覃瑛，許鍵煒，李曉杰，周誼霞**，李委

(1.貴州醫(yī)科大學(xué) 護(hù)理學(xué)院，貴州 貴陽 550004； 2.貴州醫(yī)科大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，貴州 貴陽 550004； 3.畢節(jié)醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校 護(hù)理系，貴州 畢節(jié) 551700)

高脂血癥臨床上稱之為血脂異常(dyslipidemia)，是眾多心腦血管疾病、非酒精性脂肪肝、代謝性綜合征等慢性疾病的重要危險(xiǎn)因素。2018年我國疾病控制與預(yù)防中心的調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，我國成人血脂異?？偦疾÷矢哌_(dá)49.20%，遠(yuǎn)高于2002年的水平，且發(fā)病年齡逐漸趨于年輕化[1]，有效管理血脂已成為醫(yī)療保健工作中的重點(diǎn)內(nèi)容。肝臟是機(jī)體進(jìn)行物質(zhì)代謝的重要器官，高脂血癥可引起脂肪在肝臟中的堆積，使肝細(xì)胞發(fā)生脂肪變性、肝功能下降，嚴(yán)重者發(fā)展成脂肪肝，進(jìn)一步加重脂質(zhì)代謝紊亂[2]。因此，開發(fā)療效好又無明顯肝毒性的降脂天然活性物質(zhì)逐漸成為近年來的研究熱點(diǎn)。橙皮素(hesperetin，HES)是廣泛存在于蕓香科柑橘屬植物果實(shí)中的一種天然黃酮類物質(zhì)，研究表明HES具有抗炎、抗氧化、抗病毒、抗腫瘤等多種生物活性[3-4]，還有研究報(bào)道HES能降低動物模型中的血脂水平[5-6]，但HES對高脂飲食誘導(dǎo)的肝脂肪變性的影響目前國內(nèi)外還鮮見報(bào)道。倉鼠，又稱敘利亞金黃地鼠，與常用的大小鼠相比，倉鼠的脂代謝特征與人類更為接近，是研究脂代謝紊亂性疾病的優(yōu)勢動物模型[7]。本研究通過高脂飲食喂養(yǎng)建立擬人化倉鼠高脂血癥模型，探討HES對血脂的調(diào)節(jié)作用以及對肝脂肪變性的影響，擬為拓寬對HES健康效益的認(rèn)識和合理利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1主要試劑和儀器 HES，黃色粉末，純度為97%，上海麥克林生化科技有限公司(批號C10358475)；羧甲基纖維素鈉(sodium carboxymethyl cellulose，CMCNa)，北京索萊寶生物科技有限公司(批號C8620)；總膽固醇(total cholesterol，TC)、甘油三酯(triglyceride，TG)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-C)測定試劑盒，中生北控生物科技股份有限公司(批號分別為182041、197971、191321、191271)；總抗氧化能力(total antioxidant capacity，TAC)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine transaminase，ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate transaminase，AST)測定試劑盒，蘇州格銳思生物科技有限公司(批號分別為G0115W、G0101W、G0109W、G0423W、G0424W)；總RNA提取試劑、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、實(shí)時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time quantitative PCR，RT-qPCR)試劑盒，北京康潤誠業(yè)生物科技有限公司(批號分別為P118-05、A224-05、A305-05)。冷凍離心機(jī)，美國Thermo Fisher公司(型號Heraeus Fresco 21)；多功能酶標(biāo)儀，美國Bio-Tek公司(型號ELX800uv)；實(shí)時熒光定量PCR儀，美國Bio-Rad公司(型號CFX96)；石蠟切片機(jī)，上海徠卡儀器有限公司(型號：RM2016)；正置光學(xué)顯微鏡，日本Nikon公司(型號Nikon Eclipse E100)；組織研磨器，上海凈信實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司(型號MY-20)。

1.1.2實(shí)驗(yàn)動物 SPF級倉鼠由河北醫(yī)科大學(xué)脂代謝研究室饋贈，生產(chǎn)許可證編號[SCXK(京)2012-0001]，飼養(yǎng)并繁殖于貴州醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心[SYXK(黔)2018-0001]。實(shí)驗(yàn)動物供清潔自來水和標(biāo)準(zhǔn)飼料，自由進(jìn)食和飲水，室內(nèi)環(huán)境溫度為22～24 ℃，濕度為50%～60%，12 h明暗交替循環(huán)(7 ∶00-19 ∶00)。選取18只8周齡雄性倉鼠為研究對象，體質(zhì)量105.78～125.32 g。本研究方案已通過貴州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物倫理委員會審核并批準(zhǔn)(倫理審查編號1800812)。本實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格遵守動物倫理學(xué)3R原則。

1.2 方法

1.2.1動物造模和分組 按照簡單隨機(jī)分組法，運(yùn)用SPSSS 25.0軟件生成隨機(jī)數(shù)字，將18只8周齡雄性倉鼠隨機(jī)分為空白對照組(NC組)、高脂血癥模型組(Model組)、HES組。NC組倉鼠喂飼普通飼料，另2組喂飼高脂飼料，高脂飼料配方為1.25%膽固醇+20%豬油+78.75%基礎(chǔ)飼料。HES組倉鼠按100 mg/kg的劑量予HES灌胃給藥[8]，1次/d，連續(xù)干預(yù)6周。NC組及Model組給予相同體積的溶媒0.5% CMCNa灌胃處理。

1.2.2動物處理及標(biāo)本收集 實(shí)驗(yàn)期間將動物按組分籠飼養(yǎng)，每日觀察動物的精神狀態(tài)、活動情況、飲水飲食變化及毛發(fā)體態(tài)變化等行為學(xué)情況，每周一清晨定時稱取體質(zhì)量。分別于實(shí)驗(yàn)開始時、實(shí)驗(yàn)第3周和實(shí)驗(yàn)?zāi)?實(shí)驗(yàn)第6周末)倉鼠禁食不禁水12 h，行內(nèi)眥靜脈叢采血，4 000 r/min，4 ℃離心10 min，離心2次，分離上層血清。第6周末取血后，麻醉后處死倉鼠，行心臟灌流，取出肝臟，用濾紙吸干多余水分后迅速稱取質(zhì)量。將肝臟分為2部分，一部分剪成約100 mg的小塊投入液氮速凍后-80 ℃保存，一部分置于4%多聚甲醛中固定保存，用于病理形態(tài)學(xué)檢測。

1.2.3肝臟指數(shù)的測定 分離倉鼠的肝臟后稱取質(zhì)量，按公式計(jì)算肝臟指數(shù)：肝臟指數(shù)=肝臟質(zhì)量/體質(zhì)量×100%。

1.2.4血脂和肝臟脂質(zhì)含量的測定 血清TC、TG、LDL-C、HDL-C按相應(yīng)的試劑盒說明書進(jìn)行檢測。-80 ℃取出肝臟組織塊，稱質(zhì)量后迅速置入裝有預(yù)冷的PBS 1 mL的EP管中，用組織研磨器充分勻漿制備成肝勻漿液，采用改良的Blign & Dyer法[9]抽提出肝臟中的脂質(zhì)，用TC、TG測定試劑盒測定樣品中TC、TG含量，校正稱取的肝臟質(zhì)量，即得到肝臟組織中TC、TG的含量。

1.2.5肝臟組織TAC、SOD、MDA水平和肝功能指標(biāo)的測定 肝臟中TAC、SOD、MDA的含量及肝功能指標(biāo)ALT、AST按相應(yīng)的試劑盒說明書進(jìn)行測定。

1.2.6肝臟病理學(xué)觀察 將固定好的肝臟組織行石蠟包埋，制作厚度為5 μm的石蠟切片、HE染色，顯微鏡下觀察分析、拍照。

1.2.7肝臟組織固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-2(sterol regulatory element binding protein-2，Srebp2)和3-羥基-3-甲基-戊二酰輔酶A還原酶(3-Hydroxy-3-Methylglutaryl-CoAReductase，HMGCR) mRNA表達(dá) 稱取約100 mg肝臟組織，用TRIGene試劑提取總RNA，根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書合成cDNA；使用SYBR green染料法進(jìn)行RT-qPCR測定肝臟中Srebp2和HMGCRmRNA表達(dá)水平，反應(yīng)總體系為20 μL。以GAPDH為內(nèi)參基因。引物序列：Srebf2-F為GTGGTGGCAGTGGCAGTAACG，Srebf2-R為GGCTGAACGACCGCTGTATTCC；HMGCR-F為AATTGGAGTTGGCACCATGTCAGG，HMGCR-R為ACGAAGTAGTTGGCAAGCACAGAC；GAPDH-F為AAGGCACAGTCAAGGCTGAGAATG，GAPDH-R為CTCCACAACATACTCGGCACCAG。反應(yīng)條件為： UNG酶50 ℃處理5 min，95 ℃預(yù)變性2 min，95 ℃變性15 s、60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，40個循環(huán)。目的基因的mRNA相對表達(dá)量用2-△△Ct法分析，△Ct值=Ct目的基因-CtGAPDH;△△Ct=△Ct實(shí)驗(yàn)組-△Ct對照組。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 一般情況、體質(zhì)量及肝臟指數(shù)

NC組倉鼠實(shí)驗(yàn)期間精神佳、毛色順滑有光澤、身體動作靈活機(jī)敏；Model組及HES組倉鼠實(shí)驗(yàn)前期精神活動狀況良好，Model組中后期開始逐漸出現(xiàn)精神萎靡、毛發(fā)凌亂、食欲下降、活動遲緩且不喜活動等現(xiàn)象，HES組倉鼠上述情況較Model組輕。各組倉鼠基礎(chǔ)體質(zhì)量在同一水平(P>0.05)，實(shí)驗(yàn)期間倉鼠體質(zhì)量均有所上升；與NC組比較，Model組倉鼠的最終體質(zhì)量及肝臟指數(shù)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與Model組比較，HES組倉鼠的最終體質(zhì)量及肝臟指數(shù)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組倉鼠體質(zhì)量及肝臟指數(shù)變化Tab.1 Changes of weight and liver

2.2 HES對血脂水平的影響

結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)開始時，各組倉鼠的基礎(chǔ)血脂水平接近，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。實(shí)驗(yàn)第3周和第6周時，與NC組比較，Model組倉鼠血清TC、TG、LDL-C及HDL-C水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與Model組相比，HES組倉鼠血清TC、TG、LDLC水平下降、差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，HDL-C水平比較、差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見圖1。

注：(1)與NC組比較，P<0.05；(2)與Model組比較，P<0.05。圖1 橙皮素對各組倉鼠血脂水平的影響Fig.1 Effect of hesperetin on serum lipids level in each group

2.3 HES對肝臟組織TC、TG水平的影響

結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)第6周時，與NC組比較，Model組倉鼠肝臟組織TC、TG水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與Model組比較，HES組倉鼠肝臟中TC、TG水平下降差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖2。

2.4 HES對肝臟組織抗氧化酶活力及MDA含量的影響

結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)第6周時，與NC組比較，Model組倉鼠肝臟TAC及SOD水平下降，MDA生成量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與Model組比較，HES組倉鼠肝臟TAC及SOD水平上升，MDA含量下降(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

注：(1)與NC組比較，P<0.05；(2)與Model組比較，P<0.05。圖2 橙皮素對各組倉鼠肝臟中TC、TG水平的影響Fig.2 Effect of hesperetin on TC and TG levels of hamsters' livers in each group

表2 橙皮素對各組倉鼠肝臟中抗氧化酶活性及MDA生成量的影響Tab.2 Effect of hesperetin on serum antioxidant enzyme activity and MDA level in

2.5 HES對血清ALT、AST活力的影響

結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)第6周時，與NC組比較，Model組倉鼠血清中ALT、AST活力升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與Model組比較，HES組血清中ALT、AST活力下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

2.6 肝臟病理學(xué)檢測

結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)第6周時，倉鼠肝臟標(biāo)本大體觀察可見，NC組肝臟呈暗紅色，表面光滑，質(zhì)地柔軟，邊緣銳利；Model組肝臟呈乳白色，體積明顯增大，邊緣圓鈍增厚、包膜緊張，質(zhì)硬易碎，有明顯的油膩感；HES組肝臟顏色呈黃白色、表面散在點(diǎn)狀褐色，油膩感較Model組輕。肝臟石蠟切片HE染色可見，NC組肝細(xì)胞大小均勻，細(xì)胞質(zhì)豐富、著色均勻，細(xì)胞核圓而居中，肝細(xì)胞以中央靜脈為中心呈放射狀分布，表現(xiàn)出完整而清晰的肝小葉結(jié)構(gòu)；Model組肝細(xì)胞體積明顯增大且大小不一，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)大小不等的圓形空泡甚至融合成片，細(xì)胞核固縮深染、受到擠壓而變形甚至消失，肝索排列紊亂，表現(xiàn)出典型的脂肪肝病變；與Model相比，HES組肝臟脂肪變性程度有所改善，肝細(xì)胞體積腫脹減輕，脂質(zhì)空泡數(shù)量減少，可見較為明顯的肝小葉結(jié)構(gòu)。見圖3。

表3 橙皮素對實(shí)驗(yàn)倉鼠血清中AST、ALT活力的影響Tab.3 Effect of hesperetin on serum AST and ALT level in each

2.7 HES對肝臟組織Srebp2和HMGCR mRNA表達(dá)水平的影響

結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)第6周時，與NC組比較，Model組倉鼠肝臟組織中Srebp2和HMGCRmRNA表達(dá)水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與Model組比較，HES組肝臟組織中Srebp2和HMGCRmRNA表達(dá)水平下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖4。

圖3 各組倉鼠肝組織學(xué)表現(xiàn)(HE)Fig.3 Histological expression of livers in each group(HE)

注：(1)與NC組比較，P<0.05；(2)與Model組比較，P<0.05。圖4 橙皮素對各組鼠肝臟中Srebp2和HMGCR mRNA表達(dá)的影響Fig.4 Effect of hesperetin on hepatic Srebp2 andHMGCR mRNA expression in each group

3 討論

HES廣泛存在于柑橘屬植物果實(shí)中，來源廣泛、獲取便利，其藥用活性已吸引諸多研究者的關(guān)注。本研究通過建立擬人化高脂血癥倉鼠模型探討HES對血脂和肝脂肪變性的作用，結(jié)果表明HES能夠抑制高脂飲食誘導(dǎo)的倉鼠體質(zhì)量增長，可通過下調(diào)高脂血癥倉鼠肝臟中脂代謝相關(guān)因子Srebp2和HMCGR的基因表達(dá)，從而發(fā)揮降血脂和減少肝臟中脂質(zhì)蓄積的作用，另外還能提高肝臟中抗氧化酶活性，并改善高脂飲食誘導(dǎo)的肝脂肪變性，發(fā)揮良好的護(hù)肝作用。

目前，高脂血癥的防治已成為全世界醫(yī)務(wù)及科研工作者的迫切任務(wù)。建立快速有效的高脂血癥動物模型是深入研究其發(fā)病機(jī)制，開發(fā)潛在的調(diào)脂藥物的關(guān)鍵，也是為開展后續(xù)臨床研究提供可靠的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)結(jié)論的重要保證。倉鼠的血清脂代謝譜與人類相似，倉鼠具有繁殖速度快、抵抗力強(qiáng)、方便操作和血容量相對豐富的特點(diǎn)，與其他小動物模型相比，在高脂血癥的研究上具有獨(dú)特的優(yōu)勢[7]。本研究發(fā)現(xiàn)，倉鼠在經(jīng)高脂飲食喂飼僅3周時，血清中TC、TG、LDL-C及HDL-C水平即上升，且在實(shí)驗(yàn)期間表現(xiàn)為持續(xù)上升的趨勢，與同類研究結(jié)果一致[10-11]，表明本實(shí)驗(yàn)成功建立了高脂血癥模型且對高脂飲食高度易感。有研究指出人類在攝入高脂飲食后血脂四項(xiàng)水平均升高[12]，說明倉鼠對高脂飲食的反應(yīng)性與人類相似。許多流行病學(xué)研究已經(jīng)確定血清LDL-C或TC水平的升高是動脈粥樣硬化性心血管疾病(atherosclerotic cardiovascular disease，ASCVD)發(fā)生發(fā)展的重要獨(dú)立危險(xiǎn)因素[13]，較高的血清TG水平與ASCVD獨(dú)立相關(guān)[14]。降低血脂水平可減少ASCVD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)[15]。本研究發(fā)現(xiàn)，HES能明顯降低血清中TC、TG及LDL-C水平，與研究者在小鼠及倉鼠模型上觀察到的結(jié)果一致[6, 16]，而對血清HDL-C水平無明顯影響，與朱小琴等[8]在ApoE-/-小鼠模型上得到的結(jié)果相反，這可能是種屬差異造成的，結(jié)果提示HES具有降低ASCVD患病風(fēng)險(xiǎn)的潛力。

肝臟指數(shù)是反映肝臟病變的簡單方便的指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示，Model組肝脂數(shù)較NC組顯著升高，提示肝臟可能發(fā)生了某種病理改變。隨后對肝臟中的脂質(zhì)含量檢測結(jié)果顯示，Model組倉鼠肝臟中的脂質(zhì)含量高于NC組，表明高脂飲食喂飼后引起了倉鼠肝臟中脂質(zhì)的蓄積從而導(dǎo)致肝臟腫大，HES干預(yù)后，高脂飲食倉鼠肝臟指數(shù)及肝臟中脂質(zhì)含量下降，說明HES減輕了倉鼠脂質(zhì)在肝臟中的沉積。研究表明肝內(nèi)膽固醇穩(wěn)態(tài)的改變和游離膽固醇蓄積與非酒精性脂肪肝疾病(nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)的發(fā)病機(jī)制有關(guān)；游離膽固醇的蓄積通過破壞線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜完整性，觸發(fā)線粒體氧化損傷和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，并通過促進(jìn)有毒的氧固醇生成而直接損傷肝細(xì)胞，促進(jìn)脂肪性肝炎和肝纖維化的發(fā)展[17-18]，NAFLD患者中肝HMGCR的表達(dá)和活性增加，且與肝組織學(xué)病變程度的嚴(yán)重性成正比[19]。Srebp2屬于轉(zhuǎn)錄因子家族成員，是HMGCR的主要轉(zhuǎn)錄激活因子。正常生理狀態(tài)下，當(dāng)細(xì)胞內(nèi)膽固醇水平低下時，Srebp2被激活，調(diào)節(jié)其靶基因的轉(zhuǎn)錄，參與膽固醇的合成、攝取、分泌及轉(zhuǎn)運(yùn)，從而增加細(xì)胞內(nèi)膽固醇的利用率，相反，細(xì)胞內(nèi)膽固醇增加會抑制Srebp2的活化。盡管NAFLD患者中肝細(xì)胞內(nèi)膽固醇超負(fù)荷，Srebp2仍被異常激活，NAFLD患者中Srebp2 mRNA水平較正常人提高了3倍，Srebp2轉(zhuǎn)錄活性的增強(qiáng)是HMGCR表達(dá)增加的主要原因[20]。因此，Srebp2的上調(diào)是肝細(xì)胞內(nèi)膽固醇超負(fù)荷的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，提示其可能有望成為治療NAFLD的新靶點(diǎn)。本研究結(jié)果顯示：與Model組相比，HES組倉鼠肝臟中Srebp2和HMGCRmRNA表達(dá)水平下降，說明HES可通過抑制肝臟Srebp2和HMGCR的表達(dá)，降低肝臟中內(nèi)源性膽固醇的合成，減輕脂質(zhì)在肝臟內(nèi)的蓄積，調(diào)節(jié)血脂水平。

臨床研究表明高脂血癥患者處于氧化應(yīng)激狀態(tài)[21]。氧化應(yīng)激能促進(jìn)和加重脂代謝紊亂性疾病如脂肪肝、動脈粥樣硬化的病理進(jìn)程[22]。TAC反映了生物體內(nèi)清除自由基的總能力。MDA是自由基作用于器官膜脂質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)后的最終分解產(chǎn)物，能間接反映出機(jī)體內(nèi)過氧化損傷的程度。SOD是體內(nèi)一種重要的抗氧化酶，能有效清除機(jī)體內(nèi)超氧陰離子自由基，其活力的改變可反映機(jī)體抗自由基損傷的能力。本研究表明HES干預(yù)可提高倉鼠肝臟中SOD活性，增強(qiáng)倉鼠的總抗氧化能力，降低由自由基介導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷，這與研究報(bào)道的HES能夠提高小鼠急性腎損傷模型中腎臟組織的抗氧化能力以及糖尿病大鼠模型睪丸組織中抗氧化酶的活性的研究結(jié)論相符[23-24]，這些研究結(jié)果說明了HES具有較好的抗氧化活性。高脂血癥被公認(rèn)為脂肪肝形成的“首次打擊”，長期高脂血癥誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷被認(rèn)為是脂肪肝發(fā)展的“二次打擊”[25]。本研究觀察到HES具有較好的調(diào)脂及抗氧化作用，因此推測HES對高脂飲食誘導(dǎo)的肝脂肪變性具有改善作用。本研究通過HE染色觀察了各組倉鼠肝臟的病理學(xué)改變，發(fā)現(xiàn)高脂喂飼倉鼠發(fā)生了明顯的肝脂肪變性，在用HES干預(yù)后，倉鼠的肝臟切片中脂質(zhì)空泡細(xì)胞數(shù)量和面積明顯減少，可見較為清晰的肝小葉結(jié)構(gòu)，表明HES能減輕高脂飲食誘導(dǎo)的肝脂肪變性。血清ALT和AST活性是目前臨床上最常用的反映肝實(shí)質(zhì)損害的指標(biāo)[26]。正常情況下，ALT和AST主要存在于細(xì)胞內(nèi)，血清中的含量很低，當(dāng)某種原因使細(xì)胞通透性增高或細(xì)胞膜破壞時，ALT和AST可大量釋放入血，使血清中酶活性明顯升高，血清ALT水平與肝臟損傷程度呈正比。本研究觀察到高脂血癥倉鼠血清中ALT和AST水平較NC組升高，提示長期高脂血癥會引起肝損傷，而HES可降低血清中的ALT和AST水平，說明HES逆轉(zhuǎn)了高脂飲食誘導(dǎo)的肝功能損害，具有護(hù)肝作用，這與觀察到的肝臟病理學(xué)改變的結(jié)果相吻合。

綜上所述，HES能抑制高脂飲食誘導(dǎo)的體質(zhì)量增長，有效降低血脂，減少肝臟中脂質(zhì)的沉積，改善高脂血癥引起的肝脂肪變性，具有保護(hù)肝功能的作用，其護(hù)肝效應(yīng)可能與其降脂和抗氧化活性有關(guān)。