1 適用范圍

本標準適用于無相應(yīng)獸藥中非法添加物質(zhì)檢查方法標準時的檢驗使用，非法添加物質(zhì)包括對人或動物具有藥理活性或毒理作用等的物質(zhì)。本標準執(zhí)行前應(yīng)進行耐用性驗證，僅限用于已建立本檢查方法的實驗室，其他實驗室使用時應(yīng)重新進行耐用性驗證。執(zhí)行本標準時，應(yīng)同時進行試劑空白、樣品空白與陽性對照試驗，檢驗報告應(yīng)給出檢出限。

2 檢查方法

2.1 液相色譜-二極管陣列法 照高效液相色譜法（《中國獸藥典》一部附錄0512）測定。

2.1.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 根據(jù)可疑添加物性質(zhì)，參照藥品國家標準、獸藥國家標準或者獸藥殘留檢測方法標準的條件自建。

2.1.2 對照品溶液的制備 精密稱取目標對照品適量，用甲醇或者其他適宜溶劑配制成每1 mL中含對照品10～50 μg的溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備 固體制劑需研細，稱取細粉適量（如：約相當于一頭動物一次用量）；用甲醇或者其他適宜溶劑（超聲）定量溶解，濾過，精密量取續(xù)濾液定量稀釋（稀釋倍數(shù)要確保不造成儀器污染或光譜圖失真），即得；液體制劑量直接精密量取或稱取適量，稀釋，即得。對于含有高濃度的有機鹽和乳化劑等存在強烈基質(zhì)效應(yīng)輔料的產(chǎn)品，應(yīng)適當增加前處理步驟。

2.1.4 測定法 分別精密吸取上述兩種溶液適量注入液相色譜儀，同時記錄色譜圖與光譜圖；通過與對照品液相色譜圖保留時間、光譜圖的比對，確定供試品溶液中是否含有可疑添加物。

2.1.5 結(jié)果判定 在供試品和對照品濃度接近的情況下，供試品色譜圖中如出現(xiàn)與對照品峰保留時間一致的色譜峰（差異不大于±5%）；在一定的波長范圍內(nèi)，兩者光譜圖無明顯差異；最大吸收波長一致（差異不大于±2 nm），判為檢出非法添加物。

2.2 液相色譜-高分辨質(zhì)譜法 照質(zhì)譜法（《中國獸藥典》一部附錄0431）測定。

2.2.1 液質(zhì)聯(lián)用條件 根據(jù)可疑添加物性質(zhì)自建，采用全掃描方式采集一級質(zhì)譜和二級質(zhì)譜信息。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取目標對照品適量，用甲醇或者其他適宜溶劑配制成每1 mL中含對照品50～500 ng的溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 同2.1.3。

2.2.4 測定法 分別精密吸取上述兩種溶液適量，注入液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，記錄液相色譜圖及一級質(zhì)譜圖與二級質(zhì)譜圖；通過與對照品溶液色譜圖保留時間、質(zhì)譜圖的對比，確定供試品溶液中是否含有可疑添加物。

2.2.5 結(jié)果判定 方法1：供試品色譜圖中如出現(xiàn)與對照品峰保留時間一致的色譜峰（保留時間相對偏差不大于2.5%）；供試品質(zhì)譜圖與對照品質(zhì)譜圖應(yīng)一致（包括分子離子和至少一個碎片離子，質(zhì)量數(shù)差異小于等于5×10-6），判為檢出非法添加物。

方法2：供試品與對照品分子離子峰的質(zhì)量數(shù)偏差不大于5×10-6，且二級質(zhì)譜圖與對照品的二級質(zhì)譜圖一致，判為檢出非法添加物。

2.3 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法 照質(zhì)譜法（《中國獸藥典》一部附錄0431）測定。

2.3.1 液質(zhì)聯(lián)用條件 根據(jù)可疑添加物性質(zhì)自建，采用離子掃描（SRM）或多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）。定性離子對選用獸藥殘留檢測方法標準中的定性離子對或者符合至少4個（非禁用藥3個）識別點數(shù)的要求。

2.3.2 對照品溶液的制備、供試品溶液的制備同2.2.2和2.1.3。

2.3.3 測定法 分別精密吸取上述兩種溶液適量，注入液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，記錄特征離子質(zhì)量色譜圖；通過與對照品溶液色譜圖保留時間、離子豐度比的對比，確定供試品溶液中是否含有可疑添加物。

2.3.4 結(jié)果判定 供試品色譜圖中如出現(xiàn)與對照品峰保留時間一致的色譜峰（差異不大于±2.5%）；供試品離子豐度比應(yīng)與對照品的一致，允許偏差范圍符合表1 的要求，判為檢出非法添加物。

表1 離子豐度比的允許偏差范圍