楊昌銘，肖 瀛*，吳其國(guó)，尹志婷，周一鳴，周小理

（上海應(yīng)用技術(shù)大學(xué)香料香精技術(shù)與工程學(xué)院，上海 201418）

隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)水平的提高，居民飲食結(jié)構(gòu)也發(fā)生了很大的變化，高脂膳食已成為目前大部分人的飲食習(xí)慣，由高脂膳食引起的血脂代謝紊亂成為普遍現(xiàn)象。脂質(zhì)在維持人體內(nèi)正常代謝平衡方面做出很大貢獻(xiàn)。血脂代謝紊亂與心腦血管、糖尿病、高血壓以及代謝綜合征等關(guān)系密切[1]，有效控制血脂代謝紊亂，可改善人們的健康水平，提升幸福指數(shù)。

腸道菌群是指寄居在人體腸道內(nèi)并長(zhǎng)期與人體相互依存的各種微生物，它數(shù)量龐大、種類(lèi)繁多，與人體細(xì)胞總數(shù)比例約為1∶1[2]，其對(duì)維持人體生理功能具有非常重要的作用，還與許多免疫性疾病、代謝性疾病等都有著緊密的聯(lián)系[3-5]。高脂飲食會(huì)使腸道微生態(tài)發(fā)生改變[6]，有研究報(bào)道高脂飲食在易肥胖鼠中造成腸桿菌增多，而在所有表型鼠中均可造成擬桿菌和梭菌目菌落的增多[7]。

原花青素是一種多酚類(lèi)物質(zhì)，它具有抗氧化性、降血脂和預(yù)防心血管疾病等活性[8]。原花青素的消化吸收主要發(fā)生在小腸部位，腸道菌群賴(lài)以生存的養(yǎng)料主要來(lái)自于未被小腸消化吸收的部分物質(zhì)，原花青素及其代謝產(chǎn)物對(duì)腸道菌群有明顯影響，原花青素與腸道菌群的相互作用可能是原花青素發(fā)揮生物活性作用的重要原因。二代測(cè)序Illumina MiSeq是目前應(yīng)用最多的技術(shù)，具有低成本、時(shí)間短、通量高等優(yōu)點(diǎn)[9]。本研究采用Illumina高通量測(cè)序?yàn)橹饕夹g(shù)手段，以食源性原花青素分布廣泛的二聚體B2為研究對(duì)象，探究原花青素B2干預(yù)高脂膳食模型小鼠血脂代謝紊亂及對(duì)腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、材料與試劑

6 周齡SPF級(jí)（無(wú)特定病原體）雄性C57BL/6小鼠，體質(zhì)量（16±1）g，購(gòu)于上海靈暢生物科技公司，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（滬）2015-0014。

原花青素B2（純度≥80%） 上海同田生物技術(shù)股份有限公司；肝素鈉、無(wú)水硫酸鈉、無(wú)水乙醚、氯化鈉、濃硫酸（均為分析純） 國(guó)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑有限公司；總膽固醇（total cholesterol，T-CHO）、甘油三酯（triglyceride，TG）、高密度脂蛋白膽固醇（highdensity lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、脂蛋白脂酶、肝脂酶、總抗氧化能力（total antioxidant capacity，T-AOC）、總超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase，T-SOD）、過(guò)氧化氫酶（catalase，CAT）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）測(cè)定試劑盒 南京建成生物工程研究所；Quant-iT PicoGreen dsDNA試劑盒美國(guó)Invitrogen公司；E.Z.N.A.?soil 試劑盒 美國(guó)Bio-Tek公司；DNA提取、純化和回收試劑盒 天根生化科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

AL204電子天平 梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；XW-80型混合器 海門(mén)其林貝爾儀器公司；K280R冷凍離心機(jī) 英國(guó)森特恩公司；TQ8040氣相色譜-質(zhì)譜儀 日本島津公司；MiSeq PE300高通量測(cè)序平臺(tái) 美國(guó)Illumina公司。

1.3 方法

1.3.1 實(shí)驗(yàn)分組與造模

小鼠以基礎(chǔ)飼料飼喂適應(yīng)1 周后，根據(jù)體質(zhì)量隨機(jī)分為對(duì)照組（A組：飼喂低脂低糖飼料，含有11%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)，下同）脂肪、20%蛋白質(zhì)和69%碳水化合物）、高脂組（B組：飼喂Paigen飼料，含有35%脂肪、20%蛋白質(zhì)和45%碳水化合物）和原花青素B2組（C組：飼喂添加0.2%原花青素B2的Paigen飼料），每組7 只。小鼠自由飲食和飲水，相對(duì)濕度控制在（50±10）%，室溫（22±2）℃，12 h明暗交替，飼養(yǎng)時(shí)間為12 周。

1.3.2 樣品采集

在第12周，將待取樣的小鼠置于干凈的鋪有無(wú)菌濾紙的籠子里，小鼠排便后立即收集糞便樣本置于5 mL無(wú)菌EP管，-80 ℃保存，糞便采集完后，將小鼠禁食不禁水12 h，次日早晨，先將小鼠稱(chēng)質(zhì)量，后用無(wú)水乙醚麻醉，進(jìn)行眼球取血，將血放入預(yù)先準(zhǔn)備好后的0.1%肝素鈉生理鹽水預(yù)處理過(guò)的無(wú)菌離心管中，然后放在冰浴中靜止10 min左右，再以4 ℃、3 500 r/min離心15 min，取上清液置于離心管中，-80 ℃的冰箱保存待測(cè)。血取完頸椎脫臼處死后解剖，將小鼠的肝臟、腹脂、結(jié)腸、腦和心臟這5 個(gè)臟器稱(chēng)質(zhì)量，其中肝和結(jié)腸于各小鼠固定位置稱(chēng)取0.1 g，置于含9 倍組織剪切質(zhì)量的生理鹽水勻漿器中冰浴條件下勻漿，制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%的組織勻漿液，4 ℃、3 500 r/min離心10 min，取上清液，-80 ℃保存待測(cè)。

1.3.3 臟器指數(shù)、血脂指標(biāo)、肝組織酶活力指標(biāo)和抗氧化指標(biāo)的測(cè)定

用試劑盒測(cè)定1.3.2節(jié)所取樣本的T-CHO、TG、HDL-C、LDL-C、脂蛋白酶、肝脂酶、T-AOC、T-SOD、CAT、MDA水平。分別按式（1）、（2）計(jì)算臟器指數(shù)和動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)（atherosclerosis index，AI）。

1.3.4 糞便中DNA的提取與菌群多樣性測(cè)序

小鼠糞便中DNA的提取按照試劑盒提供的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行具體相關(guān)操作。按照V3～V4區(qū)域設(shè)計(jì)引物聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增序列（引物名稱(chēng)為：338F、806R），然后再用Illumina MiSeq PE300平臺(tái)進(jìn)行測(cè)序（委托上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司進(jìn)行測(cè)序）。

1.3.5 短鏈脂肪酸含量的測(cè)定

從收集的糞便中取0.1 g置于2 mL離心管中，加500 μL的飽和氯化鈉溶液，在冰浴條件下用打碎機(jī)打碎均勻，再加20 μL 10% H2SO4溶液，混合器振蕩混勻，到通風(fēng)櫥中加500 μL無(wú)水乙醚，混合器振蕩混勻，14 000 r/min離心15 min，取上清液置于裝有0.25 g無(wú)水硫酸鈉的2 mL離心管中，再以同樣的條件離心，取上清液置于氣相瓶中待測(cè)。

氣相色譜-質(zhì)譜條件：采用Rtx?-WAX色譜柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；進(jìn)樣口溫度：250 ℃，柱溫：100 ℃，離子源溫度：220 ℃，接口溫度：250 ℃；升溫程序：100 ℃到140 ℃升溫速率為7.5 ℃/min，保持4 min，再以60 ℃/min升溫至200 ℃；樣品進(jìn)樣量：1 μL；載氣：He；分流比：10∶1；流速：2 mL/min，溶劑延遲1.5 min；Q3 Scan方式采集1.5～9.5 min，質(zhì)量范圍m/z20.0～300.0。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

實(shí)驗(yàn)獲得的數(shù)據(jù)利用Excel軟件對(duì)其進(jìn)行預(yù)處理，結(jié)合SPSS Statistics 20軟件的Duncan’s單因素方差分析對(duì)預(yù)處理的數(shù)據(jù)進(jìn)行顯著性分析（P＜0.05）。對(duì)腸道菌群原始數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，得到優(yōu)化的序列。按照操作分類(lèi)單元（operational taxonomic unit，OTU）進(jìn)行單元?jiǎng)澐郑?7%相似度劃分在一個(gè)單元），在OTU分類(lèi)基礎(chǔ)上進(jìn)行物種豐度和多樣性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 原花青素對(duì)高脂小鼠臟器指數(shù)的影響

表1 原花青素B2對(duì)高脂小鼠臟器指數(shù)的影響Table 1 Effect of proanthocyanidin B2 on visceral organ indexes of HFD-fed mice

由表1可知，與對(duì)照組相比，高脂組小鼠的肝、腹脂、結(jié)腸和心臟均存在顯著性差異（P＜0.05），高脂膳食飼養(yǎng)的小鼠肝、腹脂和心臟指數(shù)均大于對(duì)照組和原花青素B2，且原花青素B2飲食干預(yù)后，高脂小鼠的肝、腹脂、結(jié)腸和心臟指數(shù)顯著性降低（P＜0.05）。

2.2 原花青素對(duì)小鼠血脂指標(biāo)和肝組織酶活力指標(biāo)的影響

表2 原花青素B2對(duì)高脂小鼠血脂指標(biāo)的影響Table 2 Effect of proanthocyanidin B2 on serum lipase indexes of HFD-fed mice

由表2可知，3 組小鼠中T-CHO濃度最高的是高脂組，且與對(duì)照組和原花青素B2組存在顯著性差異（P＜0.05）。原花青素B2組的TG濃度相對(duì)于高脂組顯著降低（P＜0.05），原花青素B2干預(yù)下HDL-C濃度增加但不顯著。高脂組和對(duì)照組AI指數(shù)存在顯著性差異（P＜0.05），對(duì)照組和原花青素B2組沒(méi)有顯著性差異。表明原花青素B2可調(diào)節(jié)高脂膳食引起的血脂代謝異常。

表3 原花青素B2對(duì)高脂小鼠肝組織酶活力的影響Table 3 Effect of proanthocyanidin B2 on liver enzyme activities in HFD-fed mice

由表3可知，3 組總脂酶活力均存在顯著性差異（P＜0.05），3 組中高脂組總脂酶活力最低，原花青素B2組最高，脂蛋白酶活力中高脂組和原花青素B2組存在顯著性差異（P＜0.05），肝脂酶活力中對(duì)照組和高脂組有顯著性差異（P＜0.05），原花青素B2組和對(duì)照組無(wú)顯著性區(qū)別。表明原花青素B2可增強(qiáng)小鼠肝酶活力，從而達(dá)到改善血脂異常的作用。

2.3 原花青素對(duì)小鼠抗氧化指標(biāo)的影響

由表4可知，與對(duì)照組相比，高脂組小鼠肝的T-AOC、T-SOD、CAT和MDA色譜均存在顯著差異（P＜0.05），在原花青素B2干預(yù)后T-SOD和CAT活力顯著增加，MDA含量顯著降低（P＜0.05），T-AOC有所增加但不顯著。結(jié)腸的抗氧化活性中，高脂組的T-AOC和T-SOD活力與對(duì)照組相比差異顯著（P＜0.05），原花青素B2飲食干預(yù)后，T-AOC、T-SOD和CAT水平顯著增加，MDA水平顯著減少（P＜0.05），表明原花青素B2具有抑制高脂小鼠氧化損傷的作用。

2.4 原花青素B2對(duì)小鼠腸道菌群多樣性分析結(jié)果

圖1 3 組小鼠糞便樣品Venn圖Fig. 1 Venn diagram of fecal microbiome in three mouse groups

如圖1所示，樣品在序列相似度97%的OTU數(shù)共有831 個(gè)，對(duì)照組有293 個(gè)，高脂組有265 個(gè)，原花青素B2組有273 個(gè)，對(duì)照組、高脂組和原花青素B2組共有201 個(gè)，另外對(duì)照組和高脂兩組共有17 個(gè)，對(duì)照組和原花青素B2組共有23 個(gè)，高脂組共有和原花青素B2組共有37 個(gè)。

如圖2A所示，橫坐標(biāo)是隨機(jī)抽取的測(cè)序數(shù)據(jù)量，縱坐標(biāo)是實(shí)際觀測(cè)到的多樣性指數(shù)（Shannon指數(shù)）。每條線(xiàn)代表一個(gè)樣本，隨著樣本量的增加，線(xiàn)條在逐漸趨于平緩，可見(jiàn)Shannon曲線(xiàn)平臺(tái)期。這表明測(cè)序的深度已經(jīng)滿(mǎn)足了檢測(cè)樣品中的所有物種。如圖2B所示，運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)T檢驗(yàn)的方法，Sobs指數(shù)中對(duì)照組和高脂組存在極顯著性差異，表明原花青素B2飲食干預(yù)后，使得高脂模型小鼠的腸道菌群豐度增加。

圖2 3 組小鼠糞便樣品稀釋曲線(xiàn)和檢驗(yàn)圖Fig. 2 Rarefaction curves and test plots of fecal microbiome in three mouse groups

圖3 3 組小鼠糞便樣品PCoA分析圖Fig. 3 Principal co-ordinates analysis of fecal microbiome in three mouse groups

主坐標(biāo)分析（principal co-ordinates analysis，PCoA）結(jié)果如圖3所示，橫縱主坐標(biāo)成分的貢獻(xiàn)率分別是65.31%和9%，對(duì)照組、高脂組和原花青素B2組3 組樣本點(diǎn)區(qū)別明顯，對(duì)照組與原花青素B2組的樣本點(diǎn)距離小于對(duì)照組和高脂組間的距離，說(shuō)明原花青素B2組的菌群結(jié)構(gòu)有向?qū)φ战M的菌群結(jié)構(gòu)模式調(diào)節(jié)的趨勢(shì)。

2.5 原花青素對(duì)小鼠腸道菌群物種組成和差異性分析結(jié)果

基于門(mén)分類(lèi)水平上原花青素對(duì)小鼠腸道菌群物種組成和差異性分析如圖4所示，對(duì)照組中厚壁菌門(mén)（Firmicutes）、擬桿菌門(mén)（Bacteroidetes）、放線(xiàn)菌門(mén)（Actinobacteria）和變形菌門(mén)（Proteobacteria）在腸道菌群中相對(duì)豐度分別為51.39%、37.87%、9.42%和0.56%，與對(duì)照組比較，高脂組中厚壁菌門(mén)（Firmicutes）和變形菌門(mén)（Proteobacteria）是優(yōu)勢(shì)菌，并且相對(duì)豐度分別為58.21%和37.15%，放線(xiàn)菌門(mén)（Actinobacteria，0.79%）和擬桿菌門(mén)（Bacteroidetes，3.70%）的數(shù)量減少，原花青素B2組與高脂組相比較，其中厚壁菌門(mén)（Firmicutes，63.97%）和擬桿菌門(mén)（Bacteroidetes，14.69%）的數(shù)量增加，變形菌門(mén)（Proteobacteria，20.90%）和放線(xiàn)菌門(mén)（Actinobacteria，0.27%）的數(shù)量減少。擬桿菌門(mén)/厚壁菌門(mén)比值（B/F值）發(fā)生顯著變化（P＜0.05），其中高脂組B/F值顯著降低，而原花青素組較高脂組B/F值顯著升高（圖5）。

圖5 擬桿菌門(mén)/厚壁菌門(mén)比值的變化Fig. 5 Changes in Bacteroidetes/Firmicutes ratio of fecal samples from three mouse groups at the genus level

由圖6可知，基于屬水平上，3 組小鼠腸道中埃希氏菌-志賀氏菌（Escherichia-Shigella）、未分類(lèi)擬桿菌（Bacteroidales_S24-7_group）、腸桿菌屬（Faecalibaculum）、Romboutsia、乳梭菌屬（Lachnoclostridium）、乳桿菌屬（Lactobacillus）、瘤胃球菌（Ruminococcaceae）、雙歧桿菌屬（Bifidobacterium）、擬桿菌（Parabacteroides）等13 種菌群有顯著性差異。3 組相比較，對(duì)照組中未分類(lèi)擬桿菌（Bacteroidales_S24-7_group）、腸桿菌屬（Faecalibaculum）、乳桿菌屬（Lactobacillus）和雙歧桿菌屬（Bifidobacterium）等菌屬為優(yōu)勢(shì)菌屬；高脂組中埃希氏菌-志賀氏菌（Escherichia-Shigella）、乳梭菌屬（Lachnoclostridium）、瘤胃球菌（Ruminococcaceae）和無(wú)害芽孢梭菌（Clostridium_innocuum_group）等菌屬占優(yōu)勢(shì)。與高脂組相比，原花青素B2組占優(yōu)勢(shì)的菌屬有未分類(lèi)擬桿菌（Bacteroidales_S24-7_group）、Romboutsia、裂梭菌群（Clostridium_fissicatena_group）、毛螺旋菌屬（Lachnospiraceae）和擬桿菌（Parabacteroides）等菌屬。

圖6 基于屬水平的3 組小鼠糞便樣品物種差異分析Fig. 6 Analysis of fecal microbial species that differed among three mouse groups at the genus level

2.6 原花青素B2對(duì)小鼠糞便中短鏈脂肪酸的影響

表5 小鼠糞便中短鏈脂肪酸的含量Table 5 Contents of fecal short chain fatty acids in three mouse groups

原花青素B2對(duì)小鼠糞便中短鏈脂肪酸的影響結(jié)果見(jiàn)表5，高脂組較對(duì)照組在乙酸、丙酸和總酸含量顯著增加（P＜0.05），原花青素B2干預(yù)可顯著增加丁酸的含量（P＜0.05），這表明原花青素B2可調(diào)節(jié)產(chǎn)丁酸菌群的作用。

3 討 論

本研究發(fā)現(xiàn)原花青素B2干預(yù)可顯著降低高脂膳食小鼠模型的T-CHO、TG和AI指數(shù)，顯著增加肝組織脂蛋白酶活力、肝脂酶活力以及機(jī)體抗氧化能力。長(zhǎng)期高脂膳食會(huì)引起機(jī)體脂質(zhì)代謝紊亂，從而導(dǎo)致血脂異常，如T-CHO、TG和LDL-C水平升高，HDL-C水平降低[10]。脂蛋白酶和肝脂酶是血漿脂蛋白代謝中的兩個(gè)關(guān)鍵酶，由于具有高相似度的氨基酸序列，所以具有共同的作用機(jī)制[11]，肝脂酶參與LDL、HDL和極低密度脂蛋白的產(chǎn)生[12]。Shi Fang等[13]通過(guò)高脂血癥小鼠模型研究發(fā)現(xiàn)，LachnumYM226的降血脂作用部分是由于肝臟中脂蛋白酶和肝脂肪酶的調(diào)節(jié)實(shí)現(xiàn)的。Wang Bin等[14]研究殼聚糖對(duì)高脂飼料喂養(yǎng)的小鼠肝臟基因表達(dá)的影響，發(fā)現(xiàn)殼聚糖可降低高脂模型小鼠血脂指標(biāo)和增加肝脂蛋白脂肪酶和肝脂肪酶活性，與本研究結(jié)果相似。

高脂膳食也可引起機(jī)體內(nèi)自由基失衡，產(chǎn)生大量的自由基，導(dǎo)致氧化應(yīng)激反應(yīng)[15]，在一些病理生理?xiàng)l件下，自由基產(chǎn)生和抗氧化能力之間的平衡被打破，導(dǎo)致氧化應(yīng)激反應(yīng)和組織損傷的增加[16]，這些變化使機(jī)體產(chǎn)生動(dòng)脈粥樣硬化、心腦血管疾病和糖尿病等慢性疾病風(fēng)險(xiǎn)的幾率增加[17]。原花青素B2具有較強(qiáng)的清除自由基，抗氧化和抑制脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物堆積的作用[18]。本研究發(fā)現(xiàn)高脂組小鼠血漿的T-CHO、TG、LDL-C水平顯著上升，HDL-C水平下降明顯，小鼠體內(nèi)T-AOC和T-SOD活性均顯著下降，而MDA水平上升，表明高脂組有著明顯的脂質(zhì)過(guò)氧化損傷的現(xiàn)象，這與Sour等[19]的研究結(jié)果一致。而高脂血癥導(dǎo)致的血脂異常與結(jié)直腸息肉的發(fā)病息息相關(guān)[20]，自由基及其產(chǎn)生的鏈?zhǔn)椒磻?yīng)會(huì)導(dǎo)致組織損傷，引發(fā)組織炎癥反應(yīng)，甚至導(dǎo)致DNA損傷引發(fā)癌癥[21]，本研究發(fā)現(xiàn)高脂組小鼠結(jié)腸臟器指數(shù)上升，可能與結(jié)腸組織損失引發(fā)炎癥反應(yīng)有關(guān)，經(jīng)過(guò)原花青素B2干預(yù)后結(jié)腸的臟器指數(shù)下降，表明原花青素B2具有抗氧化干預(yù)高脂膳食導(dǎo)致消化道氧化損傷的作用。

人體腸道菌群微生態(tài)失衡會(huì)引起許多人體疾病，例如代謝性疾病、消化性疾病和免疫性疾病[22]。有相關(guān)報(bào)道稱(chēng)腸道相關(guān)免疫系統(tǒng)對(duì)細(xì)菌成分的識(shí)別可能引起低水平炎癥，該炎癥是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的重要因素之一[23]。高脂膳食會(huì)致使小鼠體內(nèi)B/F值降低[24-25]，本研究的高脂膳食小鼠腸道B/F值顯著降低，經(jīng)過(guò)原花青素B2干預(yù)后比值增加，小鼠腸道菌群的結(jié)構(gòu)得到了調(diào)節(jié)。厚壁菌門(mén)和擬桿菌門(mén)與機(jī)體的脂質(zhì)代謝有著密切關(guān)系，它們會(huì)形成一種相互促進(jìn)的共生關(guān)系，共同促進(jìn)宿主對(duì)于多糖的代謝，促進(jìn)能量的吸收和儲(chǔ)存，而糖酵解所產(chǎn)生的磷酸二羥丙同酮還原后形成甘油，與丙酮酸氧化脫羧形成的乙酰輔酶A共同作用合成脂肪。一些致病菌如革蘭氏陰性桿菌的增會(huì)導(dǎo)致腸道內(nèi)產(chǎn)生大量的脂多糖（lipopolysaccharide，LPS），一方面，LPS會(huì)破壞腸道上皮細(xì)胞之間的緊密連接，導(dǎo)致腸道通透性的增加，隨后LPS通過(guò)上皮細(xì)胞間的間隙進(jìn)入體內(nèi)血液循環(huán)，使機(jī)體產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，從而對(duì)肝臟的功能產(chǎn)生顯著影響，導(dǎo)致肝臟的脂代謝能力下降，引起脂肪積累在體內(nèi)[26]；另一方面，LPS和革蘭氏陰性菌的鞭毛會(huì)使腸道上皮細(xì)胞對(duì)脂肪的吸收增加，血液內(nèi)的游離脂肪酸含量增加，機(jī)體內(nèi)的脂肪不斷積累，最終導(dǎo)致肥胖等脂代謝紊亂[27]。

Cheng Mei等[28]建立小白鼠高脂血癥動(dòng)物模型，給小鼠服用乳酸制劑和他汀藥物（降血脂藥），比較發(fā)現(xiàn)它們都顯著降低T-CHO、TG、HDL-C的含量，達(dá)到降血脂的功能，而灌胃乳酸菌的小鼠腸道中乳酸菌的數(shù)量顯著增加，大腸桿菌和腸球桿菌的數(shù)量顯著降低，表明調(diào)節(jié)腸道菌群與降血脂有顯著的關(guān)聯(lián)性。本研究發(fā)現(xiàn)原花青素B2干預(yù)高脂模型小鼠的腸道中埃希氏菌-志賀氏菌（Escherichia-Shigella）顯著性降低，未分類(lèi)擬桿菌（Bacteroidales_S24-7_group）顯著性增加。埃希氏菌-志賀氏菌（Escherichia-Shigella）為革蘭氏陰性菌，趙梅等[29]從一名重度肥胖患者腸道內(nèi)分離出19 種不同的ERIC類(lèi)型的分離物，進(jìn)行16S rRNA基因分子鑒定，發(fā)現(xiàn)19 種代表菌株的16S rRNA基因和埃希氏菌屬和志賀氏菌屬相似度高達(dá)99%。表明高脂膳食可通過(guò)增加埃希氏菌-志賀氏菌的豐度從而改變腸道菌群結(jié)構(gòu)。未分類(lèi)擬桿菌（Bacteroidales_S24-7_group）屬于丁酸鹽產(chǎn)生菌，有研究顯示高脂膳食會(huì)引起機(jī)體內(nèi)腸道菌群未分類(lèi)擬桿菌（Bacteroidales_S24-7_group）減少致使丁酸鹽減少，丁酸鹽的減少會(huì)破壞腸菌群生存環(huán)境的pH值，弱酸環(huán)境對(duì)于雙歧桿菌（Bifidobacterium）等益生菌的生長(zhǎng)比較有利[30-31]，本研究也發(fā)現(xiàn)原花青素B2干預(yù)高脂膳食小鼠腸道中雙歧桿菌相對(duì)豐度也有增加的趨勢(shì)。Hua等[32]研究證明，益生菌能夠刺激機(jī)體免疫功能，上調(diào)抗炎細(xì)胞因子，抑制機(jī)體炎癥反應(yīng)，其代謝產(chǎn)物還能促進(jìn)腸上皮細(xì)胞的修復(fù)和再生，從而有效減少LPS的吸收。

短鏈脂肪酸是由腸道菌群發(fā)酵部分未消化的碳水化合物、蛋白質(zhì)與脂肪等營(yíng)養(yǎng)素在結(jié)腸中產(chǎn)生的，它們能夠促進(jìn)機(jī)體內(nèi)難消化產(chǎn)物的吸收和結(jié)腸上皮細(xì)胞增殖與黏膜生長(zhǎng)，短鏈脂肪酸的增加還具有調(diào)節(jié)改善結(jié)腸的功能[33-35]。本研究發(fā)現(xiàn)高脂膳食可導(dǎo)致腸道乙酸含量增多，這可能是過(guò)多攝入的脂肪等未被消化的營(yíng)養(yǎng)素在結(jié)腸經(jīng)乙酰輔酶A或Wood-Ljungdahl途徑產(chǎn)生，研究發(fā)現(xiàn)體內(nèi)乙酸的增加可導(dǎo)致胰島素抵抗的作用，從而加劇脂代謝異常[36]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)高脂膳食小鼠經(jīng)原花青素B2干預(yù)，腸道中丁酸含量顯著增加。研究表明，丁酸的代謝至少占結(jié)腸細(xì)胞能量需求的70%，丁酸可通過(guò)增加磷脂轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白mRNA的水平及磷脂轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的分泌，促進(jìn)膽固醇的轉(zhuǎn)運(yùn)[37]，激活蛋白PGC-1α增強(qiáng)線(xiàn)粒體功能，從而加速脂肪氧化[38]，調(diào)節(jié)脂代謝異常[39]。因此，原花青素B2干預(yù)可調(diào)節(jié)腸道中的擬桿菌、雙歧桿菌、消化鏈球菌和梭菌屬等豐度的變化，從而改善小鼠血脂代謝異常。

本研究結(jié)果表明原花青素B2可以降低高脂小鼠血脂水平、抗氧化活性和增強(qiáng)肝酶活性，調(diào)節(jié)腸道菌群豐度和結(jié)構(gòu)，促進(jìn)短鏈脂肪酸的產(chǎn)生，從而可能改善血脂代謝紊亂。