gè)外植體。將單芽莖段轉(zhuǎn)入MS培養(yǎng)基中進(jìn)行啟動(dòng)培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為溫度 25±2 ℃、光照 14 h/d、光強(qiáng) 2 000 lx。

1.2 繼代培養(yǎng)

切取2 cm初代培養(yǎng)嫩梢并轉(zhuǎn)移至繼代增殖培養(yǎng)基，40 d后統(tǒng)計(jì)增殖倍數(shù)和嫩梢長(zhǎng)度，調(diào)查組培苗生長(zhǎng)狀況。正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)以6-BA、IBA等兩因素為參選因素，共設(shè)6個(gè)處理。每個(gè)處理10瓶，每瓶接種4個(gè)外植體。

2 結(jié)果與分析

2.1 滅菌時(shí)間對(duì)萊陽茌梨的影響

滅菌的萊陽茌梨入瓶后，部分會(huì)出現(xiàn)褐化現(xiàn)象，消毒時(shí)間不同，褐化程度也會(huì)不同。其中，酒精消毒時(shí)間30～45 s，對(duì)植株的污染率及成活率影響相對(duì)較小，而HgCl2處理時(shí)間的長(zhǎng)短對(duì)植株無菌體系的建立起重要作用。

表1 HgCl2處理時(shí)間對(duì)萊陽茌梨死亡率及污染率的影響

由表1知，HgCl2處理時(shí)間6 min時(shí)，植株的死亡率低（22.5%），但污染率高（15.0%），隨著HgCl2處理時(shí)間增加，雖然污染率降低，但植株死亡率迅速增加，綜合試驗(yàn)得出：萊陽茌梨適宜的消毒時(shí)間為6 min。

2.2 不同濃度6-BA和IBA對(duì)萊陽茌梨增殖培養(yǎng)的影響

由表2知，6個(gè)處理中，處理3的增殖系數(shù)最高，為3.3；處理2的莖節(jié)間的平均伸長(zhǎng)量最長(zhǎng)，綜合考慮后期進(jìn)行生根與移栽馴化，萊陽茌梨組培快繁最適宜的增殖培養(yǎng)基為處理3。

表2 不同激素濃度配比對(duì)萊陽茌梨增殖培養(yǎng)的影響

3 結(jié)論

本試驗(yàn)通過對(duì)比萊陽茌梨在不同濃度6-BA和IBA的培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況，篩選出其最適增殖培養(yǎng)基配方為MS+0.2 mg/L IBA+1.0 mg/L 6-BA，外植體滅菌采用0.1%HgCl2滅菌6 min為宜。