陳琴

【摘要】目的：建立注射用胸腺法新含量的UPLC法并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。方法： 色譜條件：UPLC儀器，進(jìn)樣量2μl，柱溫為50℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，流速0.20 ml/min。結(jié)果：空白溶劑無干擾;定量限為1.0ng;重復(fù)性RSD為0.2%，中間精密度RSD為0.2%;溶液的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)RSD為0.4%;準(zhǔn)確度RSD為0.73%;平均回收率為100.10%;耐用性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示各條件檢測(cè)結(jié)果RSD在1.0%以內(nèi);在0.5μg～1.5μg范圍內(nèi)與主峰面積呈良好的線性關(guān)系;采用HPLC與UPLC對(duì)3批樣品的含量測(cè)定進(jìn)行對(duì)比，兩法相對(duì)偏差未超過0.8%。結(jié)論：UPLC法快速、高效、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)，適用于注射用胸腺法新含量測(cè)定。

【關(guān)鍵詞】注射用胸腺法新;UPLC;含量

【中圖分類號(hào)】R927.2??????????? 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B???????????????? 【文章編號(hào)】2096-7225（2020）02-0001-01

注射用胸腺法新作為免疫增強(qiáng)劑廣泛用于惡性腫瘤、感染性疾病的輔助治療以及免疫功能低下的免疫增強(qiáng)^[1～2]。胸腺法新能夠提高慢性乙型肝炎患者對(duì)干擾素的生化學(xué)、血清學(xué)應(yīng)答率，二者聯(lián)合是一種較好的抗HBV治療方法^[3～4]。目前中國(guó)藥典2015年版采用HPLC檢測(cè)其含量測(cè)定、含量均勻度和有關(guān)物質(zhì)。其方法檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，車間等待周期久，化學(xué)試劑用量大。本文參照HPLC法建立其含量UPLC法。

1 材料與方法

1.1樣品與對(duì)照品

注射用胸腺法新（20180303B，20180401A，20180401B），工作對(duì)照品（S00620171001），海南中和藥業(yè)股份有限公司制。

1.2主要試劑及儀器

ACQUITY UPLC H-Class型超高效液相色譜儀，ACQ TUV紫外檢測(cè)器;waters C18柱（2.1×50mm，1.7μm）;硫酸銨（廣州化學(xué)試劑廠，AR）磷酸（成都市克隆化學(xué)品有限公司，AR），乙腈（上海星可高純?nèi)軇┯邢薰?，HPLC級(jí)）

1.3色譜條件

以硫酸銨緩沖液（取硫酸銨26.4g，磷酸25ml加水溶解并稀釋至2000ml）-乙腈（90：10）為流動(dòng)相A，以硫酸銨緩沖液-乙腈（50：50）為流動(dòng)相B;柱溫為50℃;檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm;流速0.20 ml/min;進(jìn)行梯度洗脫。理論板數(shù)按胸腺法新峰計(jì)算不低于2000。取本品或?qū)φ掌愤m量，加0.02mol/L磷酸鹽緩沖液（pH7.0）制成每1ml中約含胸腺法新0.5mg的溶液。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。

2 結(jié)果

2.1專屬性

配制空白溶液、空白輔料溶液、對(duì)照品溶液和供試品溶液進(jìn)行干擾分析，空白溶劑和空白輔料溶液無吸收峰，對(duì)含量測(cè)定無干擾作用，同時(shí)，供試品溶液和對(duì)照品溶液的保留時(shí)間一致，專屬性良好。詳見表1。

2.2定量限

取對(duì)照品溶液逐步稀釋進(jìn)樣，直至主峰高約為基線的10倍，則該進(jìn)樣量即為其檢測(cè)限。在該色譜條件下，測(cè)得胸腺法新的檢測(cè)限為1.0ng。

2.3重復(fù)性、中間精密度

重復(fù)進(jìn)樣6針的RSD為0.2%，不同日期、不同分析員采用UPLC連續(xù)進(jìn)樣6針的中間精密度為0.2%。說明該方法采用UPLC重現(xiàn)性良好。

2.4溶液的穩(wěn)定性

將配好的供試品溶液室溫放置，分別于配樣后第0、2、4、8、12小時(shí)進(jìn)樣，峰面積RSD為0.4%。

2.5準(zhǔn)確度

測(cè)試3個(gè)濃度（0.4mg/ml，0.5 mg/ml和0.6 mg/ml）9份樣品的回收率，回收率分別為100.69%、99.84%和99.35%，9份樣品的RSD為0.73%。說明該方法準(zhǔn)確度良好。

2.6耐用性

通過測(cè)試不同序列號(hào)柱子、流速±0.04ml/min、柱溫±5℃，測(cè)得RSD分別為0.48%、0.50%和0.91%，說明當(dāng)色譜柱、流速、柱溫發(fā)生微小變化時(shí)，對(duì)含量測(cè)定無顯著影響。

2.7線性和范圍

配制0.5mg/ml的對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣1.0、1.5、2.0、2.5、3.0μl，以主峰面積A為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣體積（μl）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程為y=1698831x-26658.2，相關(guān)系數(shù)r=0.9999;說明在0.5μg～1.5μg范圍內(nèi)與主峰面積呈良好的線性關(guān)系。HPLC法與UPLC法對(duì)比取3批樣品同時(shí)在2臺(tái)設(shè)備運(yùn)行，相對(duì)偏差均未超過0.8%，說明該方法與HPLC結(jié)果一致。

3 討論

UPLC是一種快速、高效、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)的檢測(cè)方法，并且該方法可靠、有效?？捎糜跍y(cè)定注射用胸腺法新的含量。

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