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        HPLC法測定不同時期鮮棗中環(huán)磷酸腺苷含量變化的研究

        2020-07-22 07:39:28苗瀲涓侯艷霞宿炳林郝瑞芳盧桂賓
        山西林業(yè)科技 2020年1期
        關鍵詞:鮮棗腺苷磷酸

        苗瀲涓,侯艷霞,宿炳林,郝瑞芳,常 寧,盧桂賓

        (山西林業(yè)職業(yè)技術學院園藝系,山西 太原 030009)

        環(huán)磷酸腺苷(cAMP)是在人體內(nèi)廣泛存在的一種具有生理活性的重要物質(zhì),是生命傳遞的“第二信使”,參與調(diào)節(jié)細胞的生理活動和新陳代謝。據(jù)報道,在目前所有測得的動植物樣品中,cAMP含量在棗中是最高的。cAMP檢測大多采用蛋白免疫結(jié)合法、高效液相色譜法、紫外分光光度法、薄層色譜法等。本試驗以鮮棗為研究對象,通過纖維素酶水解浸提,提取鮮棗樣品中的活性成分cAMP,采用高效液相色譜法,測定不同品種鮮棗中cAMP的含量,同時檢測不同成熟期鮮棗樣品中cAMP含量的變化,為后期開發(fā)棗功能產(chǎn)品提供理論依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        1.1.1 材料

        鮮棗(包括木棗、壺瓶棗、板棗3種),采自山西省農(nóng)科院果樹所國家棗種質(zhì)資源圃。

        1.1.2 試劑與儀器

        試劑與儀器見第2頁表1.

        表1 試劑與儀器

        1.2 方法

        1.2.1 標準溶液配制

        精確稱取環(huán)磷酸腺苷標準品0.100 0 g,用純水溶解并定容至100 mL,得到1.0 mg/mL的標準貯備液,保存于4 ℃,可穩(wěn)定1個月。分別吸取cAMP貯備液0.1 mL,0.2 mL,0.5 mL,1.0 mL,1.5 mL,2.0 mL加到100 mL容量瓶內(nèi),配制成1.0 μg/mL,2.0 μg/mL,5.0 μg/mL,10 μg/mL,15 μg/mL,20 μg/mL濃度系列標準液,過0.45 μm有機系濾膜,備用待測。

        1.2.2 樣品預處理

        將3種鮮棗切條干燥,粉碎機磨成粉末并過篩,棗粉備用。準確稱取1.000 0 g棗粉,熱水溶解后65 ℃溫水浴1 h,取出后冷卻到室溫,檸檬酸調(diào)節(jié)pH為5.0.加入纖維素酶(1∶100)在45 ℃水浴45 min,然后超聲20 min,取出后用50 mL離心管定容。4 ℃離心10 min,轉(zhuǎn)速4 000 r/min,樣液過0.45 μm有機系濾膜,裝入進樣瓶,備用待測。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 標準曲線的制作

        分別把裝有1.0 μg/mL,2.0 μg/mL,5.0 μg/mL,10 μg/mL,15 μg/mL,20 μg/mL濃度系列標準液的樣品瓶放入自動進樣器,設置進樣量為10 μL.峰面積為橫坐標(X),濃度為縱坐標(Y),作標準曲線,結(jié)果見圖1.

        圖1 環(huán)磷酸腺苷標準曲線

        由圖1可以看出,環(huán)磷酸腺苷在10.0 μg/mL~50.0 μg/mL濃度范圍內(nèi),濃度和檢測峰面積呈良好線性關系,線性方程為y=0.000 317 88x+0.254 771 30,相關系數(shù)為0.999 148 04.

        2.2 分離度

        研究發(fā)現(xiàn),在本試驗色譜條件下分析環(huán)磷酸腺苷保留時間是5.86 min,和cAMP標準品色譜圖對比,確定測定樣品含環(huán)磷酸腺苷。

        環(huán)磷酸腺苷標準品、樣品HPLC譜圖見圖2,圖3.

        圖2 環(huán)磷酸腺苷標準品HPLC譜圖

        圖3 環(huán)磷酸腺苷樣品HPLC譜圖

        2.3 不同品種不同生長時期環(huán)磷酸腺苷含量

        不同品種不同生長時期環(huán)磷酸腺苷含量見第15頁圖4.

        由圖4可以看出,不同品種不同生長時期鮮棗中cAMP含量差異較大。其中,木棗各時期cAMP含量均高于板棗和壺瓶棗。木棗在白熟期含量最高,可達到580.9 μg/g;板棗和壺瓶棗中cAMP含量相對較低,分別為135.83 μg/g和129.92 μg/g.

        圖4 不同品種不同生長時期環(huán)磷酸腺苷含量

        3 結(jié)論

        1) 從3個品種鮮棗中cAMP含量分析結(jié)果來看,不同品種不同生長期cAMP含量不同。其中,木棗含量最高,達到580.9 μg/g,尤其是白熟期含量較其它生長期更高。隨著棗果的成熟,其cAMP含量呈下降趨勢。

        2) 木棗白熟期cAMP含量最高,是板棗和壺瓶棗含量的4倍左右;木棗白熟期cAMP含量是半紅期的4倍左右,是全紅期的9倍左右。

        3) 本研究為不同地域棗果cAMP含量研究提供了理論依據(jù),下一步可對不同地域環(huán)境不同時期棗果中cAMP含量進行深度研究。

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