張國良，張富強，鐘展華，嚴(yán)鳳好

（廣東省惠州市中心血站，惠州 516003）

血液安全是輸血界面臨的主要難題，核酸檢測是目前公認(rèn)能減低窗口期及低病毒載量血液感染的有效方法之一，2019版 《血站技術(shù)操作規(guī)程》已明確規(guī)定，采供血機構(gòu)可以采用一遍酶免一遍核酸的方法對獻血者血液進行檢測，但如何選擇合適的酶免試劑是各采供血機構(gòu)實驗室需謹(jǐn)慎考慮的問題。本研究通過對本站獻血者血清學(xué)和核酸檢測的結(jié)果進行回顧性分析，旨在為酶免及核酸試劑的合理選擇提供理論依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1．1材料 惠州市中心血站2016年3月-2018年12月無償獻血者標(biāo)本共193634份，年齡18-60歲，外采體檢合格，HBsAg初篩陰性，血紅蛋白（硫酸銅比重法）達標(biāo)。每位獻血這留取EDTA-K2抗凝管2管 （1管無分離膠用于血清血檢測，1管有分離膠用于核酸檢測），核酸標(biāo)本采集后4h內(nèi)離心（3000g15min）,并于72h內(nèi)完成各項檢測，不能完成的，置于-20℃保存不超過7d。試劑 ：ALT（邁瑞），HBsAg（新創(chuàng)，萬泰），抗-HCV（萬泰，Ortho），抗-HIV（萬泰，Sorin），抗-TP（萬泰，科華），HTLV（萬泰），核酸HBV/HCV/HIV1三聯(lián)檢測試劑及多項拆分試劑（華益美）。所有試劑均在有效期內(nèi)使用。儀器 ：BS420生化分析儀（邁瑞），STAR全自動加樣儀 （瑞士HAMILTON），F(xiàn)AME24/20全自動酶免分析儀（瑞士HAMILTON），340RT酶標(biāo)儀（瑞士ANTHON），Ampli STAR全自動核酸提取儀 （瑞士HAMILTON）,ABI7500熒光定量PCR擴增儀（美國ABI）。所有使用的儀器設(shè)備均按要求保養(yǎng)維護，在正常狀態(tài)下工作運轉(zhuǎn)。

1．2 方法 按要求對標(biāo)本進行離心處理后，分別用兩個不同廠家試劑、不同加樣器和酶免處理系統(tǒng)對HBsAg,抗-HCV,抗-HIV,抗-TP 4個項目進行初復(fù)檢酶免檢測，HTLV只做1遍，按試劑說明書和實驗室SOP進行操作。結(jié)果為反應(yīng)性的標(biāo)本剪血辮雙孔復(fù)查，復(fù)查任一孔有反應(yīng)性判陽性，雙孔陰性判判陰性。ALT用全自動生化分析儀檢測 （速率法），檢測值>50 U/L需復(fù)查，復(fù)查值仍超過50判為異常。核酸檢測：采用8人份混樣的檢測模式對酶免雙陰性和單試劑陽性的標(biāo)本進行HBV-DNA、HCV-RNA、HIV-1 RNA三聯(lián)核酸檢測，混檢無反應(yīng)性判核酸陰性，有反應(yīng)性的標(biāo)本需進行拆分鑒別，拆分有反應(yīng)性判該項陽性。

1．3 統(tǒng)計分析 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行分析，按檢驗水準(zhǔn)a=0.05進行卡方檢驗。

2 結(jié)果

2.1 血清學(xué)檢測情況 2016年3月-2018年12月共檢測無償獻血標(biāo)本193634份，血清學(xué)檢出不合格16055例，總體不合格率為8.29%，年度間不合格率有統(tǒng)計學(xué)意義。6項指標(biāo)各年度不合格檢出率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

表1 2016年3月-2018年12月惠州市無償獻血者血清學(xué)檢測結(jié)果比較[例（%）]

2.2 核酸檢測情況 近3年時間共對188648份酶免陰性及單試劑反應(yīng)性標(biāo)本進行核酸8人份混樣檢測，拆分出324份陽性標(biāo)本，拆分陽性率為57.0%，總體陽性率為0.17%，且有逐年上升趨勢。見表2。

表2 2016年3月-2018年12月惠州市無償獻血者核酸檢測結(jié)果比較

2.3 血清學(xué)陰性及單試劑反應(yīng)性標(biāo)本核酸檢測結(jié)果 在核酸拆分陽性的324份標(biāo)本中，有31份是血清學(xué)單試劑陽性，其中HCV-RNA 3份，HIVRNA 2份，HBV-DNA 26份；血清學(xué)陰性標(biāo)本中拆分出的293份均為HBV-DNA陽性，未檢出HCVRNA和HIV-RNA陽性標(biāo)本 。見表3。

表3 血清學(xué)陰性與單試劑反應(yīng)性標(biāo)本核酸檢測情況

3 討論

血液篩查是減少輸血相關(guān)病毒傳播的主要途徑，血清學(xué)方法在很長一段時間發(fā)揮重要作用，但由于病毒亞型、病毒變異、免疫沉默式感染等原因，血清學(xué)試劑窗口期引起的漏檢現(xiàn)象仍無法解決[1,2]。隨著檢測技術(shù)的不斷更新、發(fā)展，新的技術(shù)應(yīng)運而生，核酸檢測在縮短窗口期方面的作用也得到了肯定，國家衛(wèi)健委要求在2016起年全國開始實施核酸血篩，血清學(xué)與核酸聯(lián)合檢測被公認(rèn)為目前最佳的血液篩查模式[3]。

從本中心血站2016年3月-2018年12月的檢測數(shù)據(jù)看來，這幾年的血清學(xué)總不合格率維持在一個相對穩(wěn)定的水平，ALT異常仍然是血液報廢的主要原因，異常率超過5%，為減少血液浪費，有必要在獻血前對獻血者進行ALT篩查。已有的研究表明，HTLV在其它國家沿海地區(qū)有較高的流行率[4]，為了得到我國人群的分布資料，廣東省被列為抽檢省份，對獻血者進行篩查。從本站的篩查結(jié)果來看，陽性率為6/萬，送廣州血液中心確診陽性率約為2/10萬，全省的流行率大致相同，是否有必要繼續(xù)篩查有待大數(shù)據(jù)的收集分析及進一步探討。HBsAg和抗-HCV的陽性率在2018年略有下降，究其原因，HBsAg在2017年底更換過一種試劑，新試劑假陽性率有所降低；抗-HCV試劑沒換，但廠家建議在加樣后進行震蕩混勻再放入酶免系統(tǒng)處理，假陽性率也得到了一定的改善。抗-HIV的確診陽性數(shù)則有逐年增加的趨勢，可能與人群中的感染率上升有關(guān)。鑒于酶免試驗各環(huán)節(jié)容易受到干擾因素的影響，單試劑反應(yīng)性標(biāo)本中有相當(dāng)部分是假陽性，這一點已成為各實驗室的共識[5]，由此而造成合格獻血者的無辜被淘汰及對血源招募產(chǎn)生的不良影響也越來越受到重視，因此有必要出臺制定合理的獻血者風(fēng)險評估及重新歸隊策略，以減少獻血者流失。

核酸檢測的188648份標(biāo)本中，匯集反應(yīng)性568份，拆分出324份，拆分陽性率57.0%，高于田耘博報道的37%[6]，和程衛(wèi)芳報道的59%[7]接近，這可能與不同實驗室所選的試劑和核酸檢測系統(tǒng)不同有。有研究表明，經(jīng)超濃縮處理后，HCV、HBV病毒含量可提高至原來的4.7±1.43和5.92±1.98倍，對于核酸檢測的靈敏度和鑒別陽性率的提高有一定幫助[8]。本站核酸總體的陽性率為0.17%，高于南京[9]、重慶[6]等地區(qū)，與安徽[10]比較接近，但低于江西撫州[11,12]，主要是HBV陽性，廣東是乙肝高發(fā)地區(qū)，人群中的病毒攜帶者較高，且由于病毒變異和隱匿性乙肝感染（OBI），部分感染者的血清學(xué)標(biāo)志物濃度較低難以檢出，核酸檢測是很好的補充手段。雖然本站實施的是酶免單陽和陰性的標(biāo)本才做核酸的檢測策略，但是，我們在工作中也發(fā)現(xiàn)，有的酶免試劑雙陽性的標(biāo)本拿去做核酸單拆，結(jié)果卻是陰性的。無論是酶免檢測的假陽性還是核酸檢測的假陰性，這都提示了核酸檢測不能替代血清學(xué)檢測，兩者在降低輸血相關(guān)病毒感染風(fēng)險中的作用應(yīng)該不是簡單的互補[5]。在合理選擇篩查方法的基礎(chǔ)上，對獻血者進行必要的追蹤、采取進一步實驗室確診手段，制定適宜的屏蔽與歸隊策略都是保證血液安全的重要舉措。