溫慧敏，尹小娟，楊 沙，馮光富，陳詩韻

0 引言

小兒骨傷發(fā)病率遠(yuǎn)高于成人，是造成兒童殘疾和死亡的重要原因之一[1]。小兒傷科方是四川省骨科醫(yī)院臨床專家、全國重點(diǎn)專科專病(兒童骨科)學(xué)術(shù)帶頭人王英主任醫(yī)師基于中醫(yī)活血化瘀代表方劑-桃紅四物湯加減擬定的小兒骨折協(xié)定處方。臨床證實(shí)其在治療兒童閉合性骨折方面具有顯著的效果。但通過臨床觀察，閉合性骨折患兒在服用小兒傷科方時(shí)依從性較差，其主要原因?yàn)闇珓﹦┬涂诟胁?，攜帶不便，且每日服用劑量也較大。為了滿足臨床兒科的特殊需求，本團(tuán)隊(duì)在前期研究中將小兒傷科湯劑開發(fā)為泡騰顆粒，現(xiàn)通過對(duì)比觀察小兒傷科湯劑與小兒傷科泡騰顆粒對(duì)閉合性骨折模型大鼠的治療效果，擬為小兒傷科泡騰顆粒臨床應(yīng)用和開發(fā)提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康SPF級(jí)6～8周齡SD大鼠45只，體重(260±20) g，雄性，購于成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK(川)2015-030。試驗(yàn)前在照明12 h、通風(fēng)良好的條件下適應(yīng)性飼養(yǎng)觀察7 d。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料 小兒傷科湯劑，四川省骨科醫(yī)院藥劑科自制；小兒傷科方泡騰顆粒(實(shí)驗(yàn)室自制)；生理鹽水購于成都市科隆化學(xué)品有限公司，批號(hào)：100503。大鼠血清鈣試劑盒(批號(hào)：20190423)、血清磷試劑盒(批號(hào)：20190423)、血清堿性磷酸酶(ALP)試劑盒(批號(hào)：20190423)均購于中生北控生物科技股份有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 重力造模骨折器(實(shí)驗(yàn)室自制)；BT1250型十萬分之一電子天平購于北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；PL-203型電子天平購于上海梅特勒-托利多儀器有限公司；Neofuge 15R型臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(Heal Force)；X線攝片機(jī)(四川省骨科醫(yī)院放射科提供)。

1.4 造模方法 參考文獻(xiàn)[2]，采用重力造模法進(jìn)行造模。造模前選取右側(cè)脛骨進(jìn)行備皮，以3%戊巴比妥鈉溶液按0.2 ml/100 g體重腹腔注射進(jìn)行麻醉，仰臥位固定大鼠于帶有1.5 cm縫隙的模板上，脛骨橫跨縫隙，皮膚表面覆蓋紗布，用重力500 g砝碼于30 cm處自由下落，沖擊脛骨造成脛骨中下段骨折。

1.5 分組方法 根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表原則，將模型大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、湯劑組和顆粒組，每組各15只。

1.6 干預(yù)方法 所有大鼠在造模完成后均行外夾板固定。湯劑組大鼠采用小兒傷科湯劑進(jìn)行灌胃，顆粒組采用小兒傷科方泡騰顆粒進(jìn)行灌胃，依照臨床用藥劑量進(jìn)行折算給藥(8 g/kg，按生藥量計(jì))，對(duì)照組大鼠給予同體積溫開水灌胃進(jìn)行對(duì)照。試驗(yàn)期間，每天定時(shí)按劑量灌胃給藥1次，記錄其飲水量和采食量及行為表現(xiàn)。

1.7 觀察指標(biāo)

1.7.1 血清生化指標(biāo) 分別在治療14 d、28 d、35 d時(shí)，每組隨機(jī)選取5只大鼠，以3%戊巴比妥鈉溶液按0.2 ml/100 g體重腹腔注射進(jìn)行麻醉，采集腹主動(dòng)脈血10 ml，在3 000 r/min下離心10 min，利用試劑盒檢測(cè)血清鈣、血清磷、血清ALP指標(biāo)，并記錄。

1.7.2 X片檢查 采集腹主動(dòng)脈血后，放血處死大鼠，送至四川省骨科醫(yī)院放射科進(jìn)行X攝片檢查，觀察骨折愈合情況，以Lane-Sandhu X射線評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[3]評(píng)價(jià)骨缺損修復(fù)情況。

2 結(jié)果

2.1 三組大鼠血清生化指標(biāo)比較 治療14 d時(shí)，三組大鼠血清鈣、血清磷、血清ALP指標(biāo)分別比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療35 d時(shí)，湯劑組和顆粒組大鼠血清鈣指標(biāo)低于對(duì)照組(P<0.05)。但湯劑組和顆粒組大鼠比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療28 d、35 d時(shí)，湯劑組和顆粒組大鼠血清ALP高于對(duì)照組(P<0.05)。見表1～表3。

表1 三組大鼠血清鈣指標(biāo)比較(mmol/L)

表2 三組大鼠血清磷指標(biāo)比較(mmol/L)

表3 三組大鼠血清ALP指標(biāo)比較(U/L)

2.2 三組大鼠Lane-Sandhu評(píng)分比較 治療14 d時(shí)，三組大鼠Lane-Sandhu評(píng)分比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療28 d、35 d時(shí)，湯劑組和顆粒組大鼠Lane-Sandhu評(píng)分均高于對(duì)照組(P<0.05)，但湯劑組和顆粒組大鼠Lane-Sandhu評(píng)分比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表4。

表4 三組大鼠Lane-Sandhu評(píng)分比較(分)

3 討論

小兒傷科方由桃仁、紅花、當(dāng)歸、生地黃、川芎、赤芍、牡丹皮、川木通、酒大黃、延胡索、川楝子、茯苓、三七等中藥組成。方中桃仁、紅花、川芎活血化瘀，生地、當(dāng)歸、赤芍可加強(qiáng)活血化瘀作用，并且當(dāng)歸具有補(bǔ)血養(yǎng)肝之功，赤芍有涼血消腫之效[4-6]。延胡索活血，行氣，止痛，川楝子可增強(qiáng)行氣止痛之功[7]。諸藥共奏活血化瘀，行氣止痛之功。臨床實(shí)踐證明，小兒傷科方對(duì)兒童骨折的愈合、骨性關(guān)節(jié)炎的防治具有良好的效果。相比于傳統(tǒng)湯劑，顆粒劑可滿足兒童服藥特殊要求，并且具有生產(chǎn)方便、服用量小、不易霉變、易攜帶等優(yōu)勢(shì)[8]。但這兩種制劑是否具有同等的治療效果，尚未見報(bào)道。為了解決這一問題，本研究選取幼年大鼠作為研究對(duì)象，通過制作閉合性骨折模型，對(duì)比分析了小兒傷科湯劑和小兒傷科泡騰顆粒對(duì)模型大鼠的治療效果。

本研究結(jié)果顯示，治療35 d時(shí)，湯劑組和顆粒組大鼠血清鈣指標(biāo)低于對(duì)照組，但湯劑組和顆粒組大鼠比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。治療28 d、35 d時(shí)，湯劑組和顆粒組大鼠血清ALP明顯高于對(duì)照組，但湯劑組和顆粒組大鼠比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果表明，小兒傷科湯劑和小兒傷科泡騰顆粒對(duì)加速鈣沉積具有積極的作用。骨折發(fā)生后，在破骨細(xì)胞活動(dòng)下，鈣離子釋放入血，使血中鈣離子升高，隨著骨折的愈合，血中鈣離子逐漸降低，鈣鹽沉積[9-10]。相比于僅做內(nèi)固定干預(yù)的對(duì)照組大鼠，無論是使用湯劑還是顆粒進(jìn)行干預(yù)，其均具有降低鈣離子、加速鈣鹽沉積的作用，并且二者效果等同。既往研究認(rèn)為，骨折愈合過程中，磷離子呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢(shì)，在4～5周達(dá)到高峰[11]。本研究尚未發(fā)現(xiàn)小兒傷科湯劑或小兒傷科泡騰顆粒對(duì)磷離子存在顯著影響，這可能是觀察時(shí)間較短所致。但也應(yīng)看到，小兒傷科湯劑和小兒傷科泡騰顆粒對(duì)磷離子的影響效果是等同的。目前認(rèn)為，ALP是反映成骨細(xì)胞功能和分化程度的指標(biāo)之一，ALP表達(dá)的升高可作為成骨細(xì)胞成熟的標(biāo)志之一[12]。本研究結(jié)果提示，小兒傷科湯劑和小兒傷科泡騰顆?？稍诠钦塾线^程中促進(jìn)成骨細(xì)胞成熟，且二者具有等同的效果。

X片結(jié)果顯示，治療28 d、35 d時(shí)，湯劑組和顆粒組大鼠Lane-Sandhu評(píng)分均明顯高于對(duì)照組，但湯劑組和顆粒組大鼠Lane-Sandhu評(píng)分比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Lane-Sandhu X射線評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)從骨形成、骨連接、骨塑形3個(gè)方面對(duì)骨折愈合情況進(jìn)行形態(tài)學(xué)上的評(píng)價(jià)，是目前動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究中用于反映骨折愈合的常用指標(biāo)之一[13]。

綜上所述，小兒傷科湯劑與小兒傷科泡騰顆粒治療閉合性骨折模型大鼠效果無顯著差異，為小兒傷科泡騰顆粒的臨床應(yīng)用和開發(fā)提供了數(shù)據(jù)支持。