熊子明

生化檢驗是醫(yī)學(xué)檢驗的重要內(nèi)容，定量檢測是其顯著特征。很多人認(rèn)為，生化檢驗中，只要使用先進儀器設(shè)備，配合合格試劑，由有資質(zhì)的人進行操作，便可很好地開展生化檢驗工作。其實，生化檢驗并不是你想的那么簡單。生化檢驗中存在諸多影響因素，稍有差池，便可能影響檢測結(jié)果。

標(biāo)本分離及測定

標(biāo)本的及時分離及測定是反映標(biāo)本真實情況的保障。通過NADH轉(zhuǎn)化成NAD的變化，檢測其物質(zhì)含量的試驗，血液存放時間或多或少存在影響。原因在于存放的時間越長，紅細(xì)胞通過血清中的糖，實現(xiàn)無氧酵解，產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸促使NADH轉(zhuǎn)化成為NAD，這樣一來，檢測結(jié)果容易出現(xiàn)假陽性，包括LDH、HBDH、ALT、AST、BUN等。另外，因為糖酵解，隨著存放時間延長，血液中GLU按照5%～7%/小時的速度下降。故此，生化檢驗中要與臨床做好溝通，加強抽血與標(biāo)本運送人員的培訓(xùn)與指導(dǎo)，檢測人員收到標(biāo)本后，要迅速分離血清并完成檢測。同時，全自動生化分析儀的延遲時間可設(shè)定超過60秒，延遲期內(nèi)，試劑消除丙酮酸的干擾，避免假陽性。

規(guī)范抗凝劑使用

目前，臨床上常用抗凝劑有肝素、枸鹽酸鈉以及EDTA-2K等。其中，TBA與AFU不可選擇肝素作為抗凝劑，因為肝素會導(dǎo)致TBA與AFU試劑出現(xiàn)混濁現(xiàn)象，吸光度假性升高，影響檢測結(jié)果。實際操作中，一定要按照試劑說明書正確使用。

儀器用水

合格的儀器用水直接關(guān)系檢測結(jié)果準(zhǔn)確性與可靠性。測定鋅、鈣、鎂、磷、銅及鐵等離子類項目時，儀器用水質(zhì)量至關(guān)重要，雖然目前一般醫(yī)院配備有生化儀制水系統(tǒng)，但是，制水系統(tǒng)基本上是制備去離子水，離子交換樹脂使用一段時間后，交換能力隨之下降，需要定期更換，否則制備的水離子含量較高，導(dǎo)致電導(dǎo)率升高。另外，二氧化碳、血氨等檢測項目，若是水質(zhì)不好，儀器用水含有的二氧化碳及氨含量較高，直接影響檢測結(jié)果。如果血清中含有GLDH，儀器用水有氨，NADH被消耗，利用NADH的酶聯(lián)連續(xù)監(jiān)測法，結(jié)果偏高。故此，生化檢驗中需定期監(jiān)測水質(zhì)，若是儀器用水電阻<1.0M?，需要及時更換離子交換樹脂或者活性炭。

試劑使用

1.參數(shù)設(shè)置。生化分析儀一般由分析程序供用戶設(shè)置，如樣品量、試劑量、波長以及分析方式與延遲時間、測試時間等。在此，以延遲時間與加樣程序設(shè)定為例，分享如何準(zhǔn)確設(shè)定分析參數(shù)。例如，肌酐苦味酸測定法，苦味酸基于堿性條件下，50秒前先快速與快反應(yīng)物質(zhì)（如乙酰、乙酸）產(chǎn)生紅色化合物，120秒后，堿性苦味酸與慢反應(yīng)物質(zhì)形成陽性干擾，故此，延遲時間一般設(shè)定50～60秒，測定時間<60秒，如此一來，便可消除快反應(yīng)與慢反應(yīng)產(chǎn)生的干擾作用，提高檢測的準(zhǔn)確性與真實性。試劑說明書中關(guān)于參數(shù)的設(shè)置，一般是由廠家驗證合理、有效的，不過，檢驗人員在實際操作中，還是需要根據(jù)實驗室條件、樣本結(jié)果以及儀器狀態(tài)等情況適當(dāng)調(diào)整，保證檢測結(jié)果的可靠性。

2.校準(zhǔn)液使用。目前，生產(chǎn)廠家提供的校準(zhǔn)液一般僅僅適用于某一特定分析系統(tǒng)，同一項目不同方法的校準(zhǔn)液不可混合使用。例如，膽紅素釩酸鹽法采用重氮法的校準(zhǔn)液進行校準(zhǔn)，TBA循環(huán)酶法用比色法校準(zhǔn)液進行校準(zhǔn)，影響檢測結(jié)果準(zhǔn)確性。不同廠家的校準(zhǔn)品及試劑存在差異，建議檢驗人員選擇與自己實驗室相符合的校準(zhǔn)品，保證檢測準(zhǔn)確性。

3.開瓶穩(wěn)定性。開瓶穩(wěn)定性是判斷檢驗試劑質(zhì)量的一個標(biāo)準(zhǔn)?，F(xiàn)目前，某些項目的方法并不能達到人們索要求的試劑，開瓶后，在儀器內(nèi)放的時間長，無須定標(biāo)，例如，PH為堿性的試劑（如ALP、TP、GS），開瓶后，試劑吸收空氣中二氧化碳，降低試劑本身的PH值，若是長時間開瓶不定標(biāo)或者校準(zhǔn)，檢測結(jié)果便會出現(xiàn)偏差。故此，上機試劑量需根據(jù)實驗室標(biāo)本量決定，放置1～2天用量是可以的，試劑瓶的使用時間不可太長，需及時更換，另外，要根據(jù)試劑的特性及時校準(zhǔn)。

交叉污染

全自動生化分析儀使用過程中，檢驗人員單做某一個項目時，結(jié)果沒有問題，但是將其與某些項目組合在一起的時候，結(jié)果出現(xiàn)異常。這種情況，我們首先考慮是否是交叉污染。交叉污染在生化分析儀檢測中很常見，原因可能是因為全自動生化分析儀的清洗系統(tǒng)隨著儀器使用時間的延長，清洗效果下降，試劑交叉污染加劇。因此，檢驗人員一定要按照要求，定期維護保養(yǎng)全自動生化分析儀，及時更換零部件，定期對儀器進行校準(zhǔn)，清洗到位，保證檢測準(zhǔn)確性;同時，一定要了解檢驗項目的試劑組成、反應(yīng)原理以及所需條件，整合調(diào)整實驗順序，盡量避免交叉污染現(xiàn)象。