邱榮榮，朱 娟，王亞芬

（常州制藥廠有限公司，江蘇常州 213000）

卡托普利（captopril）是首個人工合成口服有效的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑，已廣泛應(yīng)用臨床，主要用于高血壓、充血性心力衰竭、心肌梗死、腎功能障礙等。盡管在各國藥典[1-3]均有收載，但檢測方法均存在一些不足，在前期研究過程[1-7]中發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)有三種藥典檢測方法都不能很好分離本文確定的8個已知雜質(zhì)（雜質(zhì)A，C，G，H，I，J，M，N），都存在分析時間較長、分離度較差、峰型較差等問題。查閱文獻(xiàn)，參考?xì)W洲藥典并結(jié)合目前藥品快速檢驗技術(shù)不斷更新和檢驗效率要求[1-7]，開發(fā)了超高效液相色譜法（UPLC）測定方法。本論文建立的UPLC方法操作簡便、結(jié)果準(zhǔn)確，分離度好、重復(fù)性好，分析效率高。

1 儀器與試藥

Waters Aquity UPLC H-class超高壓液相色譜儀，Empower3 軟件；METTLER TOLEDO XP205DR電子天平；卡托普利原料藥（常州制藥廠有限公司，批號C170704）；卡托普利對照品（中檢所，批號100318-201103）及雜質(zhì)A，C，I，G，H，J，M，N對照品（常州制藥廠有限公司）；乙腈為色譜純；磷酸為分析純；水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Waters Acquity UPLC BEH（2.1mm×100mm 1.7 μm）；流動相：以1 000mL水中加入0.3mL磷酸混勻為流動相A，以500mL水加入500mL乙腈加入0.3mL磷酸混勻為流動相B；以900mL水加入100mL乙腈加入0.3mL磷酸混勻為稀釋液；進(jìn)行梯度洗脫（見表1）；流速0.43mL/min；檢測波長210nm；柱溫50℃；樣品室溫度5℃；進(jìn)樣量1.8μL。

表1 流動相洗脫梯度

2.2 溶液的制備

稱取卡托普利雜質(zhì)A對照品10mg，置于20mL容量瓶中加稀釋液溶解定容稀釋至刻度搖勻；稱取卡托普利雜質(zhì)C，I，G，H，J，M，N各10mg，置于同一200mL量瓶中加稀釋液溶解稀釋至刻度搖勻；稱取30mg卡托普利對照品置于10mL量瓶中加上述雜質(zhì)溶液各1mL再加稀釋液稀釋至刻度，搖勻作為系統(tǒng)適應(yīng)性溶液；稱取卡托普利樣品約125mg于25mL容量瓶中，加稀釋液溶解并稀釋至刻度，搖勻作為供試品溶液；量取1mL供試品溶液置于100mL量瓶中，加稀釋液稀釋至刻度，搖勻。再量取1mL于10mL量瓶中，加稀釋液稀釋至刻度，搖勻作為對照溶液。

2.3 專屬性試驗

取系統(tǒng)適應(yīng)性溶液照“2.1”項色譜條件進(jìn)樣分析，系統(tǒng)適應(yīng)性圖譜見圖1。結(jié)果表明，卡托普利主峰與各雜質(zhì)峰均能達(dá)到良好的分離，各色譜峰間的分離度可達(dá)到4.5以上。

圖1 系統(tǒng)適應(yīng)性圖譜

2.4 降解實驗

稱取本品125mg共9份，分別置25mL量瓶中，分別進(jìn)行酸破壞（加4mL的0.5mol/LHCl溶液，放置2h，加0.5mol/LNaOH溶液4mL調(diào)pH至中性）、堿破壞（加4mL的0.5mol/LNaOH溶液，放置2h，加0.5mol/LHCl溶液4mL調(diào)pH至中性）、氧化破壞（加2mL 3%雙氧水放置2h）、光照破壞（置于4500LUX±500LUX下光照12d）、高溫破壞（置于100℃中放置4h）、高濕破壞（置濕度RH92.5%中放置14d）和未破壞均加稀釋液溶解并稀釋至刻度，搖勻作為降解供試品溶液。照“2.1”項下色譜條件測定上述溶液。降解實驗結(jié)果：卡托普利與各雜質(zhì)峰（降解雜質(zhì)峰）均能達(dá)到良好的分離，峰純度均符合要求（峰純度閾值大于峰純度角值），且質(zhì)量保持平衡，能夠有效檢測樣品中的降解產(chǎn)物，氧化破壞雜質(zhì)A，G和特定未知雜質(zhì)增長較大，酸、堿、高溫破壞雜質(zhì)A和特定未知雜質(zhì)略有增長，其他破壞影響較小。

2.5 線性與校正因子

稱取卡托普利及雜質(zhì)C，I，G，H，J，M，N對照品各10mg置于同一200mL量瓶中加稀釋液溶解并稀釋至刻度搖勻，分別移取0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、2.0mL置于10mL量瓶稀釋液至刻度搖勻作為混合線性溶液；稱取雜質(zhì)A對照品25mg置于50mL量瓶中加稀釋液溶解稀釋至刻度搖勻，分別移取0.1、0.5、1.0、3.0、5.0、10.0mL置于100mL量瓶加稀釋液至刻度搖勻作為雜質(zhì)A線性溶液。照“2.1”項下色譜條件測定上述溶液，由濃度（μg/mL）對峰面積做線性回歸方程及校正因子，卡托普利和各雜質(zhì)A，C，I，G，H，J，M，N線性方程分別為Y=7 823.532 6X、Y=7 540.8X-156.3、Y=1 404.6X-22.6、Y= 7 002.0X+56.3、Y=1 411.9X+94.6、Y=4 189.27X-56.5、Y= 6 639.8X-264.5、Y=5 050.1X-319.4、Y=1 792.5X-150.2；相關(guān)系數(shù)均大于0.999 5，在相應(yīng)濃度范圍內(nèi)線性良好；校正因子分別為1.0、5.6、1.1、5.5、1.9、1.2、1.6、4.4。

2.6 回收率試驗

稱取雜質(zhì)A對照品25mg置于50mL量瓶中，加稀釋液溶解并稀釋至刻度，搖勻作為回收率貯備液①；稱取雜質(zhì)C，I，G，H，J，M，N對照品各10mg于200mL量瓶中，加稀釋液溶解并稀釋至刻度，搖勻作為回收率貯備液②。稱取卡托普利樣品100mg共12份，分別置于20mL量瓶中，分別加入0.1mL貯備溶液①和1.0mL貯備液②平行3份；1.0mL貯備溶液①及2.0mL貯備液②平行3份；2.0mL貯備溶液①及3.0mL貯備液②平行3份；2.4mL貯備溶液①及4.0mL貯備液②平行3份加稀釋液溶解并稀釋至刻度，搖勻作為回收率供試品溶液。照“2.1”項下色譜條件測定上述12份溶液，計算各雜質(zhì)A，C，I，G，H，J，M，N回收率分別為96.6%、104.2%、90.4%、101.5%、101.1%、101.8%、92.5%、99.9%和RSD分別為3.2%、2.6%、3.9%、4.3%、1.3%、1.8%、6.5%、10.1%，表明本方法雜質(zhì)回收率好。

2.7 檢測限和定量限

精密稱取卡托普利及雜質(zhì)A，C，I，G，H，J，M，N對照品各10mg分別置于20mL量瓶中加稀釋液溶解稀釋至刻度搖勻，精密移取相應(yīng)溶液適量，用稀釋液逐級稀釋，照“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣分析，按信噪比S/N=10計算定量限0.38、0.32、0.53、0.36、0.64、0.95、0.91、0.58、2.33μg/mL均 低于相當(dāng)于主成分0.05%限度水平，且連續(xù)6針峰面積RSD均小于5.0%；按信噪比S/N=3計算檢測限分別為0.13、0.10、0.17、0.12、0.21、0.31、0.30、0.19、0.77μg/mL均低于相當(dāng)于主成品0.02%限度水平。

2.8 穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液，于儀器樣品室中（5℃）條件下，分別于0、4、8、12、18、24h，照“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣分析，試驗結(jié)果供試品溶液8h內(nèi)較為穩(wěn)定（雜質(zhì)A隨置時間有很小幅度增長，由0h的0.06%增長至8h的0.08%，峰面積的RSD%小于10%）。

2.9 耐用性考察

根據(jù)“2.1”項下色譜條件，分別改變柱溫（48、52℃）、流速（0.41、0.45mL/min）、波長（208、212nm）、流動相A中磷酸加入量（0.02、0.04%）和流動相B中乙腈與水的比例（48∶52、52∶48）進(jìn)行系統(tǒng)適應(yīng)性溶液試驗，結(jié)果表明上述色譜條件下，卡托普利與各雜質(zhì)峰間均能達(dá)到較好分離，其參數(shù)的微小變化不影響檢測，表明本方法耐用性較好。

3 結(jié)語

本文UPLC法測定卡托普利原料藥有關(guān)物質(zhì)，各雜質(zhì)分離效果好、線性好、重復(fù)性好、準(zhǔn)確度高、回收率好。與HPLC法比，UPLC法分析時間短、分離效率高、檢出能力強(qiáng)、溶劑用量少，可用于卡托普利原料藥有關(guān)物質(zhì)的質(zhì)量控制。