周韶輝 解宜興 王曉清 周先文 陳家法

(1.張家界大鯢國家級自然保護區(qū)管理處，湖南省大鯢救護中心，湖南 張家界 427400；2.水產(chǎn)高效健康生產(chǎn)湖南協(xié)同創(chuàng)新中心，湖南 常德 415000；3.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖南長沙 410128)

中草藥具有安全、低毒、環(huán)保等優(yōu)點，近年來已在水產(chǎn)養(yǎng)殖方面得到一定應(yīng)用。本試驗選擇中草藥四黃敗毒，研究它對大鯢生長及免疫指標的影響，以期對大鯢的健康養(yǎng)殖及疫病防控工作提供一定理論依據(jù)。

一、材料與方法

1.試驗地點

試驗地點在湖南省大鯢救護中心，該中心是全國規(guī)模最大的大鯢救護機構(gòu)，也是全國大鯢種質(zhì)保存最為純正和全面的基因庫。

2.試驗時間

2018年7－12月，試驗期共計180天。

3.試驗材料

(1)四黃敗毒(一種水產(chǎn)養(yǎng)殖常用的中草藥制劑，通用名為雙黃連口服液，主要成分為金銀花、黃芩、連翹)。本品具有清熱解毒、抗菌、抗病毒的功效，主要用于魚、蝦等水產(chǎn)的細菌、病毒性疾病的防治，規(guī)格500毫升/瓶。

(2)供試大鯢由湖南省大鯢救護中心提供，規(guī)格為500克/尾左右的成鯢。

4.儀器與設(shè)備

恒溫水浴鍋(J-HH-6A)，臺式冷凍離心機(5424R)，渦旋混合器(XH-D)，電子分析天平(FA2204B)，生物顯微鏡(XSP-2C)，紫外分光光度計(UV2450)，全自動生化分析儀(BS-220)，電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(101-3A)。

5.試驗內(nèi)容

(1)供試大鯢的選擇與分組。隨機選取體質(zhì)健康、規(guī)格為500克/尾左右的3齡成鯢(成鯢為幼鯢的外鰓完全消失，開始用肺作為呼吸器官的大鯢)48尾，分為對照組、四黃敗毒拌料投喂低劑量組、中劑量組及高劑量組，每組設(shè)3個重復(fù)，每個重復(fù)4尾。對照組用基礎(chǔ)飼料投喂，低劑量組用0.1%四黃敗毒拌料投喂，中劑量組用0.3%四黃敗毒拌料投喂，高劑量組用0.5%四黃敗毒拌料投喂。

(2)試驗餌料組成。根據(jù)成鯢階段生長需要調(diào)整餌料配方進行投喂，基礎(chǔ)餌料由50%草魚肉絲和50%米蝦組成。

(3)生長及攝食指標的測定。試驗期間，記錄供試大鯢的初始體重及試驗結(jié)束時的體重、每日投餌量及殘餌量，計算試驗期內(nèi)大鯢體重增加量、平均增重率、餌料系數(shù)、特定生長率。具體計算公式如下：

式中，W1為大鯢的初始總重，W2為試驗結(jié)束時大鯢的總重，n為各個重復(fù)的樣本數(shù)，F(xiàn)1為總投餌量，F(xiàn)2為總殘餌量，t為試驗總天數(shù)。

(4)血液生理指標測定。試驗結(jié)束時，對四黃敗毒拌料投喂試驗中所有供試大鯢以無菌注射器進行尾靜脈采血，并將血樣注入添加抗凝劑的采血管中，將血樣低溫保存，送至吉首大學(xué)資環(huán)學(xué)院生化實驗室以全自動生化儀進行檢測，主要測定白細胞數(shù)(WBC)、紅細胞數(shù)(RBC)、血紅蛋白(Hb)及血小板總數(shù)(Plt)等血液生理指標。

(5)血液生化指標的測定。試驗結(jié)束時，對四黃敗毒拌料投喂試驗中所有供試大鯢以無菌注射器進行尾靜脈采血，并將血樣注入添加抗凝劑的采血管中，將血樣低溫保存，送至吉首大學(xué)資環(huán)學(xué)院生化實驗室以全自動生化儀進行檢測，主要測定總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、總膽紅素(TBILK)、直接膽紅素(DBIL)、間接膽紅素(IBIL)、甘油三酯(TG)、膽固醇(CHOL)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)等血液生化指標。

(6)血清抗氧化酶和非特異性免疫指標測定。試驗結(jié)束時對試驗中所有供試大鯢以無菌注射器進行尾靜脈采血，采集到的血液于4℃靜置2小時后，再以4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，取上清液，即為血清。分別以試劑盒測定待測血清中的酸性磷酸酶(ACP)、過氧化氫酶(CAT)及超氧化物歧化酶(SOD)等抗氧化酶和非特異性免疫指標。

(7)發(fā)病率及成活率統(tǒng)計。試驗期間密切觀察大鯢的生長情況，如發(fā)生病害感染應(yīng)及時采取隔離措施，并對病鯢進行疾病診斷及治療。試驗結(jié)束時，統(tǒng)計大鯢各類病害發(fā)生情況、死亡數(shù)，計算發(fā)病率、死亡率及成活率。具體計算公式為：發(fā)病率＝發(fā)病尾數(shù)/總尾數(shù)×100%死亡率＝死亡尾數(shù)/總尾數(shù)×100%成活率＝成活尾數(shù)/總尾數(shù)×100%

6.飼養(yǎng)管理

將供試大鯢養(yǎng)殖于陰涼避光處，水源為曝氣自來水，水溫20～25℃，溶解氧＞6.0毫克/升，pH為6.5～7.5。餌料經(jīng)消毒后于當(dāng)日18:00投喂，次日8:00撈出殘

餌，分別記錄每日各組的投餌量與殘餌量。

7.統(tǒng)計分析方法

試驗數(shù)據(jù)用Excel軟件處理后，用SPSS13.0進行統(tǒng)計分析，結(jié)果以“平均值±標準差”表示，P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01表示差異極顯著。

二、結(jié)果與分析

1.對大鯢生長性能的影響

表1為四黃敗毒拌料投喂對大鯢生長性能影響的試驗結(jié)果，試驗結(jié)束時，低劑量組大鯢的終末體重、平均增重率、特定生長率均顯著高于對照組、中劑量組及高劑量組(P＜0.05)，提示以該添加量的四黃敗毒拌料投喂更有利于大鯢的生長；對照組、中劑量組、高劑量組之間終末體重、平均增長率、特定生長率差異不顯著(P＞0.05)；4個組別餌料系數(shù)無顯著性差異(P＞0.05)，但低劑量組的餌料系數(shù)略低于其他3組。

2.對大鯢血液生理指標的影響

表2為四黃敗毒拌料投喂對大鯢血液生理指標的影響，試驗結(jié)束時，4組大鯢血液中的白細胞數(shù)、紅細胞數(shù)、血紅蛋白以及血小板總數(shù)均無顯著性差異(P＞0.05)，說明四黃敗毒拌料投喂對大鯢的血液生理指標無不利影響。

3.對大鯢血液生化指標的影響

表3為四黃敗毒拌料投喂對大鯢血液生化指標的影響，試驗結(jié)束時，4組大鯢血液中的總蛋白、白蛋白、甘油三酯、膽固醇以及堿性磷酸酶含量均無顯著性差異(P＞0.05)；3個試驗組大鯢血液中總膽紅素、直接膽紅素、間接膽紅素含量均顯著低于對照組(P＜0.05)；3個試驗組大鯢血液中谷草轉(zhuǎn)氨酶及谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量均顯著低于對照組(P＜0.05)；3個試驗組之間總膽紅素、直接膽紅素、間接膽紅素、谷草轉(zhuǎn)氨酶及谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量均無顯著性差異(P＞0.05)，但高劑量組的上述血液生化指標均低于其他兩個試驗組，提示以高劑量組拌料投喂或更有利于大鯢機體免疫力的提升。

表1 四黃敗毒拌料投喂對大鯢生長性能的影響

表2 四黃敗毒拌料投喂對大鯢血液生理指標的影響

表3 四黃敗毒拌料投喂對大鯢血液生化指標的影響

4.對大鯢血清抗氧化酶和非特異性免疫指標的影響

表4為四黃敗毒拌料投喂對大鯢血清抗氧化酶和非特異性免疫指標的影響，試驗結(jié)束時，4組大鯢血清中的酸性磷酸酶及超氧化物歧化酶活性均無顯著性差異(P＞0.05)，但中劑量組大鯢血清中酸性磷酸酶活性為4組中最高，提示以該添加量(0.3%)的四黃敗毒拌料投喂對大鯢的非特異性免疫或有促進作用，高劑量組大鯢血清中超氧化物歧化酶活性為4組中最高，提示以該添加量的(0.5%)四黃敗毒拌料投喂對大鯢的非特異性免疫或有促進作用；3個試驗組大鯢血清中過氧化氫酶活性均顯著高于對照組(P＜0.05)，但3個試驗組之間差異不顯著。

5.對大鯢發(fā)病率及成活率的影響

表5為四黃敗毒對大鯢疾病發(fā)生率及成活率的影響，試驗結(jié)束時，四黃敗毒浸泡消毒及拌料投喂試驗所有組別的大鯢均無死亡；除拌料投喂試驗中對照組發(fā)病率為16.67%外，其余各組大鯢在試驗期內(nèi)均未感染疾??；經(jīng)診斷，患病大鯢所患疾病為水霉病。

三、討論

試驗期間對照組部分大鯢體表出現(xiàn)灰白色菌絲并伴隨活動、攝食能力減弱，經(jīng)診斷，確定上述大鯢感染水霉病，對病鯢采取隔離飼養(yǎng)措施并將原養(yǎng)殖池以1毫克/升濃度的漂白粉進行消毒，以20毫升/米3濃度的四黃敗毒對病鯢進行浸泡并配合灌服，經(jīng)上述方法治療1周后，病鯢體表灰白色菌絲消失，活動能力增強，恢復(fù)正常攝食。此治療方案的實施反映出四黃敗毒對大鯢水霉病具有較好的治療效果，但關(guān)于四黃敗毒對大鯢生長及疾病抗性有益效果的作用機理尚不明確，有待進一步研究。

表4 四黃敗毒拌料投喂對大鯢血清抗氧化酶和非特異性免疫指標的影響

表5 四黃敗毒對大鯢發(fā)病率及成活率的影響

本研究證明，以四黃敗毒拌料投喂能有效促進大鯢生長發(fā)育，提升大鯢的非特異性免疫能力及機體抗氧化活性，從而提升大鯢對疾病的抗性，且本品安全性較高、不易產(chǎn)生耐藥性，同時還對大鯢的肝功能具有一定的保護作用。