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摘要：以蕎麥莖為原料，采用正交試驗研究多酚和蘆丁的最佳提取工藝。結果表明，采用丙酮為提取劑時多酚和總黃酮的得率最大，提取2次提取率可達93.7%；總黃酮與多酚類物質的最佳提取工藝一致，丙酮體積分數50%、料液比1∶30（g∶mL）、提取溫度55℃、提取時間25min；多酚得率為13.87mg/g，總黃酮得率2.05mg/g。

關鍵詞：蕎麥莖；多酚；總黃酮；提取工藝

蕎麥（buckwheat）是蓼科（polygonaceae）蕎麥屬（Fagopyrum）植物，是一種生育期短、耐貧瘠、適應性廣泛的雜糧作物，在世界范圍內廣泛種植[1]。但是長期以來，蕎麥僅用于傳統(tǒng)食品加工生產，其莖葉被作為飼料和稈肥，甚至丟棄處理，未得到高價值利用[2]。

蕎麥含有多酚類、黃酮類等天然活性成分，研究表明植物多酚具有抗腫瘤、抑菌和抗氧化等眾多生理活性。以蘆?。╮utin）為代表的黃酮類化合物，具有獨特的保健功能，可用于治療毛細血管的脆性和滲透性出血，降低血脂和膽固醇，有抗菌和抗輻射作用；可用于防治高血壓、腦溢血、糖尿病、視網膜出血和出血性紫癜等，也可用作食品抗氧化劑和色素。蘆丁可直接作為藥品，或作為藥物的中間體，用于食品和化妝品領域[3-5]。

采用溶劑提取法從蕎麥莖中提取具有保健和藥用價值的功能成分，優(yōu)化提取工藝對于蕎麥莖的高價值利用具有重要意義。

1 試驗與方法

1.1 材料與試劑

試驗材料：蕎麥莖，于十月份采自咸陽旬邑縣，干燥粉碎后過60目篩。

試驗試劑：Folin-Ciocalteu試劑、沒食子酸、蘆丁、AlCl3、甲醇、丙酮、乙醇，均為分析純；20%碳酸鈉、5%NaNO2溶液、70%乙醇、10%Al（NO3）3溶液、4%NaOH溶液；蘆丁對照品：精密稱取10mg蘆丁標準品用無水乙醇溶解后，再用60%乙醇定容至50ml容量瓶中。

1.2 試驗儀器

儀器設備：752型紫外可見分光光度計，上海光譜儀器有限公司；KQ-250DB型數控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；HHW-21CU-600電熱恒溫水槽，上海?，攲嶒炘O備有限公司；JYL-C010九陽料理機；震蕩儀，海門市其林貝爾儀器制造有限公司；離心機，江蘇保慶分析設備廠；MHE-150型數顯鼓風干燥箱，上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠；ME204電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；移液槍。

1.3 試驗方法

1.3.1 提取工藝

將新鮮蕎麥莖自然陰干，粉碎后過60目篩，冰箱4 ℃條件下保存，待用。

1.3.2 總酚含量測定

1）沒食子酸標準曲線制作

參考文獻[6]并做適當修改。稱取0.500g沒食子酸，用水溶解，定容至100mL，以此母液配制質量濃度為10、20、30、40、50、60mg/L的系列標準溶液，分別吸取系列標準溶液1mL于10mL離心管中，加入10%Folin-Ciocalteu顯色劑5mL，混勻，3-8min內各加入7.5%碳酸鈉溶液4mL，混勻，在室溫條件下避光放置1h。用紫外-可見分光光度計測定在765nm下的吸光值（A），平行測定3次，繪制標準曲線。

2）樣品吸光度測定

準確吸取1mL稀釋一定倍數后的試液，轉移至10mL離心管中，加入10%Folin-Ciocalteu顯色劑5mL，混勻，3-8min內各加入7.5%碳酸鈉溶液4mL，混勻，在室溫條件下避光放置1h。用紫外-可見分光光度計測定在765nm下的吸光值（A），平行測定3次。

3）總酚含量計算

W為多酚含量（%），c為多酚質量濃度（mg/ mL），v為提取液體積，n為稀釋倍數，M為蕎麥莖樣品質量。

1.3.3 總黃酮含量測定

1）蘆丁標準曲線的制作

參考文獻[1]并做適當修改。分別吸取0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL蘆丁對照品溶液于25mL容量瓶中，加水至6mL，加入4mL5%的NaNO2，搖勻靜置6min后再加入1mL10% Al（NO3）3，搖勻靜置6min，再加10ml4%的NaOH，加水至刻度，搖勻后靜置15min。在紫外分光光度計510nm處測定其吸光值，平行測定3次。以吸光度（A）為橫坐標，濃度（C）為縱坐標，繪制標準曲線。

2）樣品吸光度的測定

吸取3mL稀釋一定濃度后的提取液置于25mL容量瓶中，步驟同上，平行測定3次。

3）黃酮含量計算

W為黃酮含量（%），c為黃酮質量濃度（mg/ mL），v為提取液體積，n為稀釋倍數，M為蕎麥莖樣品質量。

1.4 提取溶劑的選擇

稱取4份蕎麥莖粉末各0.2g，溶劑分別為乙醇、甲醇、丙酮、水；體積分數65%，料液比1∶20，提取溫度55℃，提取時間1h，提取2次；各處理重復3次。

1.5 單因素試驗

選定料液比、提取溫度、體積分數、提取時間四個可能影響提取效果的因素，分別以總酚、總黃酮得率為考察指標，優(yōu)選合適的提取條件。

1.5.1 體積分數對總酚、總黃酮提取的影響

稱取6份蕎麥莖粉末各0.2g，按照料液比1∶20，提取溫度55℃，水浴時間1h，提取2次；丙酮體積分數分別為40%、50%、60%、70%、80%、90%；平行處理3次。

1.5.2 料液比對總酚、總黃酮提取的影響

稱取6份蕎麥莖粉末各0.2g，按照丙酮體積分數 60%，提取溫度55℃，水浴時間1h，提取2次；料液比分別為1∶10，1∶15，1∶20，1∶25，1∶30，1∶35；平行處理3次。

1.5.3 提取溫度對總酚、總黃酮提取的影響

稱取6份蕎麥莖粉末各0.2g，按照丙酮體積分數60%，料液比1∶25，水浴時間1h，提取2次；溫度分別為35、45、55、65、75、85℃，平行處理3次。

1.5.4 提取時間對總酚、總黃酮提取的影響

經過多次試驗摸索，選擇稱取5份蕎麥莖粉末各0.2g，按丙酮體積分數60%，料液比1∶25，55℃，提取2次；時間分別為2、5、15、25、40min，平行處理3次。

1.6 提取次數的選擇

稱取4份蕎麥莖粉末0.2g，丙酮體積分數60%，料液比1∶25，55℃條件下，15min/次，分別提取1、2、3、4次，各處理重復3次。

1.7 正交試驗設計

根據單因素試驗結果，選取體積分數（A）、料液比（B）、提取溫度（C）、提取時間（D）四個因素，4因素3水平正交試驗設計見表1，分別以總酚、總黃酮得率為響應值，平行3次。

2 結果與分析

2.1 沒食子酸標準曲線

由圖1可知，沒食子酸標準曲線方程為y = 0.0093x + 0.0275，R2 = 0.9997。

2.2 蘆丁標準曲線

由圖2可知，蘆丁標準曲線方程為y = 0.0116x -0.0241，R2 = 0.9998。可以看出，蘆丁標準曲線的回歸性較好，能夠較準確地擬合出真實數據。

2.3 提取溶劑的選擇

由圖3、圖4可知，蕎麥莖中總酚、總黃酮得率均以丙酮為提取溶劑時得率最高，故選擇丙酮作為提取溶劑進行后續(xù)試驗。

2.4 單因素試驗結果

2.4.1 體積分數對總酚、總黃酮提取的影響

由圖5、圖6可知，隨著丙酮體積分數增加，蕎麥莖中總酚、總黃酮的得率均出現先升高后降低的趨勢，在丙酮體積分數60%時得率達到最高，故選擇丙酮體積分數60%作為正交試驗中心條件。

2.4.2 料液比對總酚、總黃酮提取的影響

由圖7、圖8可知，總酚、總黃酮得率隨料液比增加呈現快速增長后趨于平緩，或者有所降低，在料液比1∶25時，二者得率均達到最高。所以，選擇料液比1∶25作為后續(xù)試驗的中心條件。

2.4.3 提取溫度對總酚、總黃酮提取的影響

由圖9、圖10可知，隨著溫度的升高，總酚和黃酮類化合物的得率均先升高后降低，在提取溫度達到55℃時，得率較高。因此，選擇55℃作為優(yōu)化試驗的中心溫度。

2.4.4 提取時間對總酚、總黃酮提取的影響

由圖11、圖12可知，在其他條件一定的情況下，15min內隨著浸提時間的增加，蕎麥莖總酚和總黃酮的得率逐漸增加，15min以后有所下降或者基本持平，故選擇15min作為優(yōu)化試驗的中心提取時間。

2.5 提取次數的選擇

由圖13、圖14可知，第1次提取時，蕎麥莖中酚類和黃酮類物質溶出率較低，造成此類生物活性物質的大量浪費，進行2次提取后，二者提取率均可達93.7%以上。提取次數增加可以提高得率，但提高幅度很小，綜合考慮經濟及環(huán)保因素，選擇提取2次較為合適。

2.6 正交優(yōu)化試驗結果

正交優(yōu)化試驗設計與結果見表2，K分析針對總酚含量，T分析針對總黃酮含量，所用方法均為極差分析。

蕎麥莖中總酚得率的影響因素是A>B>C>D，最優(yōu)條件是A1B3C2D3。即：丙酮體積分數對總酚得率的影響最大。正交試驗得出的最優(yōu)條件是：選擇丙酮為提取劑，提取2次，丙酮體積分數50%、料液比1∶30、提取溫度55℃、提取時間25min?？傸S酮得率的影響因素是B>C>A>D，最優(yōu)條件為A1B3C2D3。即：料液比對總黃酮得率的影響最大，正交最優(yōu)條件與總酚相同。

3 結論

采用溶劑法提取蕎麥莖中的多酚和黃酮類物質，以丙酮為溶劑對于蕎麥莖中酚類和黃酮類物質的浸出效果最好，提取2次多酚和總黃酮的提取率即可達到93.7%以上。各因素對多酚得率的影響大小依次為：體積分數>料液比>提取溫度>提取時間；各因素對總黃酮得率的影響大小依次為：料液比>提取溫度>體積分數>提取時間。正交試驗優(yōu)化的多酚和黃酮類物質提取工藝參數為：丙酮體積分數50%、料液比1∶30、提取溫度55℃、提取時間25min，在此條件下，多酚提取得率達13.87mg/g，總黃酮提取得率為2.05mg/g。該提取工藝，多酚和黃酮類物質得率高，工藝穩(wěn)定，可為蕎麥莖資源的深度利用提供理論依據。

參考文獻

[1] 臧小云，劉麗萍，蔡慶生.不同供氮水平對蕎麥莖葉中黃酮含量的影響[J].南京農業(yè)大學學報，2006，29（3）：28-32.

[2] 李白存.響應面法優(yōu)化蕎麥莖中蘆丁的提取工藝[J].化學與生物工程，2016，33（10），39-44

[3] 周小理，周一鳴，田呈瑞.蕎麥蘆丁提取純化及定量分析方法的研究進展[J].食品工業(yè)，2007，（3）：20-22.

[4] 穆志新，田翔，周建萍，等.高效液相色譜法測定蕎麥中蘆丁含量[J].山西農業(yè)科學，2015，43（11）：1408-1410.

[5] 雷昌貴，孟宇竹，劉蒙佳等.食品中多酚類化合物測定方法研究進展[J].糧油食品科技，2007，15（4）：61-63.

[6] 李健，楊昌鵬，李群梅等.植物多酚的應用研究進展[J].廣西輕工業(yè)，2008，24（12）：1-3+9.